人群日本血吸虫病再感染与优势抗体应答的研究

目的 :为研究日本血吸虫病流行区人群中特异性抗体水平是否为再感染的危险因素。方法 :选择江西省新建县鄱阳湖一小岛上三个毗邻的自然村作为观察试区 ,调查 196名 ( 3- 2 5岁 )感染者中 ,吡喹酮治疗后粪检阴性的 138人经过一个感染季节后再感染的情况 ,并检测其血清特异性同型限制性抗体水平。同时就人群接触疫水的暴露水平及年龄因素、血样中特异的同型限制性抗体水平诸因素同再感染的关系进行非条件 logistic回归分析。结果 :虫卵可溶性抗原和粗制成虫抗原特异的 Ig G4抗体水平是再感染发生的危险因素 ,危险度分别是 2 .83和 2 .4 0。结论 :本研究结果可能成为构建对再感染易感状态作预测性诊断试验的基础。

日本血吸虫慢性感染致CD_4^+ T细胞凋亡的分子基础

目的 立足于全基因水平考察日本血吸虫慢性感染小鼠CD+4T细胞的凋亡相关基因的变化。方法 采用三色流式细胞术结合高密度寡核苷酸芯片 (Affemetrix芯片 ) ,对日本血吸虫感染 13周的小鼠脾脏中的CD+4T细胞进行凋亡观察及基因转录分析 ,获得凋亡相关基因的表达图谱。结果 日本血吸虫慢性感染小鼠CD+4T细胞的凋亡率均明显高于正常小鼠 (P <0 0 1) ;感染小鼠的CD+4T细胞中有 2 5个凋亡相关基因与正常小鼠相比有显著性差异 ,包括凋亡促进基因—生长抑制和DNA损伤 -GADD家族和肿瘤坏死因子α诱导蛋白 3,凋亡抑制基因—IAP等。结论 日本血吸虫慢性感染小鼠CD+4T细胞的凋亡可能是导致宿主免疫下调的原因之一。凋亡通路中存在复杂的凋亡促进基因和抑制基因的相互作用 ,其中肿瘤坏死因子α诱导蛋白 3可能是日本血吸虫感染诱导CD+4T细胞凋亡的特征性因子。

用ELISA法研究血吸虫抗体水平时OD值标准化的方法

本研究针对ＥＬＩＳＡ法ＯＤ值易因板与板之间以及实验的天与天的不同而变化的问题，以间接法为例，从反应原理的角度，即用抗原－抗体反应和酶反应动力学公式，推导出校正板间误差的数学公式，并用实验对其进行了验证。

日本血吸虫病流行区人群细胞因子水平的初步研究

为了分析和比较日本血吸虫病流行区人群细胞因子应答水平的差异，提供血吸虫病流行区人群细胞免疫应答特征的基线资料。以鄱阳湖中的南山岛上３个毗邻的自然村为研究现场，根据粪检结果对试区１４～４１岁人群按年龄组随机抽样，选取粪检结果阴性的６５人，粪检阳性的６４人为研究对象。采用全血培养法，以血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）及可溶性成虫粗抗原（ＳＷＡＰ）刺激研究对象的血细胞产生细胞因子，检测培养上清中细胞因子的水平。结果表明，存在对血吸虫抗原刺激不产生相应细胞因子的个体，从细胞因子水平的均值来看，总体上，对ＳＥＡ的细胞因子应答水平较对ＳＷＡＰ的水平为高，每克粪卵数（ＥＰＧ）为０组的细胞因子平均水平显著高于ＥＰＧ大于０组的水平。研究结果提示，存在流行区人群细胞免疫应答水平被下调的可能性，其特征和机制值得进一步研究。

