染色体核型分析联合CNV-Seq检测在高龄孕妇产前诊断中的临床应用

目的探讨染色体核型分析联合基因组拷贝数变异测序(CNV-Seq)检测在高龄孕妇羊水产前诊断中的临床应用价值。方法对2018年1月—2020年1月南京医科大学第一附属医院的368例产前诊断高龄孕妇进行分析,统计产妇的羊水细胞染色体核型结果、CNV-Seq检测结果。结果368例高龄孕妇中染色体核型检出结果异常30例,异常检出率8.2%(30/368),其中21三体7例,18三体2例,性染色体数目异常8例,嵌合体4例,染色体平衡变异6例,染色体不平衡易位变异3例。CNV-Seq检出结果异常40例,异常检出率10.9%(40/368),其中21三体7例,18三体2例,性染色体数目异常8例,嵌合体4例,≥10 Mb大片段缺失重复3例,<10Mb且致病性CNVs3例,可能致病性CNVs3例,临床意义未明CNVs10例。CNV-seq检测对染色体核型分析异常结果中的6例染色体平衡变异未检出,其余24例异常均检出,此外CNV-seq额外检测出6例致病性及可能致病性CNVs,占比1.6%(6/368)。结论染色体核型分析联合染色体拷贝数变异检测,可提高染色体异常检出率,两种方法各自有独特的优势,染色体核型分析可比较直观地检测出染色体结构变异,而CNV-Seq可检测出染色体微缺失微重复。

羊水直接扩增快速诊断骨骼发育异常类单基因遗传病

目的:以最原始的羊水样本为起始模板直接进行PCR扩增,建立一种快速、简便的骨骼发育异常单基因遗传病的产前基因诊断方法。方法:对2013年4月-2018年1月于南京医科大学第一附属医院就诊的超声提示骨骼发育异常的38例胎儿行羊膜腔穿刺并进行软骨发育不全、软骨发育低下、致死性发育不全及成骨发育不全4种单基因遗传病诊断,抽取孕妇羊水后不经过胎儿细胞培养,也不经过羊水中胎儿细胞DNA的提取,加入中性盐等物质作为PCR缓冲液,控制缓冲液pH值为8~10,扩增FGFR3及COL1A2基因上的靶标片段,直接在反应体系中加入8μL羊水进行PCR扩增测序,行产前基因诊断;考察扩增体系中的成分及含量对羊水直接扩增方法的影响。结果:38例胎儿样本中检出单基因遗传病致死性发育不全3例,分别为Ⅰ型1例,Ⅱ型2例;软骨发育不全3例,软骨发育低下1例。中性盐缓冲液、0.20 U/μL Promega Taq DNA聚合酶、每条引物1.2 pmol/μL用于羊水直接扩增效率最佳。结论:本方法省略了羊水细胞培养和羊水中胎儿DNA核酸提取这两步繁琐步骤,无需浓缩羊水即可直接扩增,缩短了诊断时间,节约了诊断成本,可以减少PCR过程中可能出现的样本交叉污染,是一种很有前景的快速产前基因诊断新方法。

孕妇外周血游离DNA深度测序在胎儿染色体非整倍体无创检测中的应用研究

目的:评估孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序在检测胎儿染色体非整倍体异常中的优势。方法:通过高通量测序技术检测1 000例妊娠13周以上孕妇的外周血中胎儿游离DNA,判断胎儿非整倍体异常,通过传统染色体核型分析及胎儿出生后的临床随访对检测结果进行验证。结果:1 000例标本中1例检测失败,其余999例中共检出18例异常,其中12例21三体,2例18三体,1例13三体,1例X单体,1例X三体,1例XXY。12例21三体阳性病例中,有1例为双胎妊娠,核型分析显示一胎正常,一胎为21三体;1例X三体经核型分析诊断为正常女性,其余检测结果均与染色体核型分析结果相符,对于21三体、18三体、13三体和性染色体非整倍体异常的总阳性检测率94.44%。所有检测结果为阴性者,均进行产后随访新生儿面容、体格发育等情况,未发现有21三体、18三体、13三体等常见染色体非整倍体异常征象,无假阴性病例。结论:孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序对于检测胎儿21三体、18三体和13三体准确度高,对性染色体非整倍体的检测,本技术检测指标有待进一步提高。

500例胎儿脐血染色体检查相关因素及脐血管穿刺术安全性分析

目的 :评价超声引导下脐血管穿刺术的安全性,探讨胎儿染色体异常临床高危因素,提高脐血管穿刺对胎儿异常染色体核型的检出率。方法:选取本院超声引导下经腹脐血管穿刺并行染色体检查的孕妇500例,进行染色体核型分析,比较不同产前诊断指征组的异常染色体检出率并进行相关因素分析。结果:穿刺成功率99.6%,胎儿脐血管穿刺的主要并发症为穿刺点出血,共86例,占17.2%;胎心心动过缓10例,占2.0%;胎儿丢失1例,占0.2%。共检出异常染色体核型47例,检出率9.4%。同时合并2种以上产前诊断指征者与胎儿染色体异常存在相关性。结论:脐血染色体核型分析能够为临床上诊断胎儿染色体异常提供可靠依据,脐血管穿刺术是一种安全的产前诊断取材技术。同时合并2种以上产前诊断指征者有必要进行产前诊断。

改良荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用

目的探讨改良荧光原位杂交(FISH)技术快速产前诊断染色体异常的应用价值。方法改变FISH操作过程中杂交液用量,对258例孕妇羊水细胞进行FISH快速产前诊断和常规细胞培养核型分析。结果 258例羊水样本常规细胞培养结果与FISH检测常见的染色体数目与核型分析的结果符合率为100%。结论优化FISH技术能快速、准确检测常见的5种染色体数目异常,使用试剂量少、价廉,可作为经典染色体核型分析的辅助方法。

一例致死性软骨发育不良胎儿的基因诊断

目的:建立一种致死性软骨发育不良的诊断方法。方法:采用聚合酶链反应-测序分析的方法,对1例超声提示致死性骨骼发育异常胎儿的成纤维细胞生长因子受体3(FGFR)基因上的R248C以及K650N位点的点突变进行检测。结果:在该例胎儿第15外显子1948位点发现了A到G的突变,导致TK2区第650位密码子赖氨酸被谷氨酸取代,从而导致Ⅱ型致死性发育不良。结论:产前基因诊断可快速、有效地对致死性软骨发育不良胎儿作出病因确诊和分型,防止患儿出生,真正实现优生。