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胎猪肾脏发育不同时期相关信号分子的表达
被引量:
3
1
作者
刘曼菱
赵丽华
+5 位作者
张曼玲
金永
王晨宇
尤志欢
张红
李荣凤
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期822-828,共7页
目的:明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法:收集不同时期(妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d)胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western b...
目的:明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法:收集不同时期(妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d)胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏发育相关信号分子(Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4)的mRNA和蛋白表达水平,并通过免疫组织化学检测Pax2在不同时期胎猪肾脏的表达定位情况。结果:27.5 d胎猪的后肾已经开始发育;35 d早期肾小体已经出现,肾小管也开始发育;45 d观察到近皮质不成熟的肾小体和近髓质成熟的肾小体;75 d肾单位数目显著增加,观察到肾椎体、肾乳头和肾盂;110d肾脏基本发育成熟,皮髓质分界明显,仍有新的肾单位产生。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4在胎猪75d的肾脏中mRNA和蛋白表达量高于35 d。Pax2广泛表达于输尿管芽、后肾间充质、帽状间充质、肾小囊体、逗号形体、S形体以及肾小管,并在后肾发育过程中持续表达。结论:27.5 d时胎猪后肾已经开始发育,110 d基本发育成熟。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4等信号分子在胎猪肾脏发育过程中均有不同程度表达,其中Pax2可能是胎猪肾脏发育的关键调控分子。
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关键词
肾脏发育
PAX2
猪
下载PDF
职称材料
基于CRISPR/Cas9系统制备猪Pax2基因敲除细胞系
被引量:
1
2
作者
赵丽华
刘曼菱
+2 位作者
李美双
尹志宝
李荣凤
《内蒙古大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2023年第2期169-178,共10页
肾脏发育缺陷或缺失的猪模型可为人源化肾脏器官在异种动物体内再生提供“发育空位”,因此敲除肾脏发育关键基因Pax2(Paired box2)获得该动物模型是肾脏再生的关键步骤。本文利用生物信息学分析软件比对分析了不同物种间Pax2蛋白结构,...
肾脏发育缺陷或缺失的猪模型可为人源化肾脏器官在异种动物体内再生提供“发育空位”,因此敲除肾脏发育关键基因Pax2(Paired box2)获得该动物模型是肾脏再生的关键步骤。本文利用生物信息学分析软件比对分析了不同物种间Pax2蛋白结构,明确了猪Pax2蛋白在氨基酸序列、二级结构和三级结构方面与人、小鼠具有相似性。结合Pax2蛋白在人和小鼠肾脏发育中的功能,选择猪Pax2基因第8外显子序列作为打靶目标区间,设计并构建了用于敲除猪Pax2基因的CRISPR/Cas9打靶载体。在检测CRISPR/Cas9载体打靶猪Pax2基因效率的基础上,利用细胞核转染和G418药物筛选获得巴马小型猪细胞单克隆。通过PCR、T载体克隆和Sanger测序检测各细胞单克隆Pax2基因的敲除情况,鉴定出33个双等位基因敲除Pax2基因的巴马小型猪细胞系,敲除效率达到45.21%(33/73)。本研究为肾脏缺失或肾发育不全的猪模型的获得奠定实验基础,同时为后续在猪体内再造人源化肾脏以及肾发育疾病的研究提供了研究材料。
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关键词
Pax2基因
基因敲除
CRISPR/Cas9
猪
原文传递
题名
胎猪肾脏发育不同时期相关信号分子的表达
被引量:
3
1
作者
刘曼菱
赵丽华
张曼玲
金永
王晨宇
尤志欢
张红
李荣凤
机构
南京医科大学
江苏省异种移植
重点
实验室
出处
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期822-828,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31371487)
文摘
目的:明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法:收集不同时期(妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d)胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏发育相关信号分子(Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4)的mRNA和蛋白表达水平,并通过免疫组织化学检测Pax2在不同时期胎猪肾脏的表达定位情况。结果:27.5 d胎猪的后肾已经开始发育;35 d早期肾小体已经出现,肾小管也开始发育;45 d观察到近皮质不成熟的肾小体和近髓质成熟的肾小体;75 d肾单位数目显著增加,观察到肾椎体、肾乳头和肾盂;110d肾脏基本发育成熟,皮髓质分界明显,仍有新的肾单位产生。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4在胎猪75d的肾脏中mRNA和蛋白表达量高于35 d。Pax2广泛表达于输尿管芽、后肾间充质、帽状间充质、肾小囊体、逗号形体、S形体以及肾小管,并在后肾发育过程中持续表达。结论:27.5 d时胎猪后肾已经开始发育,110 d基本发育成熟。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4等信号分子在胎猪肾脏发育过程中均有不同程度表达,其中Pax2可能是胎猪肾脏发育的关键调控分子。
关键词
肾脏发育
PAX2
猪
Keywords
nephrogenesis
Pax2
pig
分类号
R-332 [医药卫生]
R692 [医药卫生—泌尿科学]
下载PDF
职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9系统制备猪Pax2基因敲除细胞系
被引量:
1
2
作者
赵丽华
刘曼菱
李美双
尹志宝
李荣凤
机构
南京医科大学
基础医学院
南京医科大学
生殖医学国家
重点
实验室
南京医科大学心血管病靶向干预研究重点实验室
出处
《内蒙古大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2023年第2期169-178,共10页
基金
国家自然科学基金项目(31971379)。
文摘
肾脏发育缺陷或缺失的猪模型可为人源化肾脏器官在异种动物体内再生提供“发育空位”,因此敲除肾脏发育关键基因Pax2(Paired box2)获得该动物模型是肾脏再生的关键步骤。本文利用生物信息学分析软件比对分析了不同物种间Pax2蛋白结构,明确了猪Pax2蛋白在氨基酸序列、二级结构和三级结构方面与人、小鼠具有相似性。结合Pax2蛋白在人和小鼠肾脏发育中的功能,选择猪Pax2基因第8外显子序列作为打靶目标区间,设计并构建了用于敲除猪Pax2基因的CRISPR/Cas9打靶载体。在检测CRISPR/Cas9载体打靶猪Pax2基因效率的基础上,利用细胞核转染和G418药物筛选获得巴马小型猪细胞单克隆。通过PCR、T载体克隆和Sanger测序检测各细胞单克隆Pax2基因的敲除情况,鉴定出33个双等位基因敲除Pax2基因的巴马小型猪细胞系,敲除效率达到45.21%(33/73)。本研究为肾脏缺失或肾发育不全的猪模型的获得奠定实验基础,同时为后续在猪体内再造人源化肾脏以及肾发育疾病的研究提供了研究材料。
关键词
Pax2基因
基因敲除
CRISPR/Cas9
猪
Keywords
Par2 gene
gene-knockout
CRISPR/Cas9
pig
分类号
Q95 [生物学—动物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胎猪肾脏发育不同时期相关信号分子的表达
刘曼菱
赵丽华
张曼玲
金永
王晨宇
尤志欢
张红
李荣凤
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
下载PDF
职称材料
2
基于CRISPR/Cas9系统制备猪Pax2基因敲除细胞系
赵丽华
刘曼菱
李美双
尹志宝
李荣凤
《内蒙古大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2023
1
原文传递
已选择
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