围妊娠期小鼠胰岛细胞视网膜母细胞瘤蛋白的表达及其与β细胞扩增的关系

目的观察围妊娠期小鼠胰岛细胞视网膜母细胞瘤（Rb）蛋白的表达变化，探讨其与妊娠期胰岛13细胞扩增的关系。方法将适合繁衍的6-8周龄体重20-25g的C57BL／6小鼠合笼配繁，检测阴栓形成，留取未孕（NP）、孕14．5d（P14．5）、孕18．5d（P18．5）、产后4d（AP4）、产后8d（AP8）等围妊娠期天数的小鼠。采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛，Westernblot法检测Rb、磷酸化Rb（p-Rb）及转录因子E2F1的蛋白表达，免疫荧光技术检测Rb和p-Rb的分布。配繁胰腺特异性Rh基因敲除小鼠，留取NP、P14．5和P18．5的小鼠。以腹腔葡萄糖耐量试验评估小鼠P14．5时的糖耐量变化。体内及体外试验检测葡萄糖刺激下的胰岛素分泌。免疫组化法检测基因敲除小鼠胰岛B细胞量、数目及面积的变化，免疫荧光法检测Ki67阳性β细胞比例变化。各组间比较采用独立样本t检验。结果（1）小鼠胰岛细胞RI）、p-Rb和E2F1在妊娠期表达显著升高，高峰出现在P14．5，表达量分别为NP组的2．16、2．96和2．09倍（￡=9．31、24．23、8．31，均P〈0．叭），均于分娩后逐渐恢复至孕前水平；Rb主要表达于胞核，而p-Rh主要表达于胞浆。（2）NP时基因敲除小鼠糖耐量优于野生型小鼠，血糖曲线下面积（AUC）显著降低[（1343±19）比（1511±16）mmol·L^-1·min^-1，t=10．48，P〈0．01]；P14．5d时基因敲除鼠糖耐量仍优于野生型孕鼠，AUC显著降低[（1073±117）比（1359±101）mmol·L^-1·rain^-1，t=3．71，P〈0．01]；P14．5d时，基因敲除孕鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌在2rain和30rain时显著高于野生型孕鼠[分别为（0．69±0．10）比（0．55±0．10）ng／ml、（0．46±0．08）比（0．36±0．08）ng／ml，t=2．40、2．30，均P〈0．051，体外葡萄糖刺激下基因敲除孕鼠的胰岛素分泌水平也高于野生型孕鼠[低糖和高糖状态下分别为（233±48）比（93±49）U／ml和（365±46）比（230±94）U／ml，t=4．30、2．62，均P〈0．01]。NP时，基因敲除鼠的B细胞量、数目、Ki67阳性细胞比例较普通小鼠均增加（t=4．53、3．46、7．68，均P〈0．05），但进入妊娠期后未出现进-步增加。结论围妊娠期小鼠胰岛细胞中Rb及E2F1表达增高，与妊娠期胰岛8细胞扩增相关。