胰岛β细胞中PP2ACα基因失活小鼠模型的建立及初步表型分析

目的 :建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法 :通过Ins2-Cre小鼠与PP2ACα^(^(flox/flox))小鼠交配,获得胰岛β细胞特异性失活PP2ACα基因小鼠(PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre)。PCR和Western blot鉴定PP2ACα基因第二外显子敲除小鼠(KO)。4月龄时行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT),以PP2ACα^(flox/flox)小鼠为对照。结果 :1PP2ACα转录本在KO小鼠短于对照小鼠;2KO小鼠胰岛中PP2AC蛋白水平较对照小鼠显著下降(P<0.05);3IPGTT结果显示:4月龄KO小鼠30、60、120 min时血糖明显高于对照小鼠(P<0.05)。结论:成功建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,4月龄PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre小鼠糖耐量受损。

调整精卵交汇时间提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率

目的通过调整精卵交汇时间,提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率。方法实验一以常规超排方法作为对照组,计算受精率;实验二验证C57BL/6J雄鼠受精能力;实验三在合笼后三个时间点检栓,确定超排鼠交配时间,计算精卵相遇时间;实验四将C57BL/6J雌鼠超排处理,停留6.5 h后配雄鼠,计算受精率,比较方法改进的效果。结果对照组取受精卵10.88枚/只;实验二取受精卵20.55枚/只,表明雄鼠的精子可以使卵子高比例受精,精子、卵子交汇时间是影响受精率的关键因素;实验三,在合笼后4 h雌鼠见栓鼠最多,确定对照组精卵交汇时间需7 h;根据以上实验结果,实验四将合笼时间推迟6.5 h,取受精卵22.27枚/只,比对照组提高了105%。结论调整精子、卵子交汇时间可显著提高C57BL/6J小鼠超数排卵受精率。

ES细胞囊胚注射后脱透明带移植对小鼠产仔率和嵌合率的影响

[目的]提高ES细胞囊胚注射的移植出生率。[方法]对照组采用正常囊胚ES细胞注射,试验组注射后的囊胚经酸性台氏液消化透明带后直接移植,研究ES细胞囊胚注射后脱透明带移植对小鼠产仔率和嵌合率的影响。[结果]对照组产仔率为15.96%,嵌合率为57.89%。试验组小鼠产仔率为17.95%,嵌合率为57.14%,出生率提高2%。[结论]嵌合率无显著差异,酸性台氏液消化透明带的方法可简化操作流程。

赭曲霉毒素A分析方法研究进展

赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）是1种具有多种毒性的真菌毒素[1],广泛污染粮食和饲料[2],对人类和动物的健康及农业经济发展造成严重威胁[3]。OTA的检测方法正在不断发展,从灵敏度、准确性、重现性、简易性、批量性和可视性等各方面日益满足实际生产生活的需求。

PC12细胞缺血预处理模型的建立及一氧化氮的保护作用

目的以PC12细胞建立体外脑缺血预处理细胞模型，探讨NO在预处理脑保护中的作用。方法建立缺血预适应的细胞模型，随机分为四组，每组五碟细胞。正常对照组：常氧、低糖（〈1g／L）2％胎牛血清DMEM培养；缺血预适应组（IPC）：预先氧糖剥夺（OGD）6h，后经复灌和OGD处理；非缺血预适应组（NIPC）t常氧、低糖低血清培养6h，后经复灌和OGD处理；一氧化氮合酶抑制剂组（L-NAME）：OGD预处理前30min加L-NAME，OGD6h，后经复灌和OGD处理。通过细胞MTT代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞凋亡率来评判IPC模型是否建立，生化法观察各组一氧化氮合酶（NOS）活性变化。统计分析利用单因素方差分析，两两组间均数的比较用ISD法，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与NIPC组比较，IPC组M＇IT代谢率明显增高（94．9％±15．1％，P〈0．05），LDH释放量减少（279．1％±28．1％，P〈0．01），细胞凋亡率降低；与对照组（100．0％±13．5％）比较，NIPC组及IPC组NOS活性均升高（190．0％±14．6％，P〈0．01；126．1％±10．6％，P〈0．01）；流式检测结果显示，对照组、IPC组、NIPC组和L-NAME组引起的细胞凋亡率分别为5．90％，8．71％，18．62％及11．73％。结论IPC减少PCI2细胞缺糖缺氧损伤后细胞的死亡与凋亡，且NO参与了此保护机制，但并非唯一因素。

人HCN2真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况。方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长cDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录-聚合酶链反应检测HCN2 mRNA表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流。结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流。结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达。