黄芪皂苷Ⅳ通过PKA途径减轻缺氧/复氧心肌损伤的机制研究

目的:研究黄芪皂苷IV(astragaloside IV,As-IV)减轻缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的机制。方法:胰酶多次消化法培养新生SD大鼠原代心肌细胞,建立缺氧/复氧模型,测定培养心肌细胞上清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(creatine kinase,CK-MB)含量,检测心肌细胞肌浆网钙ATP酶(sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA2a)活性、Real-Time PCR法测定PKA催化亚单位α(PKA C subunitα,PKA-Cα)基因的表达水平以及Western blot检测第16位丝氨酸磷酸化受磷蛋白(Ser16 phos-phorylated phospholamban,Ser16-PLN)的表达水平,同时以As-IV(30μmol/L)干预,观察其作用。结果:与正常组相比,缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起心肌细胞CK-MB释放增加,SERCA2a活性降低约35%、PKA-Cα基因表达下调28%以及Ser16-PLN表达下调51%,P值均﹤0.05,As-IV干预则可逆转上述变化,基本恢复至正常水平。结论:黄芪皂苷Ⅳ抑制缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的机制可能是通过上调PKA-Cα基因表达,提高受磷蛋白(phosphorylated phospholamban,PLN)16位丝氨酸的磷酸化水平,解除PLN对SERCA2a的抑制,从而增强SERCA2a的功能。