卵巢癌患者CD4^+T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达特点及临床意义

目的:探讨卵巢癌患者外周血和肿瘤组织CD4+调节T细胞中性T细胞相关分子标志物(Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR)的表达特点及其临床意义。方法 :流式细胞术检测31例卵巢癌患者,26例卵巢良性肿瘤患者和20例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR的表达水平。结果:卵巢癌组织CD4+T细胞中的Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD127在卵巢癌组织CD4+T细胞中所占的比例显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01);卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平均显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01),CD127的表达水平显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3的表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中CD127的表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血及肿瘤组织中CD4+Treg细胞的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,Foxp3和CD127的表达水平与肿瘤分期有关,提示这两种标志物可作为判断卵巢癌疾病进展的重要指标。

手术对卵巢癌患者外周血调节性T细胞的影响及临床意义

目的探讨手术前后卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD28-及CD8+Foxp3+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法流式细胞术检测31例卵巢癌患者术前及术后外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD28-及CD8+Foxp3+调节性T细胞的表达水平,并与20例卵巢良性肿瘤及20例健康体检者做比较研究。结果卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD28-及CD8+Foxp3+调节性T细胞的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤及健康体检者(P<0.01),Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血调节性T细胞表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);卵巢癌患者外周血调节性T细胞的表达水平与病理类型无关;手术后卵巢癌患者外周血调节性T细胞的比例显著低于手术前(P<0.05);Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌患者手术后调节性T细胞的比例与健康体检者相比无统计学差异,而Ⅲ/Ⅳ期病人术后调节性T细胞的比例仍显著高于健康体检者(P<0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD28-及CD8+Foxp3+调节性T细胞与卵巢癌的病理进程及肿瘤负荷相关。

2013年某教学医院鲍曼不动杆菌临床分布及耐药性分析

目的了解2013年某院感染鲍曼不动杆菌临床分布及耐药性情况,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法对2013年1月至12月临床送检的痰、血液和尿液等标本进行细菌培养、分离与鉴定并进行抗菌药物敏感试验。采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统或API细菌鉴定板条进行菌种鉴定。采用纸片琼脂扩散法(Kirby-Bauer法,KB法)进行药敏试验。采用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果 2013年共分离1 417株鲍曼不动杆菌,呼吸道标本中所占比例最高,达到86.4%。临床分布以外科最多(28.2%,399/1 417),其次是老年科(25.7%,364/1 417)与监护病房(24.1%,341/1 417)。2013年该菌株对临床常用抗菌药物高度耐药,除了米诺环素与阿米卡星外,其他药物耐药率均在65%以上。碳青霉烯类药物亚胺培南、美洛培南耐药率高达80.7%和81.9%。结论鲍曼不动杆菌在本院耐药率较高,应加强抗菌药物的合理使用,并建立切实有效的感染控制措施,阻断多重耐药菌的传播。

肿瘤相关M2型巨噬细胞在卵巢癌组织中的分布及意义

目的探讨卵巢癌组织中M2型巨噬细胞的分布及其对卵巢癌侵袭转移相关基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法免疫组织化学法检测上皮性卵巢癌(34例)、交界性卵巢肿瘤(16例)和卵巢良性肿瘤(18例)组织切片中CD68、CD206和MMP-9的表达,比较卵巢癌样本中阳性表达细胞数与患者年龄、病理类型、FIGO分期、组织学分化和淋巴结转移的关系。并利用流式细胞术比较其中12例上皮性卵巢癌和11例卵巢良性肿瘤新鲜组织中CD68+~CD206+~细胞比例。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)方法分别评价卵巢癌和卵巢良性肿瘤组织内MMP-2、MMP-9和MMP-10水平。结果卵巢癌组织中CD68+~、CD206+~和MMP-9+~细胞数量明显高于交界性卵巢肿瘤和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05),卵巢癌组织中CD68+~、CD206+~和MMP-9+~细胞数与患者FIGO分期和淋巴结转移均有统计学关系(P<0.05)。卵巢癌组织中CD68+~和CD206+~细胞数量呈正相关关系(r=0.508,P<0.05),且MMP-9+~与CD68+~和CD206+~细胞数量也分别呈正相关(r=0.611,P<0.001;r=0.744,P<0.001)。卵巢癌新鲜组织中CD68+~CD206+~细胞比例明显高于良性卵巢肿瘤(P<0.05),且卵巢癌组织MMP-2、MMP-9和MMP-10 m RNA和蛋白表达水平较卵巢良性肿瘤具有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌组织中具有较高水平的M2型巨噬细胞,与卵巢癌侵袭转移和临床进展有重要的联系。

