黑色素瘤相关抗原-A3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定及其在肺癌细胞株中的表达

目的构建重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，并检测其在人肺癌细胞系A549的表达情况。方法利用DNA重组技术将MAGE-A3基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中，经限制性酶切和测序鉴定重组载体。将重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP与包装质粒pCMV-dR8．91及pCMV—VSVG共转染人胚肾上皮细胞株293TAB，包装重组慢病毒PLV-MAGE—A3-GFP，并感染人肺癌细胞株A549，用Westernblot法检测MAGE—A3蛋白的表达情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实，构建了重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，免疫荧光显微镜下观察显示慢病毒感染A549细胞后，MAGE-A3基因能够在细胞内正确地转录、翻译并稳定表达MAGE—A3基因。结论成功构建了慢病毒载体PLV—MAGEA3-GFP，包装的病毒能够成功感染人肺癌细胞系A549，并使MAGE—A3基因得以稳定表达，为进一步对非小细胞肺癌进行免疫治疗提供了适合的稳定转染的载体。