多色荧光原位杂交及其在遗传毒理学中的应用

多色荧光原位杂交 (MFISH)在检测核酸序列、染色体和基因方面有着强大功能。由于染色体结构和数目畸变被认为是遗传毒性研究重要的生物学终点 ,而该方法可准确直观地评价暴露于职业、医疗和环境毒物后的染色体异常 ,因此以其为基础的各类方法在人类遗传学、生殖医学、尤其是遗传毒理学中将会得到广泛的应用。

SOS/Umu试验及其应用

SOS Umu试验 (又称umu试验 )是 80年代中期发展起来的检测环境诱变物的短期筛选试验 ,它是基于DNA损伤物诱导SOS反应而表达umuC基因的基础上建立起来的。该方法具有快速、敏感、廉价等优点 ,因而被广泛应用于遗传毒理学研究、酶代动力学分析、环境监测与质量评估以及药效学评价和新药筛选等方面。本文对其实验原理。

尿孕酮酶免法对健康妇女无排卵月经周期的研究

目的 实验观察 38名健康妇女连续 2～ 3个月经周期中无排卵所出现的频率。方法 收集每日第 1次晨尿 ,用酶联免疫法分别测定孕酮在尿中的代谢产物 3-葡萄糖苷酸孕二醇 (pregnanediol- 3- glucuronide,Pd G)、卵泡刺激素 (FSH)以及肌酐 (creatintine,Cr)。结果 发现无排卵人数所出现的频率为 7.90 % ,无排卵周期发生的频率为 7.6 9%。无排卵周期与正常排卵周期相比 ,FSH浓度在卵泡早期显著降低 ,孕酮的分泌始终维持在较低的水平。结论 可以用尿孕酮酶联免疫法研究卵巢功能 ,并对无排卵月经周期进行分析。

TCDD对猕猴妊娠期及其妊娠结局的毒性影响

在雌猴妊娠第 12天采用灌胃法一次性给予TCDD ,剂量为 1 0、2 0、4 0 μg/kg.bw ,每个剂量组 4个动物。对照组(7个动物 )给予相同体积的溶媒 (丙酮 -色拉油 )。结果发现母猴在染毒 10天后相继出现食欲下降、体重降低、脱毛、皮炎和贫血等中毒症状 ,染毒组 12只猴子有 10只在怀孕的第 2 2到 32天发生早期胚胎丢失。结果表明 ,低剂量TCDD可导致妊娠期猕猴出现中毒症状 ,并影响妊娠结局。

人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备及鉴定

目的 建立分泌抗人卵泡刺激素 (FSH) β亚基 5 1～ 6 0片段单克隆抗体细胞株 ,并对单抗进行免疫学鉴定。 方法 以人工合成的FSHβ蛋白抗原决定簇多肽为免疫原 ,采用脾内包埋法免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0小鼠骨髓瘤细胞融合 ,杂交瘤细胞用人工合成的人FSHβ亚基 5 1～ 6 0片段包被、间接ELISA法筛选。结果 获得稳定分泌抗人FSHβ片段单抗细胞 1株 (F1C)。ELISA检测腹水效价为 1∶1.6× 10 4 ,与黄体生成素 (LH)、促甲状腺素 (TSH)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等无交叉反应 ,免疫印迹 (Westernblot)显示该单抗特异性强。结论 本实验所制备的单抗具有良好的灵敏性、特异性和实用性 ,可用于酶免疫检测方法的建立 。

地昔帕明对大鼠海马神经元钾电流的影响

目的研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠海马神经元钾电流的影响,初步探讨其抗抑郁的离子通道机制。方法酶解法急性分离单个大鼠海马神经元,应用全细胞膜片钳技术记录DMI对海马神经元钾电流的影响。结果不同浓度DMI均可抑制海马神经元延迟整流钾电流(IK)和瞬时外向钾电流(IA)的影响,其中,100μmol·L-1DMI明显下移IK和IA电流电压曲线,同时,DMI对IK的抑制率明显高于IA。结论DMI对大鼠海马神经元外向钾电流具有明显的抑制作用,提示这可能是其神经保护的机制之一。