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过Toll样受体增强卵巢癌细胞MMP-9的表达

目的探讨M2型巨噬细胞在卵巢癌侵袭转移中的作用及其可能涉及的Toll样受体(TLRs)信号通路机制。方法用320 nmol/L佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞,直接免疫荧光技术鉴定M2型巨噬细胞;Transwell小室建立M2细胞与卵巢癌细胞SKOV3体外非接触式共培养模型;24和48 h共培养后,实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime PCR)检测SKOV3内TLR1、2、6和基质金属蛋白酶MMP-9水平,蛋白免疫印记(Western blot)检测My D88、TRAF6、P-NF-κB和MMP-9表达;TLR1、2和6激动剂分别作用SKOV3 6、12和24 h后评价MMP-9的变化。结果PMA可诱导THP-1成为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与SKOV3共培养24和48 h后,MMP-9的表达水平显著高于对照组(P<0.05);TLR1、2、和6于共培养24和48 h后在SKOV3有较高表达(P<0.05);共培养24和48 h后,TLRs信号通路蛋白My D88、TRAF6和P-NF-κB在SKOV3也同步表达增高(P<0.05);TLR1、2和6激动剂Pam3CSK4、HKLM和FSL-1分别刺激SKOV3 6、12和24 h后MMP-9 mRNA水平有显著高表达(P<0.05)。结论分化诱导后的M2型巨噬细胞,可能通过刺激和活化TLR1、2、6信号途径,引起卵巢癌细胞SKOV3内基质金属蛋白酶MMP-9水平增加,增强肿瘤的侵袭转移能力。

TGF-β1调控卵巢癌微环境中CD8^+Treg的表型及功能初探

目的初步探讨TGF-β1在卵巢癌微环境中对CD8+Treg诱导过程的作用。方法建立卵巢癌细胞系SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞体外Transwell共培养系统,实验组为SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养组,对照组为健康人外周血CD8+T细胞单独培养组,培养5 d后收集2组共培养上清。ELISA法检测2组上清中TGF-β1水平。在上述共培养体系基础上增加anti-TGF-β1中和组,即在SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体,共培养5 d后收集3组CD8+T细胞。流式细胞术检测各组CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率。将3组CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞按照1∶0、1∶1、1∶5、1∶10、0∶1的比例进行共培养,并在体系中加入anti-CD3及辐照的PBMCs,培养56 h后加入3H-Td R,继续培养16 h后收集细胞,液体闪烁仪检测CPM值。结果与CD8+T细胞单独培养组相比,SKOV3/CD8共培养组上清中高表达TGF-β1(P<0.01)。在共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体后,与SKOV3/CD8共培养组相比,anti-TGF-β1中和组CD8+CD28-Treg、CD8+CD25+Treg和CD8+Foxp3+Treg细胞比例显著下降,但相比CD8+T细胞单独培养组仍然升高。功能抑制试验结果显示,共培养组CD8+T细胞能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖,anti-TGF-β1中和组仅在CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞比例为1∶1时对na?ve CD4+T细胞增殖呈现抑制作用,而单独培养组CD8+T细胞不能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖。结论 anti-TGF-β1可部分中和卵巢癌微环境诱导的CD8+Tregs表型及功能,TGF-β1是卵巢癌细胞生长微环境诱导CD8+Treg分化过程重要的作用因素之一。

实时荧光PCR用于CYP2C19基因多态性检测的性能验证

目的评价实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)基因多态性的精密度、准确度和检测限。方法采用实时荧光PCR对基因型为*1/*1、*1/*2、*1/*3和*1/*17的DNA样本分别作批内重复扩增10次,以评价方法的精密度;比较实时荧光PCR与Sanger测序法的检测结果,以评价方法的准确性;对2倍梯度稀释的DNA样本(基因型为*1/*1、*1/*2、*1/*3和*1/*17)进行实时荧光PCR扩增,以评价方法的最低检测限。结果批内重复10次的分型检测结果完全一致,所有PCR的Ct值变异系数(CV)均<2.5%;实时荧光PCR的分型结果与Sanger测序法结果的符合率为100%(20/20),其中*1/*17型1例、*1/*1型3例、*1/*2型5例、*1/*3型5例、*2/*2型4例、*2/*3型2例;实时荧光PCR的最低检测限为1.875 ng/μL DNA。结论实时荧光PCR的基因分型结果稳定、可靠,适用于医学实验室CYP2C19基因多态性的检测。