日本血吸虫病流行区人群吡喹酮治疗前后细胞因子水平的研究

[目的 ]观察日本血吸虫病流行区人群的细胞免疫应答状态及吡喹酮治疗对其影响。 [方法 ]采集日本血吸虫病流行区 12 9人 (粪检阳性者 6 4例 ,粪检阴性者 6 5例 ) ,吡喹酮治疗前及治疗后 45d的静脉血 ,以血吸虫成虫和虫卵抗原分别刺激诱生细胞因子 ,检测培养上清中的细胞因子IL 5、IL 10和IFN γ水平。 [结果 ]12 9例中 ,对血吸虫抗原刺激诱生的细胞因子水平粪检阴性组明显高于粪检阳性组 ;治疗后 ,细胞因子诱生水平较治疗前显著升高 ,特别是IL 5和IFN γ。 [结论 ]流行区人群的细胞免疫应答显示总体下调趋势 ;吡喹酮治疗后出现细胞因子水平的明显升高。

血吸虫病再感染免疫状态的研究

过去的许多研究证实，实验动物宿主在初次感染血吸虫后，对重复感染能产生部分抗力，这种对尾蚴攻击感染的抵抗力与初次感染后血吸虫成虫在体内持续存在相伴随，称为伴随免疫现象〔１〕。尽管实验动物模型已经提供了研究血吸虫伴随免疫机制的有用工具，但是由于不同宿主之...

日本血吸虫再感染相关基因克隆的筛选与鉴定

目的：获取编码可能指示再感染倾向的日本血吸虫特异免疫分子的ｃＤＮＡ克隆。方法：用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群高特异性ＩｇＧ４水平的混合血清筛选构建于表达载体λｇｔ１１的日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库，以ＰＣＲ鉴定免疫筛选的阳性ｃＤＮＡ克隆插入片段选择插入片段大的克隆进行序列测定及基因数据库同源性检索。结果与结论：对ｃＤＮＡ文库中约８．６×１０４个噬菌斑进行了筛选，有１１个噬菌斑呈阳性反应，其中有可能编码日本血吸虫的线粒体蛋白的基因克隆及可能与人群日本血吸虫再感染相关的基因克隆等４个日本血吸虫基因克隆。

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。

日本血吸虫线粒体相关蛋白的特性及抗原表位的分析

目的 分析rSj338重组蛋白的氨基酸序列 ,了解该蛋白的特性 ,预测其抗原表位。方法 制备Sj338基因片段并重组入测序载体pGEM T ,对其核苷酸序列进行测定 ,分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析 ,并在BLAST网上进行同源性分析。结果 rSj338基因长 487bp ,含 1个由 45 9bp组成的开放阅读框 ,编码一由 15 3个氨基酸残基组成的多肽 ,分子量为 17 6kDa,氨基酸同源性分析发现 ,重组蛋白与人的线粒体传入受体亚单位氨基酸同源性为 46 % ,与褐鼠线粒体膜受体的前体氨基酸同源性为 44 % ,预测该蛋白的抗原表位位置为2 6～ 32、37～ 46、131～ 136和 147～ 15 1氨基酸肽段。

日本血吸虫病流行区人群特异抗原诱导IFN-γ的应答特征

[目的 ]观察日本血吸虫病流行区人群血吸虫抗原 IFN- γ的应答特征。 [方法 ]选择江西省鄱阳湖中的南山岛上三个毗邻的自然村作为观察试区 ,根据粪检结果对 14～ 41岁人群按年龄组随机抽样 ,选取粪检结果阴性的 6 5人、粪检阳性的 6 4人为研究对象。采用全血培养法 ,检测培养上清中血吸虫抗原特异性的 IFN- γ水平 ,并检测血清中特异性抗体水平。 [结果 ]化疗后 ,人群 IFN-γ诱生水平较化疗前显著升高 ;未再感染组 SEA特异的 IFN-γ水平显著高于再感染组 ;SEA特异的 IFN -γ水平与抗 SEA的 Ig G4抗体水平之间呈显著负相关。 [结论 ]本研究结果提示

