江苏人群19个STR基因座的遗传多态性

目的 :利用3130遗传基因测序仪的电泳图谱分析江苏人群D21S11、D6S1043、Penta E、PGA、D2S1338、D11S51、D19S433、D12S391、CSF1PO、D3S1358、Penta D、VWA、D13S317、THO1、TPOX、D8S1179、D16S539、D5S818、D7S820 19个STR基因座多态性分布,并计算该19个基因座的基因频率、个体鉴别能力、无偏倚期望杂合度、多态性信息总量和非父排除率。方法:利用PCR扩增,产物通过3130测序仪毛细管电泳。读出数据后用分析软件进行分析。结果:19个STR位点中Penta E的个体鉴别能力值和非父排除率值最高,19个STR位点的累积非父排除率达0.9999以上。结论:通过大量的样本实验和等位基因频率的统计,得出了更加客观的等位基因多态性数据,为江苏地区亲权鉴定的判定提供更加客观的依据。

PTH缺失通过诱导肾脏细胞衰老和衰老相关分泌表型分子表达而加速肾脏纤维化

目的:探究旁甲状旁腺素(Parathyroid hormone,PTH)缺失对肾脏纤维化及其相关机制的影响。方法:采用2月龄野生型(WT)小鼠和PTH基因缺失(PTH^(-/-))小鼠为模型,通过组织病理学染色、免疫组化、Western blot和q RT-PCR等方法,检测并比较两组小鼠肾脏组织中胶原蛋白沉积、细胞增殖、衰老和衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)分子表达的差异。结果:与WT组相比,PTH^(-/-)小鼠肾脏组织中胶原蛋白沉积和I型胶原m RNA表达显著增加。PTH缺失还导致肾脏组织抗氧化酶SOD1表达下降,DNA双链断裂标志分子γ-H2A.X表达和活性氧水平升高。同时,PTH^(-/-)小鼠肾脏组织中细胞增殖标志物Ki67和PCNA表达下调,而细胞周期抑制蛋白p16、p53和衰老相关β-半乳糖苷酶活性升高。除此之外,SASP分子IL-6、MMP3和MMP13在PTH^(-/-)小鼠肾脏中出现明显高表达。结论:PTH缺失能够加速肾脏纤维化进程,其机制可能与诱导肾脏细胞氧化应激、DNA损伤增加,细胞增殖受阻、衰老加剧,以及SASP分子表达上调有关。该研究揭示了PTH在维持肾脏稳态中的重要作用。

长非编码RNA GMDS-DT在骨质疏松发生中的作用和机制探索

目的:探究长非编码RNA(LncRNA)GMDS-DT在骨质疏松发生发展中的作用及其潜在分子机制。方法:利用测序筛选并通过qRT-PCR验证GMDS-DT在正常和骨质疏松(Osteoporosis,OP)患者椎体松质骨组织中的表达情况。通过qRT-PCR检测GMDS-DT在不同月龄小鼠体内的表达情况。在骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSC)中,利用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)及质粒敲低或过表达GMDS-DT,通过Western Blot、qRT-PCR、MTT、克隆形成、EDU、流式细胞术和成骨分化诱导实验检测其对BMSC衰老、增殖、成骨分化及氧化应激产生的影响。通过RNA pull-down和RIP实验分析GMDS-DT与HNRNPA1之间的调控关系。结果:GMDS-DT在OP BMSC中的表达显著下调,小鼠BMSC中GMDS-DT水平随着月龄的增大也明显下降。在BMSC中敲低GMDS-DT减弱细胞抗氧化能力,抑制其增殖和成骨分化,促进BMSC衰老,而过表达能缓解这些影响。机制研究发现,GMDS-DT经HNRNPA1促进BMSC抗氧化酶类基因的表达,增强细胞的增殖和成骨分化能力,延缓细胞衰老。结论:LncRNA GMDS-DT通过其抗氧化作用,调节BMSC的增殖和分化能力,延缓骨质疏松的发生发展。

