SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系。方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1、PANC-1和SW1990中的表达水平。重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化。结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3、CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高。经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达。结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1、SW1990中SOX7基因的表达沉默。

逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究

目的:分离及克隆胰腺癌细胞基因组中K-ras基因片段,构建含反义K-ras癌基因逆转录病毒载体并探讨其对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响及可能的分子机制. 方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHI 和EcoRI位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3、PC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1、4及侧翼序列,将目的基因克隆入逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒,经PT-67细胞包装后获得重组逆转录病毒.将该重组逆转录病毒转染上述细胞,经G418筛选获得稳定细胞,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增生、凋亡和对胰腺癌p21蛋白表达;建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,观察反义K-ras基因体内治疗效果. 结果:成功构建含反义K-ras基因的重组逆转录病毒载体.反义K-ras基因抑制胰腺癌细胞增生,诱导细胞凋亡、下调K-rasmRNA和P21蛋白表达,并抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长. 结论:反义K-ras基因可使胰腺癌细胞增生受到抑制,并可诱导细胞凋亡和下调K-rasmRNA和P21蛋白表达.

成人胆总管囊肿的诊断和治疗

目的探讨成人胆总管囊肿的诊断与治疗方法。方法对20例成人胆总管囊肿患者的临床资料进行回顾性分析,术后随访平均13个月,随访率85%。结果20例患者均经影像学检查确诊,Todani分型:Ⅰ型16例,Ⅲ型1例,Ⅳa型2例,Ⅴ型1例,其中17例患者行胆总管囊肿切除+胆(肝)管空肠Roux-en-Y术,1例行胆总管囊肿空肠Roux-en-Y术,1例行胰十二指肠切除术,1例行肝左叶切除术。术后胆瘘1例,无手术死亡。结论胆总管囊肿切除+胆(肝)管空肠Roux-en-Y术是治疗胆总管囊肿的首选方法。

胆总管囊性扩张的手术治疗

报道26例胆总管囊性扩张，对其病因、术式选择及疗效评价加以探讨。

钩突部胰腺肿瘤术式选择应注意的问题

胰腺头癌的外科治疗效果差，而钩突部胰腺癌（uncinateproeess pancreatic cancer，UPPC）的切除率更低、预后更差，同时随着BUS、CT等的广泛应用，钩突部位的良性肿瘤或低度恶性的肿瘤的检出率逐渐增多。如何恰当地处理上述肿瘤是胰腺外科医生所面临的重要课题。

应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌血清肿瘤标志物

目的:比较胰腺癌患者与健康志愿者血清蛋白的差异以寻找候选血清肿瘤标志物,为胰腺癌早期诊断提供依据。方法:通过免疫亲合柱去除丰度最高的14种血清蛋白,用双向电泳分离蛋白并比较差异。选取在胰腺癌患者血清中明显差异表达蛋白点,行质谱鉴定和生物信息学分析。结果:建立了稳定性、重复性良好的凝胶蛋白图谱。对筛选出的在胰腺癌患者血清中明显差异表达的78个蛋白点,共有54个蛋白点被成功鉴定,其中胰腺癌患者血清中高表达者29个,低表达者25个。结论:胰腺癌患者、健康志愿者血清蛋白之间存在明显差异,通过蛋白质组学方法可筛选并鉴定出这些差异蛋白,后者有望为早期诊断胰腺癌提供依据。

DNA甲基化异常对mir-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中表达影响

目的:描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对miRNA表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化状态和表达的影响。方法:甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株PANC-1中存在异常甲基化的miRNA。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理体外培养的PANC-1细胞,甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)结合亚硫酸氢盐修饰结合测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)检测用药前后miR-615-5p的甲基化状态的改变。采用RT-PCR定量检测用药前后miR-615-5p表达量的差异。结果:通过MSP和BSP发现在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化率明显高于正常组织。对胰腺癌细胞株用去甲基化剂5-aza-dC的作用,发现miR-615-5p甲基化率减少并伴随着表达的重新激活。结论:胰腺癌细胞株PANC-1中的miR-615-5p表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中miR-615-5p的表达沉默。

