CMTM4在口腔鳞状细胞癌发生发展中的作用及机制研究

目的探讨CMTM4对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的影响。方法采用免疫组织化学法分析CMTM4在OSCC组织中的表达情况,卡方检验及费希尔精确概率检验分析CMTM4表达差异与患者各临床病理参数的关系。在OSCC细胞系HN6和CAL27中分别转染CMTM4过表达质粒及敲低质粒,观察CMTM4过表达和敲低时对细胞表型行为的影响。通过CCK8实验、平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell侵袭实验分析HN6及CAL27细胞生物学行为的变化。通过蛋白免疫印迹实验检测CMTM4改变后细胞周期相关蛋白及AKT通路蛋白的变化情况。裸鼠皮下成瘤实验进一步验证CMTM4对OSCC体内成瘤的作用。结果与癌旁组织相比,CMTM4在OSCC组织中高表达,且CMTM4表达差异与患者的年龄、临床分期及病理分级显著相关(P<0.001)。在HN6和CAL27细胞中,与对照组相比,CMTM4过表达后细胞的增殖速度变快,迁移和侵袭能力更强。相对应地,当CMTM4敲低后,与对照组相比,HN6和CAL27细胞的增殖、迁移、侵袭能力均下降。过表达CMTM4后细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和Cyclin D1以及AKT通路相关蛋白pAKT表达也有所升高。CMTM4敲低后这些蛋白表达水平明显降低。动物实验结果显示,与对照组相比,CMTM4过表达后OSCC细胞体内成瘤体积增大,CMTM4敲低后成瘤体积明显减小。结论CMTM4在OSCC组织中高表达,可以促进OSCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力,可能通过调控细胞周期及AKT通路发挥作用。

Notch1^(P1641S)突变通过PI3K/Akt通路促进口腔鳞癌增殖

目的 探究Notch1^(P1641S)突变对口腔鳞状细胞癌的影响。方法 体外培养口腔鳞癌细胞系CAL27与HSC3,构建Notch1^(N1)(N1-N1)、Notch1^(WT)(N1-WT)及Notch1^(P1641S)(N1-P1641S)位点突变质粒,将质粒转染细胞系中。通过qPCR及Westen blot实验检测细胞系的转染效率。表型实验通过CCK-8、集落形成实验、划痕实验、EdU、Transwell实验检测P1641S位点突变后对口腔鳞癌细胞系的增殖、迁移、侵袭的影响。通过Westen blot检测转染突变质粒后对细胞通路的影响。通过裸鼠皮下成瘤实验进一步验证突变质粒对口腔鳞癌的影响。结果 表型实验结果显示转染突变质粒后,相较于N1-N1组及N1-WT组,N1-P1641S组口腔鳞癌细胞系的增殖、迁移、侵袭能力均增强。Westen blot实验结果显示转染突变质粒后,N1-P1641S组PI3K/Akt相关指标表达上调。裸鼠皮下成瘤实验显示转染突变质粒后,裸鼠成瘤体积增大,增殖相关指标Ki67表达增强。结论 Notch1^(P1641S)表达位点突变通过PI3K/Akt信号通路促进口腔鳞癌细胞增殖。

FBXW7通过抑制c-Myc/SOX2/SLC7A11促进头颈鳞癌细胞铁死亡

目的探究FBXW7对头颈鳞状细胞癌铁死亡的影响。方法体外培养头颈鳞癌细胞系HN4和HN6,构建FBXW7,SOX2过表达质粒,将质粒稳定转染细胞系培养,采用qRT-PCR和Western blot实验分别在转录水平和蛋白水平验证过表达转染效率。通过检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平来验证过表达FBXW7后头颈鳞癌细胞的脂质过氧化水平。用铁死亡抑制剂Fer-1处理细胞后进一步检测细胞活力变化验证FBXW7对铁死亡的影响。通过Western blot检测转染过表达质粒后对细胞通路的影响。结果HN4和HN6细胞系在过表达FBXW7后表现出脂质过氧化水平增加,铁死亡抑制剂Fer-1能够有效逆转过表达FBXW7引起的细胞铁死亡。Western blot实验结果显示过表达FBXW7降低了c-Myc、SOX2和SLC7A11的表达。结论FBXW7通过降解c-Myc来调控SOX2-SLC7A11的表达,从而有效调控头颈鳞状细胞癌铁死亡。