Chk2在Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用和机制研究

目的:探究细胞周期检测点激酶2(cell-cycle checkpoint kinase 2,Chk2)在B淋巴瘤Mo-MLV插入区1(B cell-specific MLV integration site-1,Bmi1)缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用及可能的机制。方法:取5周龄WT、Bmi1^(-/-)、Chk2^(-/-)、Bmi1^(-/-)Chk2^(-/-)小鼠肾脏,采用HE染色观察肾脏结构变化,采用免疫荧光和Masson染色观察肾脏纤维化情况,采用衰老相关β半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色观察肾脏衰老情况,采用免疫组化染色和western blot观察肾脏超氧化物歧化酶1(Superoxide Dismutase 1,SOD1)、超氧化物歧化酶2(Superoxide Dismutase 2,SOD2)表达水平和定位。从5周龄WT、Bmi1^(-/-)、Chk2^(-/-)、Bmi1^(-/-)Chk2^(-/-)小鼠肾脏皮质中提取和分离原代肾小管上皮细胞,采用免疫荧光和western blot检测其SOD1、SOD2表达水平。结果:与WT小鼠肾脏组织相比,Bmi1^(-/-)小鼠肾脏组织表现为体积变小、肾脏皮质厚度减少、肾小球数量减少,β-gal活性增加,SOD1和SOD2水平降低;与Bmi1^(-/-)小鼠肾脏相比,Bmi1^(-/-)Chk2^(-/-)小鼠肾脏体积增大、肾脏皮质厚度增加,肾小球数量增多,β-gal活性降低,SOD1和SOD2水平增加。与WT小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比,Bmi1^(-/-)小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中SOD1和SOD2水平;与Bmi1^(-/-)小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比,Bmi1^(-/-)Chk2^(-/-)小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中抗氧化指标SOD1和SOD2增加。结论:Chk2通过抑制肾小管上皮细胞的抗氧化能力促进Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化。

长非编码RNA SNHG18对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响

目的:探究长非编码RNA SNHG18对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中lncRNA SNHG18的表达;采用MTT和克隆形成试验观察转染SNHG18过表达质粒后胃癌细胞BGC823增殖活力的变化;通过流式细胞术检测lncRNA SNHG18对胃癌细胞BGC823凋亡的影响。结果:相较于癌旁组织和胃正常粘膜上皮细胞系GSE-1,胃癌组织及胃癌细胞系中SNHG18的表达水平显著降低(P<0.05);胃癌细胞过表达SNHG18增殖活力以及克隆形成的能力均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论:胃癌组织中长非编码RNA SNHG18呈低表达,可促进胃癌细胞增殖并抑制其凋亡,可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。

长非编码RNA SNAI3-AS1调控人软骨细胞C28/I2增殖能力及退变的机制研究

目的:为了探究长非编码RNA SNAI3-AS1(LncRNA SNAI3-AS1,即SNAI3-AS1)在骨性关节炎(osteoarthritis,OA)进展中的作用与机制。方法:通过全转录组测序筛选出在OA中差异表达的lncRNA SNAI3-AS1,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNAI3-AS1在软骨细胞退变模型中的表达情况。在软骨细胞C28/I2中分别转染SNAI3-AS1特异性si RNA或真核过表达质粒,分别敲低或过表达SNAI3-AS1,通过MTT、平板克隆形成和EdU掺入实验检测细胞增殖活力,Western Blot检测炎症和细胞外基质蛋白的表达情况。通过生物信息学网站预测SNAI3-AS1相互作用的miRNA和下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因和RIP实验进行验证。结果:相较于正常软骨细胞,SNAI3-AS1的表达水平在OA中显著下调。敲低正常软骨细胞中SNAI3-AS1的表达后,软骨细胞的增殖能力减弱并促进了软骨细胞的退变,而在OA模型的软骨细胞中过表达SNAI3-AS1后,软骨细胞的增殖活力加强并抑制了软骨细胞的退变。在机制上,SNAI3-AS1可充当竞争性内源性RNA(ceRNA),经海绵吸附miR-2278间接上调PRELP,发挥促进软骨细胞增殖和抑制其退变的作用。结论:LncRNA SNAI3-AS1通过LncRNA SNAI3-AS1/miR-2278/PRELP轴参与骨性关节炎的发生发展过程。

活性维生素D缺乏诱发与衰老相关的特发性肺纤维化

目的:研究活性维生素D缺乏致小鼠肺纤维化的作用与机制。方法:取7周龄同窝野生型(Wild Type,WT)小鼠,维生素D缺乏(1α(OH)ase^(-/-))小鼠置于肺功能检测仪器中,对其吸气时间,最大吸气流速、呼出50%气量时对应的呼气流速、潮气量、分钟通气量,呼吸频率等指标进行分析。培养小鼠原代肺成纤维细胞,按基因型分为对照组、活性维生素D缺乏组,之后分组检测细胞SA-β-gal阳性率。另外取小鼠肺组织样本多聚甲醛固定后脱水浸蜡以制作石蜡组织切片,对各组切片进行HE、Masson染色以观察肺的组织学形态的变化,使用免疫组织化学观察肺组织中的衰老相关蛋白(p16、p53)的表达量差异。结果:相较于同窝WT小鼠,1α(OH)ase^(-/-)小鼠通气功能显著减弱,肺成纤维细胞衰老程度和肺组织纤维化程度均有不同程度增加,且免疫组化结果显示肺组织中与衰老相关的p53及p16阳性的细胞也显著增加。结论:活性维生素D的缺乏能够诱发与衰老相关的特发性肺纤维化,可能的机制是通过激活p53/p16信号引发肺成纤维细胞提前衰老,继而引起肺组织异常纤维化。