TLRs介导调控Treg细胞功能的研究进展

Toll样受体（toll like receptors，TLRs）属模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR），是重要的天然免疫分子．被视为联系固有免疫和适应性免疫的重要桥梁。Treg细胞（regulatoryT cells，Tregs）是一群具有抑制功能的T细胞亚群，能够抑制效应性T细胞的增殖、激活以及B细胞产生免疫球蛋白等。近来有研究表明Ⅲ．Treg细胞上TLRs的激活可增强或削弱Treg细胞的免疫抑制功能．TLRs对Treg细胞功能的调节作用可能对感染、肿瘤免疫监视、移植排斥等过程产生影响。因此，了解Treg细胞和TLRs间的联系，可能有助于发现新的治疗靶目标和治疗方法。

卵巢癌细胞生长微环境诱导生成的CD8＋Treg的表型及功能

目的:体外Transwell共培养实验研究卵巢癌细胞生长微环境中CD8^+Treg的诱导及其功能。方法:建立SK-OV-3与外周血CD8^+T细胞体外Transwell共培养系统。流式细胞术和荧光定量PCR检测CD8^+T细胞中CD25、Foxp3、CTLA-4、CD28及GITR的表达率。将两组CD8^+T细胞和nave CD4^+T细胞进行共培养,液体闪烁仪检测CPM值。结果:与单独培养组相比,共培养组CD8^+T细胞中Foxp3,CTLA-4的表达率增高,CD28的表达率降低(P<0.001)。共培养组CD8^+T细胞能抑制na觙ve CD4^+T细胞的增殖,而单独培养组CD8^+T细胞不能抑制nave CD4^+T细胞的增殖。结论 :卵巢癌细胞生长微环境能够诱导具有抑制作用的CD8^+Treg的生成,这不仅为更加深入地研究CD8^+Treg提供了可能,也为卵巢癌的免疫治疗提供了新思路。

卵巢癌患者TLR1、TLR2、TLR6信号通路活化诱导PBMC前炎症细胞因子分泌

目的观察卵巢癌(OC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体1(Toll-like receptors 1,TLR1)、TLR2及TLR6信号通路活化后前炎症细胞因子分泌水平,研究其在OC发病中的可能机制。方法纳入OC患者、女性妇科良性疾病(BC)患者及同期体检健康女性(NC)各13例,用密度梯度离心法分离PBMC并用TLRs的相应配体刺激PBMC,用CBA免疫荧光法检测细胞中前炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平;用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果 OC组、BC组、NC组未加配体刺激前,PBMC中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与未经配体刺激PBMC相比,OC组PBMC经TLR1配体Pam3CSK4刺激24 h后,IL-1β分泌水平增高,差异具有统计学意义(t=-2.667,P<0.05);TLR2配体HKLM刺激24 h后,OC组IL-1β、TNF-α分泌水平亦增高,差异有统计学意义(t分别为-5.391和-3.564,P均<0.05);相较于未经配体刺激时,BC组、NC组的PBMC在相应TLRs配体刺激后,IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平变化无统计学意义。OC患者PBMC经Pam3CSK4、HKLM、FSL-1刺激后,TLRs信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调。结论 OC患者PBMC中TLR1、TLR2、TLR6经相应配体刺激后可活化TLR信号通路,并诱导前炎症细胞因子IL-1β、TNF-α分泌水平增加,在OC的发生发展中发挥作用。

沉默PDK1基因抑制卵巢癌细胞系SKOV3的增殖及侵袭

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)基因对卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力的影响,并初步探讨其机制。方法采用PDK1 siRNA及control siRNA分别瞬时转染干扰实验组和阴性对照组SKOV3细胞。运用Western blot及real-time PCR验证转染效率后,CCK8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖及克隆能力;Transwell小室法及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力;流式细胞计量术探索细胞周期及凋亡情况。结果实验组细胞增殖及克隆(P<0.01),侵袭及迁移能力(P<0.05)显著低于对照组;SKOV3细胞内PDK1基因沉默后缩短了细胞复制期并提高了其早期凋亡能力(P<0.01)。结论沉默PDK1基因可显著抑制SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力,并可缩短细胞S期,增加细胞凋亡率。