烷基酚类物质的生殖发育毒效应及其作用机制

烷基酚类化合物 (alkylphenolcompounds,APs)因其长期的广泛应用与在环境中的大量滞留 ,已成为最常见的环境污染物之一 ,与之相关的环境内分泌干扰效应已越来越成为关注的热点和亟待研究与解决的问题。本文拟对APs及其相关化合物的生殖内分泌干扰效应和作用机制做初步论述。

微波辐射对小鼠睾丸中微量元素水平的影响

用２４５０ＭＨｚ低强度微波连续辐照雄性小鼠３周，每天３小时。对照组、低、中、高剂量组的微波辐射照剂量分别为０、２３、５５、１０８μＷ／ｃｍ２。研究结果表明，经１０８μＷ／ｃｍ２高剂量微波辐射后，小鼠睾丸中的Ｍｎ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｇ、Ｃａ等元素的含量均较对照组显著降低。在中剂量组，Ｍｎ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｇ含量较对照组显著下降；在剂量２３μＷ／ｃｍ２组中，只有Ｍｎ的含量较对照组降低。因此，低强度微波辐射对小鼠睾丸中微量元素的含量有一定的影响。

地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。

氟化钠致大鼠肾脏脂质过氧化损伤及亚硒酸钠的保护作用

目的研究氟化钠（ＮａＦ）对大鼠肾脏脂质过氧化作用的影响及亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）对氟肾脏毒性的保护作用。方法大鼠经饮水加入ＮａＦ（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）或／和Ｎａ２ＳｅＯ３（１５μｍｏｌ／Ｌ）染毒１２０天，观察氟在机体的蓄积、排泄，尿酶活性及肾脏脂质过氧化水平的变化。结果氟染毒后，大鼠血氟水平、尿氟水平、骨氟含量，尿谷氨酰转肽酶（γＧＴ）、Ｎ乙酰βＤ氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性及肾脏活性氧自由基（ＯＦＲＳ）相对浓度、脂质过氧化降解产物丙二醛（ＭＤＡ）含量均显著升高，谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性及ＧＳＨ含量显著下降。同时补加亚硒酸钠，可促进尿氟排泄，降低血氟水平及骨氟含量，降低尿酶γＧＴ、ＮＡＧ、ＳＤＨ活性和肾脏ＯＦＲＳ、ＭＤＡ含量，同时提高肾脏ＧＳＨＰｘ活性，但对ＧＳＨ含量影响不显著。结论氟化钠引起肾脏损伤与其诱导脂质过氧化作用增强有关，亚硒酸钠对氟化钠致肾脏毒性具有拮抗作用。

铅对胎鼠脑细胞钙摄取的影响及L型钙通道对抗剂作用

［目的］ 观察铅对体外培养神经细胞静息状态４５ Ｃａ摄取及去极化后钙内流的影响。［方法］ 培养的胎鼠神经细胞，通过铅和钙通道激动剂与对抗剂处理后，用β－液体闪烁计数器测量神经细胞中放射性４５ Ｃａ 的摄取速度。［结果］ 低浓度铅对神经细胞４５ Ｃａ 摄取有抑制作用，但对神经细胞在静息时４５Ｃａ 摄取的速度无明显影响，去极化时抑制作用更加明显，并可分别被Ｌ型钙通道激动剂ＢａｙＫ８６４４所增强，对抗剂尼群地平所阻抑。［结论］ 铅通过电压依赖性Ｌ－型钙通道对钙入胞产生抑制作用。

生精过程中细胞凋亡的基因和激素调控机制

生精过程中细胞凋亡的失衡是导致少精无精症的重要机制之一 ,现已受到国内外学者的普遍关注。本文就睾丸生殖细胞凋亡的基因及激素的调控机制的研究情况作一综述 ,并提出生殖细胞凋亡机制存在的热点问题及研究的前景。

