拟除虫菊酯对大鼠中枢谷氨酸和γ-氨基丁酸递质影响的免疫组织化学研究

目的 探讨拟除虫菊酯类农药对大鼠中枢神经系统谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫阳性神经细胞的影响及机制。方法 雄性ＳＤ大鼠经氯氰菊酯（７ ｍ ｇ／ｋｇ）或氯菊酯（７０ｍ ｇ／ｋｇ）连续腹腔注射染毒后，通过免疫组织化学和显微图像分析技术检测Ｇｌｕ 及ＧＡＢＡ阳性神经细胞分布和阳性细胞中递质含量。结果 氯氰菊酯或氯菊酯染毒组大鼠大脑皮层、海马Ｇｌｕ 免疫反应阳性细胞数目和阳性细胞面积比减少，阳性细胞积分吸光度降低，阳性细胞突起减少；而ＧＡＢＡ免疫阳性神经细胞数目和面积比增加，阳性细胞积分吸光度升高；在相同条件下，氯氰菊酯作用明显强于氯菊酯。结论 拟除虫菊酯引起中枢神经系统Ｇｌｕ 及ＧＡＢＡ平衡失调可能是其导致兴奋性神经毒性作用机制之一。

KSHV ORF73C基因原核表达产物的纯化与免疫原性分析

目的 纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒 (KSHV)潜伏相关核抗原 (LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性。方法 含重组质粒pGEX 6p 1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL2 1经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。用glutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后 ,以重组 3C蛋白酶对融合蛋白进行解离 ,SDS PAGE对表达及纯化产物进行鉴定。以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清 ,建立ELISA检测其免疫原性。结果 SDS PAGE显示蛋白条带大小分别为 4 90 0 0和 2 30 0 0 ,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致 ;ELISA检测显示 ,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清 2倍以上。结论 成功获得了纯化的ORF73C蛋白 ,经ELISA显示其有较强免疫原性。

CD8mAb对呼吸道合胞病毒诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:观察CD8mAb对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:Balb/c小鼠50只,随机分成5组(n=10):磷酸盐缓冲液(PBS)对照组;卵白蛋白(OVA)组;OVA/RSV模型组;CD8mAb治疗组;IgG2αmAb治疗对照组.应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发复制小鼠哮喘模型,观察实验动物气道炎症和气道反应性变化,支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数,测定BALF上清中白细胞介素(IL)-4,IL-5,干扰素(IFN)-γ含量并采用三色光流式细胞分析法检测气管旁淋巴结(PBLN)中CD4+,CD8+T细胞及细胞内细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-5表达.结果:与模型组相比,CD8mAb可明显减轻小鼠气道炎症和气道高反应.CD8mAb治疗后BALF中嗜酸性粒细胞及上清中细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-5含量明显减少(P均<0.01),CD8+(IFN-γ+,IL-4+,IL-5+)T细胞百分比及Tc2/Tc1比值明显下降(P均<0.01).PBLN中CD8+(IFN-γ+,IL-4+,IL-5+)T细胞百分比与BALF中IFN-γ,IL-4,IL-5含量呈显著正相关(分别rs=0.765,P<0.01;rs=0.825,P<0.01;rs=0.893,P<0.01).结论:CD8mAb对RSV诱导的哮喘小鼠气道炎症和气道高反应具有抑制作用,其部分机制可能与致敏条件下病毒感染引起CD8+T细胞功能发生转化,即由产生IFN-γ为特征的细胞毒CD8+T细胞转化为产生IL-4,IL-5为特征的非细胞毒CD8+T细胞有关.

普乐可复防治大鼠抗肾小球基底膜肾炎的实验研究

目的 :观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5mg·kg-1·d-1) ,至第 2 1d。对照组则给予等量的生理盐水。定期于第 4d、第 14d和第2 1d ,检测大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平 ,观察肾组织病理学改变 ,以及检测T淋巴细胞转化功能。结果 :肾炎对照组大鼠注射抗血清后于第 4d即出现异常蛋白尿 ,血清肌酐和尿素氮亦持续上升 ;肾小球内可见细胞数增加和新月体形成 ,肾小管内大量蛋白管型 ,GBM呈不规则增厚 ,足突大片融合 ;T淋巴细胞转化功能异常。而肾炎 +FK5 0 6组大鼠上述病变均明显较轻。结论 :FK5 0 6能够明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。

马立克病疱疹病毒基因组IRL区一特异性cDNA基因在大肠杆菌中的表达研究

目的 了解从人工感染马立克病泡疹病毒（ＭＤＶ）致瘤毒株京－１株发病鸡内林巴肿瘤组织中分离鉴定到的，定位于ＭＤＶ基因组ＩＲＬ区ＢａｍＨＩ－Ｉ２和Ｌ片段内的一长７２０ｂｐ特异性ｃＤＮＡ基因在大肠杆菌表达系统中的表达能力。方法 将该ｃＮＤＡ基因克隆进行色氨酸（Ｔｒｐ）启动子控制下的大肠杆菌表达质粒ＰＡＴＨ２３中，连接质粒转化受体菌ＤＨ５α。分别采用原位杂交、斑点杂交和ＰＣＲ法对重组转化子进行筛选鉴定。

