妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞来源的树突样细胞刺激T细胞作用的比较

目的:观察不同妊娠阶段胎盘源性树突样细胞刺激T细胞活化增殖特点的差异,为分析胎盘免疫细胞在妊娠耐受和分娩发动中的可能作用提供线索。方法:机械分离中、晚期胎盘中的单核-巨噬细胞,以内皮逆穿越系统诱导其分化为树突状细胞(DC)。将不同妊娠阶段胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞与同种异体T细胞共育,以CCK-8法检测其激发同种异体T细胞增殖能力及其刺激同种异体T细胞所产生的胞内细胞因子,并用流式细胞仪分析DC样细胞表型。结果:足月胎盘来源的单核-巨噬细胞经过内皮单层正逆双向穿越诱导培养后,细胞出现树突状形态改变,并高表达与树突状细胞免疫激活有关的细胞表面标志物CD80、CD86、HLA-DR。足月妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源DC样细胞具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,同种异体淋巴细胞活化时细胞内IFN-γ+亚型的表达十分明显,但几乎不出现IL-10+亚型。但相比之下,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力却很弱(P<0.05),被刺激的同种异体T细胞中CD8-(即CD4+)亚群IFN-γ+细胞显著减少(P<0.05),而CD8-和CD8+亚群中IL-10+细胞亚群却显著增多。对细胞的表型分析结果显示,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞CD80、CD86及HLA-DR的表达均显著低下(P<0.05)。结论:不同妊娠时期胎盘单核-巨噬细胞分化形成具有免疫激活作用的树突状细胞的能力不同,提示其生物学特性有所不同,其可能与妊娠耐受和分娩发动有关。

KSHV包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A和gL的克隆及真核表达

目的:克隆并在293T细胞中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A与gL。方法:以BCBL-1细胞总DNA为模板,用PCR方法扩增出K8.1和gL基因;以BCBL-1细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出K8.1A基因。将PCR产物克隆进真核载体pcDNA3.1(+)内,分别构建含K8.1、K8.1A和gL基因的重组真核表达质粒。重组质粒转染293T细胞,用Westernblot的方法检测K8.1和K8.1A在293T细胞中的表达;RT-PCR方法检测gL基因在293T细胞中的转录。结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的K8.1、K8.1A和gL基因与GenBank中已登记的KSHVK8.1、K8.1A和gL基因序列100%同源。Westernblot结果显示,在约35ku位置有目的条带,与预期的重组K8.1和K8.1A蛋白大小一致。RT-PCR结果显示约在500bp位置检测到特异性条带。结论:KSHVK8.1、K8.1A和gL编码基因在293T细胞中获得正确表达。