重组酶介导的肠出血性大肠杆菌O157:H7等温扩增方法的建立

目的:建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7的方法。方法:根据EHECO157:H7保守区序列,结合重组酶介导的恒温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和荧光定量或胶体金侧向流免疫层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD),建立两种EHEC O157:H7检测方法(RAA荧光法和RAA-LFD法)并进行优化,评估这两种方法的灵敏性及特异性。结果:两种检测方法均可在39℃恒温条件下16 min内完成检测,两种方法的检测限均可达1×10~4拷贝数,具有较高的灵敏性。两种方法与其他常见的肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、弯曲菌、耶尔森菌、志贺杆菌)质粒模板无交叉反应,具有良好的特异性。结论:本研究建立的两种检测EHEC O157:H7的方法,检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于EHEC O157:H7的快速检测。