人IL-1RⅡ基因的克隆及其表达

克隆人IL 1RⅡ基因 ,构建其逆转录病毒载体 ,以探讨其在IL 1主导疾病中的作用。方法 :用RT PCR法从人外周血单个核细胞 (PBMC)中克隆人的IL 1RⅡ基因。将其克隆到原核表达质粒PET2 2b中 ,构建重组质粒PET2 2b IL 1RⅡ。将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后 ,转化BL2 1菌 ,以IPTG诱导表达。表达产物用Westernblot鉴定。另外 ,将以酶切重组质粒PET2 2b IL 1RⅡ所获IL 1RⅡ基因的全长ORF ,克隆到逆转录病毒质粒中并转染 2 93细胞 ,用免疫组化染色法检查IL 1RⅡ基因的表达。结果 :用RT PCR法 ,从人PBMC中扩增出 12 0 3bp的cDNA ,测序证实为人IL 1RⅡ基因。Westernblot表明 ,重组质粒可表达IL 1RⅡ蛋白。免疫组化染色表明 ,IL 1RⅡ重组逆转录质粒可在 2 93细胞中高效表达IL 1RⅡ蛋白。结论 :成功地克隆了人IL 1RⅡ基因 ,构建了其原核表达载体和重组逆转录病毒载体 ,并在BL2 1菌中表达IL 1RⅡ重组蛋白 ,为进一步研究IL

家蚕表达的重组人巨噬细胞集落刺激因子抗病毒活性的体外研究

以家蚕表达的重组人巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＭＣＳＦ）预先处理细胞，再接种不同病毒，观察ｒｈＭＣＳＦ对病毒增殖的影响。结果显示，ｒｈＭＣＳＦ在人胚皮肌细胞上对所观察的单纯疱疹病毒１和２型、流感病毒Ａ３型、鼻病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒６和１１型均有不同程度的抑制作用，推迟或减轻细胞病变的发生；在单纯疱疹病毒１型感染乳兔肾细胞的实验中能使子代病毒滴度降低１００倍以上，ＴＮＦα、ＩＦＮα和γ的中和单抗均不能阻断这一作用，而ＴＮＦβ的中和单抗却能部分阻断这一作用。

人类疱疹病毒7型感染机制的研究进展

人类疱疹病毒7型能感染以CD4^+T细胞为主的多种组织和细胞。人类疱疹病毒7型和人类疱疹病毒6型一样,主要引起婴幼儿急疹、玫瑰糠疹等疾病。CD4、硫酸乙酰肝素是人类疱疹病毒7型已知的主要受体,CXCR4可能是协同受体。由于与人类免疫缺陷病毒有共同受体,人类疱疹病毒7型在人类免疫缺陷病毒防治研究中具有重要意义。

马立克病疱疹病毒致瘤株基因组IRL区Bam H I I2和L片段内一特异性cDNA的分离与鉴定

目的 了解马立克病疱疹病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段在ＭＤＶ致瘤毒株京－１株（中国特有的地方株）所诱导的淋巴肿瘤组织中转录状况。方法 从人工感染ＭＤＶ致瘤株京－１株发病鸡内脏淋巴肿瘤组织中分离ｍ ＲＮＡ，根据已发表的ＭＤＶ肿瘤候选基因ｍ ｅｑ 基因序列和我们已测定的强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段序列，设计两段寡核苷酸引物，以此ｍ ＲＮＡ为模板经逆转录合成ｃＤＮＡ，应用ＰＣＲ法进行目的基因扩增。用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ 分别标记ＧＡ株基因组Ｂａｍ ＨＩＩ２和ＬＤＮＡ片段，制成核酸探针，分别与ＰＣＲ产物作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交鉴定。结果 逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增的ｃＤＮＡ大小约７３０ ｂｐ，该ｃＤＮＡ能同时与上述两探针发生免疫呈色反应。结论 ①ＭＤＶ ｍ ｅｑ基因的转录可以延伸到其右侧的Ｂａｍ ＨＩＬ片段区；②Ｂａｍ ＨＩＬ区在ＭＤＶ致瘤株京－１株所诱导的淋巴肿瘤组织中可发生转录。

内皮细胞穿越模型中系统性红斑狼疮患者树突状细胞分化及功能状态的初步研究

目的利用已经成功构建的内皮细胞穿越模型研究系统性红斑狼疮(systemiclupusery-thematosus,SLE)患者的单核细胞起源的树突状细胞的分化和功能状态(膜表面分子和刺激功能及细胞因子分泌等)。方法构建内皮细胞穿越模型;分别诱导正常人单核细胞和SLE患者单核细胞在模型中分化为树突状细胞(dendriticcells,DCs);电子显微镜观察其形态特征;流式细胞术检测其表型[人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD80、CD86],混合淋巴细胞反应检测DCs刺激异源T细胞活化的能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DCs分泌的干扰素(IFN)-!。结果正常人和SLE患者单核细胞在内皮细胞穿越模型中能分化成树突状细胞形态。正常人单核细胞来源的DCs(normalMonocyte-derivedDCs,NMDCs)和SLE患者单核细胞来源的DCs(SLEMonocyte-derivedDCs,SMDCs)都高表达HLA-DR;SMDCs的协同刺激分子CD80和CD86的表达水平明显高于NMDCs;刺激异源T淋巴细胞增殖的能力,SMDCs和NMDCs差异无统计学意义;SMDCs分泌IFN-!的水平明显低于NMDCs。结论SLE患者单核细胞异常分化为树突状细胞,这种异常涉及树突状细胞协同刺激分子CD80和CD86的表达升高以及细胞因子IFN-!分泌降低。