卵巢癌细胞通过P38 MAPK通路促进CD8^+调节T细胞的生成

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在卵巢癌细胞(SKOV3)诱导CD8+Treg分化过程中的作用。方法建立SKOV3与健康人CD8+T细胞体外共培养体系,设置CD8+T细胞单独培养组为对照组。共培养5 d后,收集各组CD8+T细胞,荧光定量PCR和流式细胞术检测CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率;功能抑制试验检测两组CD8+T细胞对nave CD4+T细胞增殖能力的影响;Western blot检测MAPK通路相关蛋白(ERK/p-ERK、JNK/p-JNK、P38 MAPK/p-P38 MAPK)的表达水平;P38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理CD8+T细胞后,评价CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达变化。结果共培养组CD8+T细胞中CD25及Foxp3表达率均显著高于对照组(P<0.05),CD28表达率显著低于对照组(P<0.05);共培养组CD8+T细胞相比对照组,抑制nave CD4+T细胞的增殖力增强;Western blot结果显示,共培养组p-P38 MAPK的表达水平显著高于对照组(P<0.05),SB203580预处理后CD8+T细胞中Treg相关标志物表达率均下调。结论卵巢癌细胞通过活化CD8+T细胞的P38 MAPK信号通路诱导具有抑制作用的CD8+Treg的生成,促进肿瘤进展。

单抗NJ001杀伤肺腺癌细胞机制的初步研究

目的:观察单克隆抗体NJ001杀伤肺腺癌细胞的活性,并探索其分子机制。方法:选择肺腺癌细胞株SPC-A1作为研究对象,流式细胞仪检测细胞凋亡率;相差显微镜观察凋亡细胞形态学改变;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3、PARP和Bcl-2、Bax表达的变化。结果:单克隆抗体NJ001可以导致SPC-A1细胞发生凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性。显微镜下观察到SPC-A1细胞皱缩变圆,甚至脱落,呈现典型的凋亡改变;Western blot检测结果显示,在单抗NJ001作用下,PARP蛋白被剪切,caspase-3的表达量因被剪切而降低,caspase-8和caspase-9蛋白均表现活化,表现为cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白的表达上调。另外促凋亡蛋白Bax表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。结论:单克隆抗体NJ001能通过诱导细胞凋亡发挥其杀伤肺腺癌细胞的活性,且其凋亡机制与caspase活化和Bcl-2家族蛋白的调节有关。

顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡过程中miR-638的表达水平研究

目的探讨体内外顺铂(DDP)给药后miR-638表达水平及变化,评价miR-638表达在DDP诱导人肺腺癌细胞凋亡中的意义。方法建立荷SPC-A1瘤的BALB/c裸鼠移植瘤模型,经尾静脉注射DDP后,检测各组裸鼠血清miR-638表达水平。体外培养SPC-A1并经DDP作用不同时间后,检测培养上清miR-638表达水平及细胞凋亡率。收集60例肺腺癌患者DDP化疗前后的血清样本,检测miR-638在化疗前后的表达改变情况并分析其与预后的关系。结果体外DDP处理SPC-A1细胞后凋亡率在24、48和72 h时均显著高于同时间点对照组(P均<0.01),且随时间延长显著增高(任意两组间P<0.01);DDP作用后培养上清中miR-638表达水平呈时间依赖性增高,且在24、48、72 h均显著高于相应对照组(P均<0.05);且SPC-A1培养上清中miR-638水平与凋亡率呈正相关(r=0.711,P<0.01);DDP治疗组裸鼠血清miR-638表达水平明显高于生理盐水处理组和未治疗对照组(P均<0.05),而后两组间差异无统计学意义(P>0.05);接受DDP化疗后血清miR-638表达上调的患者总体生存率明显高于表达下调者(P<0.05)。结论 miR-638在体内和体外DDP诱导的人肺腺癌细胞凋亡中均出现表达上调,提示miR-638可能对肺癌DDP化疗中判断预后及疗效观察具有一定价值。

顺铂诱导SPC-A1人肺腺癌细胞凋亡过程中miR-27a的表达及意义

目的:检测miR-27a在顺铂(DDP)体外诱导人肺腺癌细胞株SPC-A1凋亡过程中的表达变化,探讨其与细胞凋亡之间的相关性及其检测的临床意义。方法:体外培养SPC-A1细胞,实验组加入终浓度为2.5μg/ml DDP,同时设置不加DDP的对照组。观察12、24、48和72 h后显微镜下细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time PCR检测培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a的表达变化。结果:DDP(2.5μg/ml)组SPC-A1细胞形态呈凋亡改变,在48和72 h凋亡率分别为(59.3±2.5)%和(76.4±3.1)%,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DDP(2.5μg/ml)组培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a含量在24、48和72 h均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DDP(2.5μg/ml)组培养上清液中miR-27a含量在12、24、48和72 h逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-27a在DDP诱导的SPC-A1细胞凋亡中表达升高,提示其可能参与细胞凋亡调控;对miR-27a进行定量检测有望用于对肺腺癌化疗疗效的评估。