尼妥珠单抗与TPF的联合运用在头颈鳞癌中治疗效果的初步分析

目的 评估尼妥珠单抗联合TPF化疗对比TPF化疗对头颈部鳞状细胞癌患者的疗效是否差异,并初步探讨两种方案相互作用的分子机制。方法 本研究为回顾性研究。收集了62例(2016—2021年)在江苏省口腔医院口腔颌面外科病房进行治疗的Ⅲ~ⅣA期头颈鳞状细胞癌患者,其中30例接受TPF化疗方案前接受300 mg尼妥珠单抗静脉滴注,为A组;其余32例为B组,仅接受TPF治疗。此外取B组进行诱导化疗的部分患者化疗前后的组织蜡块,进行免疫组织化学染色,观察EGFR表达量变化。结果 A组和B组的肿瘤有效缓解率分别为78%和43%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。A组和B组的5年总生存率分别为72.2%和36.6%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。A组和B组的5年无进展生存率分别为63.8%和36.2%。A组的5年无进展生存率与B组差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示相较B组和单用尼妥珠单抗,A组化疗后EGFR表达量下降更为显著。结论 头颈部鳞状细胞癌患者,接受尼妥珠单抗联合TPF化疗比单纯TPF化疗有更好的疗效。尼妥珠单抗靶向治疗与TPF化疗方案间存在一定的协同作用。

右美托咪定对大鼠肋间后动脉穿支皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的初步研究

目的探讨右美托咪定对大鼠背部肋间后动脉穿支皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用。方法将24只SD大鼠随机分成空白对照组(对照组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注右美托咪定干预组(DEX+I/R组)。对照组进行大鼠肋间后动脉穿支皮瓣的制备,I/R组制备皮瓣后予以血管蒂夹闭6 h,DEX+I/R组在进行前述缺血处理后予以右美托咪定100μg/kg干预并于24 h后重复给药。分组手术7 d后,通过大体观察判断皮瓣成活率,以HE染色观察大鼠皮瓣组织病理情况,采用TUNEL荧光染色检测各组大鼠皮瓣组织细胞凋亡情况,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血浆中SOD、MDA含量,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠皮瓣组织中凋亡相关蛋白(C-caspase-3、Bcl-2)、PI3K/Akt通路蛋白(PI3K、pAkt/Akt)表达情况。结果对照组、I/R组及DEX+I/R组大鼠皮瓣的成活率分别为(94.15±2.28)%、(38.15±10.48)%、(57.71±10.22)%。I/R组皮瓣成活率相较于与对照组显著降低(P<0.001);DEX+I/R组相较于I/R组皮瓣成活率显著提高(P=0.006)。在距离血管蒂1 cm处,I/R组皮瓣组织细胞凋亡率相较于对照组升高(P<0.001);DEX+I/R组中皮瓣组织细胞凋亡率较I/R组降低(P<0.001)。在距离血管蒂2 cm处,I/R组皮瓣组织细胞凋亡率相较于对照组升高(P<0.001);DEX+I/R组中皮瓣组织细胞凋亡率较I/R组降低(P=0.004)。I/R组大鼠血清SOD活力相较于对照组降低(P<0.001);与I/R组比较,DEX+I/R组大鼠血清中SOD活力升高(P<0.001);I/R组大鼠血清MDA含量相较于对照组升高(P<0.001);与I/R组相比,DEX+I/R组大鼠血清中MDA含量降低(P<0.001)。I/R组中Bcl-2(P=0.001)、PI3K(P=0.003)、Akt(P=0.023)及pAkt(P=0.002)的蛋白相对表达量相较于对照组明显下降,而C-caspase-3的相对表达量明显上升(P=0.002);DEX+I/R组Bcl-2(P=0.003)、PI3K(P<0.001)、Akt(P<0.001)及pAkt(P<0.001)的蛋白相对表达量相较于I/R组明显增高,而C-caspase-3的表达量下降(P<0.001)。结论右美托咪定对大鼠背部肋间后动脉穿支皮瓣缺血再灌注损伤具有保护作用。

敲低Sec31A对头颈鳞状细胞癌恶性表型的影响

目的探讨敲低Sec31A对头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)恶性表型的影响及可能机制。方法从TCGA数据库中获得HNSCC组织与癌旁组织的转录组测序数据并比较Sec31A的表达水平,免疫组化染色分析Sec31A在HNSCC组织中的表达情况,利用Kaplan-Meier生存分析比较Sec31A与HNSCC患者预后的关系;在HNSCC细胞系HN6、HN4中转染小干扰质粒si-Sec31A、si-NC,通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测Sec31A敲低后对HNSCC细胞生物学行为的影响;通过蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)实验检测HN6及HN4敲低Sec31A后细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达水平的变化;构建HN6-siSec31A和HN6-siNC的转染稳定细胞株接种于裸鼠皮下进一步验证Sec31A在体内的成瘤作用。结果TCGA数据显示Sec31A在HNSCC组织中高于癌旁正常组织(P<0.01),且Sec31A高表达与患者的预后不良显著相关(P<0.05),免疫组化染色显示Sec31A在HNSCC中表达强于正常组织;在HN6和HN4细胞中,敲低Sec31A后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显弱于对照组;通过WB实验发现,HN6、HN4转染si-Sec31A后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低;HN6敲低Sec31A后在裸鼠皮下的移植瘤体积明显小于对照组。结论敲低Sec31A后可以抑制HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭的能力,可能是通过PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。