糖尿病大鼠胰岛素原基因转基因治疗的研究——门静脉注射与肌肉注射对血糖影响的比较

目的比较门静脉注射与肌肉注射胰岛素原转基因治疗对糖尿病大鼠血糖的影响。方法（1）分别用门静脉注射及肌肉注射的方法将含有大鼠胰岛素原基因的重组表达质粒pCMV／胰岛素原DNA裸质粒导入糖尿病大鼠模型以观察其血糖的变化。门静脉注射治疗组（A组）及肌肉注射治疗组（C组）每只大鼠分别接受pCMV／胰岛素原DNA100μg，门静脉对照组（B组）和肌肉对照组（D组）则分别以同样方法给予同等剂量pCMV空载质粒DNA。同时设立糖尿病对照组（DM组）和正常对照组（N组）。（2）采用超敏放射免疫法检测大鼠转基因治疗前后胰岛素浓度的变化，用RT—PCR和免疫组化方法检测治疗后大鼠肝脏、骨骼肌等组织胰岛素原基因mRNA和蛋白的表达水平。结果（1）接受重组质粒pCMV／胰岛素原DNA裸质粒的两治疗组糖尿病大鼠血糖显著下降。其中，门静脉组大鼠血糖下降约7mmol／L，且能维持3—4周，血清胰岛素水平显著升高，且可持续表达4周；肌肉注射组大鼠血糖下降约4mmol／L，且能维持1—2周，血清胰岛素水平明显升高，并持续表达2周。（2）门静脉治疗组大鼠的肝脏及肌肉注射治疗组大鼠的骨骼肌分别能够检测到大鼠胰岛素原mRNA和蛋白的表达，而对照组则显示阴性结果。结论裸质粒门静脉注射和肌肉注射两种方法均获得了糖尿病大鼠胰岛素原基因的有效表达和血糖水平的显著降低，是糖尿病基因治疗的有效手段之一。