1,25(OH)_2D_3对糖尿病大鼠胰腺移植后急性排斥反应的免疫调控研究

目的:探讨1,25(OH)_2D_3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用。方法:以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,分A组(急性排斥对照组);B组(雷帕霉素治疗组);C组[1,25(OH)_2D_3治疗组],每组15例;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植物CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞表达水平;ELISA检测受体血清IL-2、4、10、12表达水平;在诱导Lewis大鼠骨髓细胞定向分化为树突状细胞(DC)时加入1,25(OH)_2D_3,流式细胞仪检测CD80,CD86及MHCⅡ类分子表达情况。结果:预防性使用1,25(OH)_2D_3、保护移植物功能(血糖5.12±0.89VS12.41±1.16),延长移植后受体平均存活时间;CD8+T细胞计数C、B与A组相比均有减少,差异有统计学意义(P<0.01)。CD4+T细胞C、B与A组的差异有统计学意义。CD4+CD25+调节性T细胞A、B、C组逐渐升高,有统计学意义(P<0.01),且以C组较为明显(C组VSA组P<0.01);血清Th1类细胞因子浓度明显降低,Th2类细胞因子浓度明显增高;在体外实验中,1,25(OH)_2D_3显著抑制了DC的成熟过程及其表面共刺激分子的表达。结论:1,25(OH)_2D_3可抑制DC发育成熟,诱导产生基因耐受性树突细胞,促进调节性T淋巴细胞的增生,抑制致病性T淋巴细胞,抑制急性排斥反应,延长受体存活时间。

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植胰腺存活的影响

目的探讨共刺激阻断剂PD-L1Ig与雷帕霉素（rapamycin,RPM）联合应用对大鼠移植胰腺存活的影响。方法以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,各40只。Lewis大鼠先注射链脲佐菌素制备成糖尿病模型,随后建立原位胰腺移植模型。随机分为移植组、PD-L1Ig治疗组（PD-L1Ig组）、RPM治疗组（RPM组）和PD-L1Ig＋RPM组（联合组）,观察各组术后血糖和移植胰腺病理改变、移植胰腺存活时间。移植后第7天各组处死2只大鼠,取受体与供体脾细胞做混合淋巴细胞反应（MLR）。结果移植后第1天血糖恢复正常,第7天移植组血糖较各治疗组明显升高（P〈0.01）,各治疗组中以联合组降糖效果最显著。PD-L1Ig组、RPM组的移植胰腺平均存活时间分别为（9.1±1.3）d和（12.5±1.2）d,较移植组的存活时间（5.2±0.7）d明显延长（P〈0.01）;联合组的存活时间则长达（23.9±1.8）d,与其他各组差异显著（P〈0.01）。移植后7d,PD-L1Ig组、RPM组移植胰腺有较多淋巴细胞浸润,联合组移植胰腺淋巴细胞浸润很少。结论PD-L1Ig与RPM联合应用可有效抑制细胞免疫应答,干预排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间。

12例胰岛细胞瘤围手术期血糖监测的安全护理

目的：探讨胰岛细胞瘤围手术期血糖监测的安全护理疗效。方法选取我院2012年1月至2013年12月行手术治疗的12例胰岛细胞瘤患者，给予围术期血糖监测安全护理，分析围术期安全护理的疗效。结果本组均顺利手术，术后并发胰瘘1例，经保守治疗痊愈。术后出血1例，行二次手术后痊愈。术后第一天反跳性血糖波动为6.1-17.6 mmoml/ L。住院期间均未出现术后感染。出院前患者空腹血糖波动为4.6-8.8 mmoml/ L。随访患者6个月内无低血糖出现。结论做好胰岛细胞瘤患者围手术期安全护理，能有效的配合医生开展手术，减少意外事件的发生和护理并发症，提高治愈率。