日本血吸虫(中国大陆株)虫卵cDNA文库的构建

应用定向克隆方法，将日本血吸虫虫卵ｃＤＮＡ片段重组入噬菌体载体λｇｔ１１Ｓｆｉ－Ｎｏｔ的ＥｃｏＲⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切位点之间。所构建的基因表达文库的容量为１．０７×１０７重组子。经含有ＩＰＴＧ及Ｘ－Ｇａｌ的颜色选择平皿测定，初步提示重组效率达１００％。

日本血吸虫病流行区再感染人群血清IgG_4抗体的特异性免疫识别

目的对构建人群再感染易感性的预测系统提供有价值的信息。方法采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术，以日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群的４３份血清中ＩｇＧ４抗体，对日本血吸虫的可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）和可溶性成虫粗抗原（ＳＷＡＰ）进行免疫识别。结果ＳＥＡ中２００ｋｕ、７０ｋｕ及５５～６０ｋｕ蛋白组分和ＳＷＡＰ的８７ｋｕ蛋白组分被２１份以上血清的ＩｇＧ４抗体识别。结论上述血吸虫蛋白分子可能是人群日本血吸虫病再感染易感状态相关的抗原表位。

日本血吸虫病流行区人群特异性IL-4和IL-5的应答特征

目的 观察日本血吸虫病流行区人群血吸虫抗原特异性 IL - 4和 IL - 5的应答特征。方法 选择江西省鄱阳湖中南山岛上 3个毗邻的自然村作为观察试区 ,根据粪检结果对 14～ 41岁人群按年龄组随机抽样 ,选取粪检结果阴性的 6 5人、粪检阳性的 6 4人为研究对象。采用全血培养法 ,检测培养上清中血吸虫抗原特异性 IL - 4和 IL - 5水平 ,并检测血清中特异性Ig E抗体水平。结果 无感染组的 IL - 4和 IL - 5水平显著高于感染组 ;IL - 4和 IL - 5之间呈显著正相关 ,可溶性成虫抗原( SWAP)特异性 Ig E与 IL - 4和 IL - 5呈显著正相关。结论 IL - 4和 IL -

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

目的为探索血吸虫病疫苗的新路径,对日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定。方法分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的一cDNA片段(Sj338/24)的开读框序列,在其上下游分别设计引物A和B,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后将该片段重组于pGEM-T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX-6P-1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。结果该目的基因PCR产物全长共487bp,其开读框由459bp组成,编码153个氨基酸残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现,Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质料pPEX-6P-1/Sj338能高效融合表达,融合蛋白的分子量为43kDa。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。结论·Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因,重组蛋白有望成为新的疫苗侯选分子。

基因表达谱芯片分析日本血吸虫感染慢性期CD4^+细胞的应答特征

目的 立足于全基因水平考察日本血吸虫慢性感染小鼠CD4+细胞的相关细胞因子的变化 ,探讨其与疾病的相关性。方法 采用高密度寡核苷酸芯片 (Affemetrix芯片 )结合三色流式细胞术 ,对日本血吸虫感染 13周的小鼠脾脏中的CD4+细胞进行基因转录及蛋白表达水平的分析 ,获得相关细胞因子的变化图谱。结果 日本血吸虫慢性感染小鼠CD4+细胞中IL 4的转录及蛋白表达水平均明显高于正常小鼠 (P <0 .0 5) ,尤其以可溶性虫卵抗原刺激后最为显著 (P <0 .0 1) ;感染小鼠IFN γ的转录及蛋白表达水平也有所增高 ,但不及IL 4的升高程度 ;IL 10、IL 1β、小诱导细胞因子(smallinduciblecytokine)等因日本血吸虫的感染而升高 ,但TGF β1呈下降趋势。结论 日本血吸虫慢性感染小鼠细胞因子分泌谱表现为Th1和Th2型细胞因子并存的格局 ,但以Th2应答为主。