30株医院感染病原菌对醋酸氯己定抗性研究

[目的]研究临床分离致病菌抗药基因情况及其对醋酸氯己定的抗性水平。[方法]采用PCR方法测定qacEΔ1-sulⅠ基因,通过MIC、MBC两种试验进行比较,观察不同菌株的抗力水平。[结果]临床分离的30株病原菌,其中13株携带qacEΔ1-sulⅠ基因。MIC有8株高于标准菌株,19株与标准菌株相同。MBC结果显示共有18株高于标准菌株,5株与标准菌株相同。[结论]临床分离的30株病原菌部分携带qacEΔ1-sulⅠ基因,多数菌株对醋酸氯己定消毒液的抗力较高。

鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对消毒剂抗性研究

目的研究临床分离的鲍曼不动杆菌携带抗药基因qacE△1-sulI情况及对消毒剂抗性水平。方法采用PCR法和肉汤稀释法分别检测临床分离鲍曼不动杆菌qacE△1-sulI基因和对消毒剂抗性变化,并与大肠杆菌标准菌株进行比较。结果临床分离的7株鲍曼不动杆菌中,4株qacE△1-sulI基因阳性,3株阴性。醋酸氯己定对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为2mg/L^4mg/L,MBC值为4mg/L^125mg/L,均高于大肠杆菌标准株。对氯间二甲基苯酚对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为78mg/L^156mg/L;苯扎溴铵对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为9.8mg/L^19.5mg/L;聚维酮碘与聚醇醚碘对7株鲍曼不动杆菌的MIC值与标准菌株相同,分别为1000mg/L和500mg/L,均未超过标准菌株。结论鲍曼不动杆菌携带qacE△1-sulI基因携带率较高,抗药基因阳性的菌株对多数消毒剂耐受浓度增加。

铜绿假单胞菌抗药基因检测及其对消毒剂抗性研究

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌携带的抗药基因情况及其与消毒剂的抗性关系和水平。方法采用PCR方法和肉汤稀释法分别检测临床分离铜绿假单胞菌qacE△1-SulI基因和对消毒剂抗性变化,并与铜绿假单胞菌标准菌株进行了平行比较。结果临床分离的6株铜绿假单胞菌中,有5株检出qacE△1-SulI基因阳性,抗药基因携带率达到83%以上。醋酸氯己定对6株临床分离铜绿假单胞菌的MIC值为7.8mg/L,与标准菌株相同;对氯间二甲苯酚对其中1株临床分离株的MIC高于标准菌株,但有2株低于标准株;苯扎溴铵对6株临床分离的铜绿假单胞MIC均低于标准株;聚维酮碘对5株qacE△1-SulI基因阳性菌株的MIC值与标准菌株相同,但抗药基因阴性菌株的MIC值低于标准株。结论临床分离的铜绿假单胞菌多数携带qacE△1-SulI基因,该抗药基因的携带与其对消毒剂的抗性有一定的相关性。

治疗自身免疫性疾病多肽药物的研究进展

近年来研究发现,靶向于特异表位的多肽药物治疗自身免疫病,可避免传统药物的非特异性免疫抑制,在自身免疫病动物模型及临床试验中显示出较好的治疗效果。该文从抑制自身免疫反应的候选多肽来源及其作用机制等方面,综述了近年来治疗自身免疫病多肽药物的研究进展和趋势,为全面深入了解自身免疫病免疫耐受机制及寻求新的治疗方法提供理论依据。

两种临床分离细菌对醋酸氯己定抗力测定

目的研究医院临床分离致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对醋酸氯己定的抗性力水平。方法采用肉汤稀释法测定两种16株临床分离细菌对醋酸氯己定抗力水平，并同相应标准菌株作平行比较。结果大肠杆菌临床株对醋酸氯己定的MIC为1～2mg／L，标准菌株对醋酸氯己定的MIC为2mg／L；有3株大肠杆菌的MIC低于标准菌株。金黄色葡萄球菌临床株对醋酸氯己定的MIC为0．98～1．95mg／L，标准株对醋酸氯己定的MIC为0．98mg／L；有2株临床株的MIC高于标准菌株。大肠杆菌临床株对醋酸氯己定的MBC为4～8mg／L，标准菌株对醋酸氯己定的MBC为2mg／L；大肠杆菌临床株的MBC均高于标准菌株。金黄色葡萄球菌临床株对醋酸氯己定的MBC为15．6～125mg／L，标准菌株的MBC为62．5mg／L；有3株金黄色葡萄球菌临床株MBC高于标准株。结论临床分离的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对醋酸氯己定抗力多数比标准株强，只有个别菌株低于标准株。