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠睾丸生化酶及脂质过氧化的影响

目的 :探讨邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对睾丸生化酶及脂质过氧化的影响 ,为接触人群早期诊断及生物学监测提供参考评价指标。 方法 :选择 6周龄雄性SD大鼠随机分成 4组 ,每组 16只。灌胃给予DBP ,剂量为 0 (对照组 )、2 5 0、5 0 0、10 0 0mg/ (kg·d)。于染毒 2周和 4周末分别处死 8只大鼠 ,收集睾丸及其他脏器和血清 ,以 1∶3的比例制备睾丸匀浆。测定血清和睾丸匀浆中生化酶及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHPx)的活性和谷胱甘肽 (GSH)的含量。 结果 :随DBP染毒剂量的增加 ,肝脏器系数明显上升 ,而睾丸脏器系数显著下降 (P <0 .0 1)。染毒 2周后 ,血清中GSHPx活性和睾丸匀浆中GSH水平下降趋势明显 ,而匀浆中GSHPx活性呈上升趋势 ,10 0 0mg/ (kg·d) 组与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。染毒 4周后 ,血清中碱性磷酸酶活性呈上升趋势 ,血清和睾丸匀浆中山梨醇脱氢酶 (SDH )活性受到明显抑制 ,10 0 0mg/ (kg·d) 组与对照组相比差异均有显著性 (P <0 .0 1)。血清GSH水平呈上升趋势 ,10 0 0mg/ (kg·d) 组与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 结论 :DBP可对机体产生明显的毒性作用 ,主要靶器官为肝脏和睾丸。脂质过氧化可能是DBP毒性作用的机制之一 ,SDH是DBP对睾丸毒性作用较为敏感的指标之一。

东亚钳蝎毒素多肽对蜚蠊神经索动作电位的作用

目的 观察两个从国产特有蝎种东亚钳蝎 (Bm K)分离的毒素多肽 Bm K 、Bm K 对昆虫中枢神经自发放动作电位的影响。方法 采用蜚蠊中枢神经自发放胞外记录方法。结果 Bm K 对蜚蠊中枢神经自发放动作电位有双相作用 ,先抑制后兴奋 ,其抑制作用是可逆的。Bm K 对蜚蠊中枢神经自发放动作电位有抑制作用 ,其抑制作用不是可逆的。结论 提示 Bm K 是神经抑制性成分与兴奋性成分的混合物 ,Bm K 中只有抑制成分。推测

氰戊菊酯和辛硫磷对大鼠背根节细胞钠通道的影响

目的 观察氰戊菊酯、辛硫磷农药单用和混用对成年大鼠背根神经节 (DRG)神经元钠通道的毒性作用。方法 应用膜片钳技术研究氰戊菊酯和辛硫磷对DRG河豚毒素敏感 (TTX S)和不敏感 (TTX R)型钠通道的作用。结果 氰戊菊酯明显延迟去极化时TTX R型钠通道的关闭时间 ,氰戊菊酯 10、5 0、10 0 μmol/L组和对照组钠通道峰电流失活时间常数分别为 (8 10± 2 41)ms、(11 78±2 76 )ms、(8 76± 1 94)ms和 (6 41± 1 32 )ms。氰戊菊酯还具有延长TTX R型钠通道尾电流的关闭时间 ,氰戊菊酯 10、5 0、10 0 μmol/L组和对照组尾电流失活时间常数分别为 (6 11± 0 5 2 )ms、(7 82±0 82 )ms、(7 2 3± 1 0 9)ms和 (4 91± 0 97)ms。氰戊菊酯对TTX S型钠通道的作用小于TTX R型 ,仅表现为对尾电流的关闭有延迟作用。辛硫磷对这两种亚型钠通道无明显影响 ,将氰戊菊酯和辛硫磷混配使用后 ,仅见氰戊菊酯作用的表现 ,未见氰戊菊酯和辛硫磷的联合作用。结论 氰戊菊酯影响DRG钠通道峰电流和尾电流 ,对TTX R型钠通道的作用大于TTX S型 。

胆碱能M和N受体激动剂和阻断剂对铅中毒大鼠记忆能力的影响

本文观察了铅梁毒对大鼠长期记忆保存能力的影响，并经侧脑室给予胆碱能Ｍ、Ｎ受体激动剂和阻断剂，观察其对铅毒性的作用。结果显示：铅可明显损害大鼠对迷宫光亮分辨记忆的保存能力。Ｍ受体激动剂乙酰胆碱和阻断剂阿托品可分别显著改善和加重铅对长期记忆的损害，Ｎ受体激动剂烟碱亦有改善作用，但未见Ｎ受体阻断剂六烃季胺加重记忆损害的现象，这提示胆碱能Ｍ和Ｎ受体均在铅对大鼠长期记忆的影响中起作用，但其重要性和特性有所不同。