肺癌细胞抑制CD4^+T细胞IFN-γ基因表达的机制研究

目的:研究肺癌细胞能否直接影响CD4+T细胞干扰素-γ(IFN-γ)基因启动子甲基化水平。方法:ELISA法检测肺癌组(n=30)及健康对照组(n=30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血CD4+T细胞(n=8),提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4+T细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外Transwell共培养体系(n=6),并设健康人CD4+T细胞单独培养为对照组,培养5 d后分别收集CD4+T细胞。CD4+T细胞按上述法进行TA克隆测序。同时CD4+T细胞经anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,ELISA法检测两组上清IFN-γ表达水平,RT-PCR检测CD4+T细胞IFN-γmRNA表达水平。结果:肺癌组血浆IFN-γ水平显著低于健康对照组[(69.30±38.56)pg/ml vs(92.62±34.75)pg/ml,P=0.017];肺癌组CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组(84.6%vs 68.6%,P<0.001);肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关(r=-0.850 3,P=0.010 7)。体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4+T细胞anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,IFN-γ表达水平显著下降[6 h:(14.53±7.12)pg/ml vs(36.14±23.51)pg/ml,24 h:(7.81±4.02)pg/ml vs(24.85±15.58)pg/ml],6 h对照组CD4+T细胞IFN-γmRNA表达水平为实验组的2.37倍。实验组CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组(85.4%vs70.9%)。结论:肺癌细胞可诱导CD4+T细胞IFN-γ基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-γ基因表达下调,可能对肺癌患者的免疫抑制起重要作用。

基因测序技术及其临床应用

基因是控制生物性状的基本遗传单位,与人类疾病密切相关,随着分子生物技术的飞速发展,基因测序已从早期昂贵低效的一代测序技术发展到高通量二代测序技术直至最新的单细胞实时测序技术,高效快捷精确的新一代测序技术为生命科学研究和临床疾病诊断提供有力检测手段的同时,也存在伦理监管、技术准入和质量标准等方面的问题。只有正确规范地在临床实验室开展基因测序,才能更好地发挥其在临床应用中的价值。

自制室内质控血浆在罗氏COBAS AmpliPrep/TaqMan 48超敏PCR检测系统的应用

目的制备含有不同浓度的乙型肝炎病毒(HBV)DNA或丙型肝炎病毒(HCV)RNA的血浆标本,用于罗氏COBAS Ampli Prep/Taq Man 48超敏PCR检测系统定量测定HBV DNA及HCV RNA的室内质控品,评价其临床可行性。方法将含有高浓度HBV DNA(107数量级)或HCV RNA(105数量级)的临床血浆标本用健康志愿者血的临床血浆标本稀释至105和102数量级,均分装数管,以罗氏COBAS Ampli Prep/Taq Man 48超敏PCR检测系统分别对质控血浆中HBV DNA和HCV RNA定量测定20次,采用"即刻法"质控方法,计算每批次的离散指数(SI)上限和下限值,进行室内质控动态监测。结果 HBV DNA及HCV RNA室内质控血浆每批次检测SI上限和下限值均在控,HBV DNA低浓度和高浓度20次检测结果的均值(对数值)分别为2.24和5.72,标准差均为0.12,批间CV值分别为5.41%和2.17%;HCV RNA室内质控血浆检测结果的均值(对数值)分别为2.26,标准差为0.13,批间CV值为5.80%。结论含HBV DNA、HCV RNA血浆标本制备简单,单次制备量大、稳定性好,可用于罗氏COBAS Ampli Prep/Taq Man 48超敏PCR检测系统的"即刻法"室内质控。

晚期非小细胞肺癌疗效监测的研究进展

晚期非小细胞肺癌（NSCLC）具有高度异质性，其临床治疗强调个体化和综合性。随着肺癌分子机制的深入研究和不断阐明，以及分子靶向、单克隆抗体、免疫制剂和抗血管生成等多种新型药物的临床应用，晚期NSCLC患者疗效评价已不再局限于基于瘤体大小变化的实体瘤疗效评价标准，基于蛋白质和核酸水平的分子影像学、分子病理学和液体活检将是晚期NSCLC患者疗效监测新的发展方向。