自体组织工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症

目的:用组织工程方法构建角膜上皮组织,观察自体工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症的可行性。方法:①实验于2000-01/2003-12在南京医科大学第一临床医学院中心实验室和内分泌科实验室完成。选用新西兰白兔15只,雌雄不拘。用手术方法做成单眼角膜缘缺陷动物模型,为移植实验的受体眼。另一只眼为供体眼。15只兔被随机分为3组:自体角膜上皮移植,羊膜移植组,对照组。②自体角膜上皮移植组:取供体眼角膜缘上皮组织约3mm3,体外培养。对原代培养和传代培养的角膜干细胞进行形态学观察,采用糖原PAS反应鉴定细胞糖原染色;采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白AE1表达;对培养细胞进行透射电镜和扫描电镜观察。在去除上皮的保存人羊膜组织上,接种培养细胞,气液界面培养2周构建复层上皮组织。倒置显微镜观察细胞形态和生长特征;组织固定,包埋,切片,染色,观察细胞生长状态和蛋白表达。透射电镜观察超微结构。5只眼成模后4周,受体眼去除角膜浅层新生血管膜,行自体培养角膜上皮移植术。羊膜移植组:5只眼成模后4周,行羊膜移植修复角膜表面;对照组:5只眼成模后不做处理,为模型对照组。③移植实验后7,10,20,30d,分别行裂隙灯显微镜检查,角膜荧光素染色,眼前部照相。并分别处死各组动物,取手术区域角膜组织,甲醛固定,石蜡包埋,病理切片,染色,镜检观察。结果:①培养细胞的生长状态:原代培养48h细胞贴壁,15d左右形成单层。传代培养次日细胞贴壁,10d形成良好的单层。细胞胞体饱满,呈多角形,大小基本一致。②培养细胞的形态学特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,核呈长圆形,细胞大小一致,排列整齐。AE1单克隆抗体染色阳性,PAS染色阴性。③培养细胞的超微结构:透射电镜可见培养细胞之间有桥粒连接,缝隙连接。扫描电镜可见细胞表面有微绒毛结构。④羊膜上接种细胞的生长特征:24h细胞贴壁生长,1周左右融合成单层。气液界面培养,细胞透明饱满,均匀成片生长,持续培养2周,细胞呈复层生长。⑤组织工程化角膜上皮形态特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,在羊膜上融合成片。组织切片,细胞在羊膜上可达到四五层。透射电镜可见桥粒样结构。⑥自体组织工程化角膜上皮修复实验:自体角膜上皮移植组:移植区角膜上皮细胞覆盖,呈复层排列,基底细胞呈柱状,基底膜完整。基质内有炎性细胞和红细胞浸润。供体角膜未出现临床病理性损伤。羊膜移植组:移植区域表层有上皮细胞覆盖,层次紊乱,极性消失。基质内有炎性细胞和红细胞浸润。对照组:角膜上皮排列紊乱,基底膜不完整,基质内有中性白细胞和红细胞浸润。结论:①角膜干细胞在体外能够培养传代。②培养角膜干细胞在保存人羊膜上能够生长,经气液界面培养,构建出复层上皮组织,与正常角膜上皮组织近似。③自体工程化角膜上皮可用于修复角膜缘缺陷症。

多囊卵巢综合征代谢特征及其与非酒精性脂肪肝的关系

目的：探讨育龄期与青春期多囊卵巢综合征（PCOS）患者的临床表现、内分泌与代谢特点以及与非酒精性脂肪肝的相关性,分析伴和不伴非酒精性脂肪肝对多囊卵巢综合征患者代谢指标的影响。方法：总结分析2008~2009年就诊于南京医科大学第一附属医院内分泌科的50例PCOS患者和非P-COS患者50例的临床资料,描述其临床表现、内分泌与代谢特点。比较两组患者NAFLD、胰岛素抵抗（IR）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高发生情况及一般临床参数。结果：50例PCOS患者中育龄期与青春期患者分别有34例和16例,主诉有月经稀发、无排卵、不育,高雄激素表现包括多毛、痤疮、脂溢性脱发和高雄激素血症,代谢紊乱表现包括肥胖或超重、高胰岛素血症,糖尿病或糖耐量异常,高血压,非酒精性脂肪肝和血脂紊乱。育龄期患者中按不同方法计算IR者占25.6%~41.2%。青春期患者中按不同方法计算的IR者占40.8%~50.6%。PCOS组NAFLDI、R、ALT升高的发生率与非PCOS对照组比较显著增高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：PCOS是涉及多系统的疾病,要重视PCOS患者,特别是青春期患者的代谢综合征的筛查与诊治。NAFLD在PCOS患者中患病率高。PCOS、NAFLD两种疾病在临床上存在相关性。

运动对大鼠肌细胞丝裂素活化蛋白酶信号传导系统的调节作用

目的 观察运动对心肌和骨骼肌细胞应激激活蛋白激酶 (JNK)信号通道活性的影响 ,为运动处方的制定提供分子生物学依据。方法 1 2周龄、体重 2 0 0～ 2 30克的SD大鼠 1 8只 ,随机分为对照组 (n =6)、急性运动组 (n=6)和运动训练组 (n =6)。采用活动平板 ,坡度 1 0 % ,速度 2 0m/min,运动时间 2 0分 /次。急性运动组仅运动 2 0min ;运动训练组 ,每日 1次 ,每周 5次 ,运动三周 ;对照组不参与运动。运用化学发光测定心肌和骨骼肌JNK活性。结果 骨骼肌JNK活性在急性运动组和运动训练组分别是非运动组的 4 .1倍和1 1 .1倍 ,且运动训练组较急性运动组增高 2 .71倍。心肌JNK活性在急性运动组和运动训练组分别是非运动组的 3 .5倍和 2 .1 6倍 ,且急性运动组较运动训练组增高 1 .62倍。结论 运动可以激活心肌和骨骼肌JNK信号转导通道 。