门静脉回流的胰肾联合移植大鼠模型制备

目的探索建立大鼠胰肾联合移植（SPK）模型的手术技巧。方法以雄性健康近交封闭群SD大鼠作为供体，Wistar大鼠作为受体，行整块胰肾十二指肠移植。采用供体腹主动脉和受体腹主动脉端侧吻合，供体门静脉和受体肠系膜上静脉端侧吻合，供体肾静脉和受体肾静脉袖套式吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合，最后将十二指肠近端结扎，远端腹壁造瘘。结果共正式实验40例，手术成功率为85％。供体肾、胰植入受体后立即恢复良好的血液循环，移植后24h血糖、肌酐降为正常，术后移植胰腺具有内分泌功能。结论此模型切实可行，手术成功率高，术后并发症少，可用于SPK基础方面的研究。

急性胰腺炎的实验诊断研究进展

急性胰腺炎是急腹症中的一种常见疾病,随着免疫学、分子生物学等相关学科的不断发展,对急性胰腺炎(AP)的早期诊断及对AP严重程度的评估取得了相当大的进展。本文就结合近年来与此有关的实验室检查指标的研究进展做一综述。

床旁交接班流程的优化与实践

目的:探讨床旁护理交接流程的优化及实施效果。方法:成立床旁交接流程管理小组,评估原有交接流程,对交接形式、内容、要求等进行优化;进行组织培训,使护士熟练掌握优化后的新交接流程;将新流程应用于临床实践,对交接流程优化前、后的相关护理质量指标进行评价。结果:床旁交接流程优化后,患者对交接环节中部分项目评分差异有统计学意义(P<0.05),对交接工作的满意度评分由(4.42±0.50)分提高到(4.76±0.43)分(P<0.05);责任护士对患者健康状况掌握程度评分由(87.14±3.66)分提高到(91.29±1.86)分(P<0.01),流程优化后每名责任护士平均节省了32min的交接和评估时间。结论:床旁交接流程的优化,提高了交接的质量、效率、患者满意度,增加了护士对于患者健康状况的了解程度,体现了优质护理服务的专业内涵。

我院无陪护护理模式探索与实践

为贯彻落实《护士条例》和《中国护理事业发展规划纲要(2005—2010年)》,推进江苏省护理工作向提高质量、满足人民群众健康需求的方向发展,近年来江苏省卫生厅在护理管理运行机制上进行了多项改革与探索,取得了一定的成效。本刊以专题报道形式将该省部分医院有关病房无陪护护理模式的运作、专科护士的培训及其使用、表格式护理文书应用的经验介绍给读者。今后还将陆续对各地护理管理方面的进展状况进行专题报道,以期达到相互交流,并供读者参考、借鉴。

Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究

目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ双酶切后再连接到Lv-CMV-EGFP vector中,并对重组后的质粒进行双酶切和测序分析;VASH2过表达载体、pVSV-G及delta8.91 3个质粒共转染293T细胞,获得慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,经流式细胞仪分选阳性细胞;提取细胞总RNA和总蛋白,利用real-time PCR和Western blot鉴定稳转细胞株中VASH2的表达,用MTT法和细胞周期法检测各组HepG2的增殖能力。结果:成功构建VASH2慢病毒过表达载体,感染肝癌细胞株HepG2后能够稳定高表达VASH2;稳定高表达VASH2的HepG2增殖能力明显增强(P<0.05)。结论:成功构建了VASH2慢病毒过表达载体,并发现VASH2可以促进HepG2的增殖能力,这为进一步研究VASH2在肝癌中的功能及作用机制奠定了基础。

改进胃管固定预防鼻部压疮的发生

目的改进胃管固定方法,预防鼻部压疮的发生。方法采用3 M丝绸胶布,距离鼻尖0.2~0.3 cm左右再缠绕于鼻胃管。结果 176例患者均用3M胶布固定胃管,改良前90例发生鼻部压疮5起,改良后86例无鼻压疮发生。结论改进的胃管固定方法,不仅固定美观、牢固,而且能预防鼻部压疮的发生。

舒心病房建设中的制约因素及对策的探讨与分析

探讨了实现以人为本服务宗旨,深化整体护理内涵,创建舒心病房的制约因素,包括基础性、环境性、体制性、观念性和现实性等因素。提出了转变理念、规范管理、选准目标、配套制度等方面的对策措施。