OX40/OX40L逆向信号对小鼠主动脉内皮细胞MMP-9表达及机制的研究

目的:探讨OX40配体(OX40 ligand,OX40L)逆向通路激活对培养的小鼠主动脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)表达及活性的作用。方法:分离与培养8～10周龄C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞,传代至第2代,用可溶性OX40(sOX40)、OX40L单克隆抗体(anti-OX40L)和钙离子螯合剂bapta-AM刺激内皮细胞,RT-PCR和Western blot方法检测内皮细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平,明胶酶谱法检测内皮细胞培养上清MMP-9活性,应用钙离子成像方法观察内皮细胞胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果:与对照组相比,可溶性OX40(0.1 mg/L)刺激后内皮细胞MMP-9的mRNA及蛋白表达水平均显著增高,内皮细胞培养上清MMP-9活性明显增高,内皮细胞胞浆[Ca2+]i也明显增高。分别应用可溶性OX40L单克隆抗体(0.1 mg/L)和Bapta-AM(20μmol/L)预处理培养内皮细胞后,由可溶性OX40引起的内皮细胞基因和蛋白表达水平明显降低,内皮细胞培养上清MMP-9活性明显下降。结论:内皮细胞OX40L逆向信号的激活可以通过调节胞内的游离钙离子水平参与内皮细胞中MMP-9表达的调控,这可能是OX40/OX40L逆向信号通路参与动脉粥样硬化的发生、发展的机制之一。