人乳头瘤病毒E7与人干扰素α-2b融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)11-E7及人干扰素(IFN)α-2b的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。方法:同时用KpnⅠ、EcoRⅠ酶切pET-32a-IFNα-2b-linker-HPV11-E7及pcDNA3.1,将酶切产物纯化回收,两者的回收产物进行连接反应。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定;用脂质体法转染CHO细胞,用免疫荧光法检测融合基因的表达。结果:DNA测序结果显示,成功地将IFN-α-2b-linker-HPV11-E7装入pcDNA3.1的KpnⅠ、EcoRⅠ酶切位点之间,且其序列与设计完全一致;激光扫描共聚焦显微镜观察可见目的蛋白的表达。结论:成功地构建了HPV11-E7及IFNα-2b的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,为提高DNA疫苗免疫效果的研究奠定了基础。

MicroRNA-21在自身免疫性疾病中的调节作用与机制

MicroRNAs(miRNAs)是一类具有调控功能的小分子非编码RNA,其介导的基因表达对于维持正常细胞的增殖、分化、凋亡以及维持免疫系统的稳定有着重要作用。大量研究结果表明,miR-21通过Toll样受体(TLR)信号途径参与了固有免疫应答和炎症调节,而且它还可以通过多种方式对免疫细胞的生长、分化等产生影响。近年来,关于miR-21在自身免疫性疾病中的作用及其机制研究备受关注,本文对miR-21调节免疫反应及其对几种常见自身免疫性疾病的调节作用进行了综述。

2例艾滋病新发感染的实验室检测分析

目的分析艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)确证实验中不确定结果的免疫印迹带型,为诊断新发感染提供实验室数据。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹试验(WB)按照试剂说明书及《全国艾滋病检测技术规范》(2004年版)进行,HIV-1病毒载量检测使用罗氏公司的HIV-1 1.5 version试剂盒。结果在感染的早期,血清中的抗体含量较低,ELISA检测时的OD值仅为CUTOFF值的2.5至3倍,但在感染2-3个月后,抗体水平显著升高。在第2次检测中OD值升高,WB条带颜色加深,条带数目增加。结论为了避免二代传播的发生和早期感染者的流失,应适当缩短随访复检的时间。

H3N2流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达及其对293T细胞增殖的影响

目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1(nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白;探讨NS1对细胞增殖的影响。方法 :从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实NS1蛋白的表达。MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用。结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础。

白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制。方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响。结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系。白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白cyclinD1的表达,上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达。结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖。白藜芦醇可通过调节细胞周期蛋白cyclinD1,P21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖。

人端粒酶逆转录酶与热休克蛋白70融合表达载体的构建及原核表达

目的:构建热休克蛋白70(HSP70)与人端粒酶逆转录酶融合表达载体,在大肠杆菌进行表达。方法:利用PCR方法扩增hTERT基因片段(532aa～637aa),双酶切后插入原核表达载体pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ位点之间,形成pET32a-hTERT质粒。通过PCR方法扩增人HSP70全长cDNA,双酶切后插入pET32a-hTERT的EcoRⅠ和HindⅢ位点之间,构建hTERT与HSP70的N端融合基因原核表达质粒pET32a-hTERT-HSP70。含有该质粒的大肠杆菌BL21经异丙醛-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:成功的扩增了HSP70基因与hTERT基因片段;测序结果表明成功的构建了pET32a-hTERT-HSP70原核表达载体。含有该质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达约110 kD的蛋白。结论:HSP70与人端粒酶逆转录酶融合表达质粒构建成功,并成功获得了融合蛋白hTERT-HSP70。

基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。

三种革兰阴性杆菌耐消毒剂基因检测及对苯扎溴铵抗性研究

目的研究临床分离致病菌抗药基因情况及其对消毒剂的抗性水平。方法采用基因扩增法和肉汤稀释法分别检测了三种21株革兰阴性杆菌的耐消毒剂基因和苯扎溴铵最低抑菌浓度及最低杀菌浓度。结果临床分离的铜绿假单胞菌、大肠杆菌和鲍曼不动杆菌等21株三种革兰阴性杆菌,其中有13株携带耐消毒剂基因,携带率为61.9%。7株铜绿假单胞菌对苯扎溴铵M IC均低于标准菌株,共有7株菌的MBC高于标准菌株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌多数携带耐消毒剂基因,有33.3%的菌株对苯扎溴铵的MBC高于标准株,提示其抗力有所增强。

三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因检测及其对碘伏的抗性研究

目的了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性。方法采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测。结果临床分离的三种21株革兰阴性杆菌中,检出抗消毒剂基因(qacEΔ1-su lⅠ)阳性菌株有13株,阳性率为61.9%;三种菌抗消毒剂基因携带率之间无明显差别,大肠杆菌标准株抗消毒剂基因检测阴性。有1株抗消毒剂基因阳性的铜绿假单胞菌对碘伏的最小抑菌浓度明显高于其标准株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带率比较高,但其对碘伏消毒剂的抗性未观察到明显变化。