三裂叶豚草花粉新型过敏原钙结合蛋白分子克隆,表达及致敏活性

目的研究三裂叶豚草花粉过敏原钙结合蛋白(Amb t polcalcin1)的基因信息和致敏情况。方法通过转录组测序分析结果,鉴定出一个潜在的Amb t polcalcin1基因序列;克隆Amb t polcalcin1基因,获得Amb t polcalcin1蛋白。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验(Western blot)研究Amb t polcalcin1基因的致敏性;并用ESPript3.0软件进行同源性分析。结果ELISA结果显示,三裂叶豚草花粉过敏原Amb t polcalcin1在三裂叶豚草花粉过敏患者血清中的IgE结合率为14%(14/100)。Western blot结果显示14份阳性血清中4份显示阳性条带。进化树分析结果显示,三裂叶豚草花粉Amb t polcalcin1与其近缘物种矮豚草属花粉中的两个过敏原Amb a 9.0101和Amb a 9.0102的同源性最高,分别为95.18%和93.98%。结论三裂叶豚草花粉过敏原钙结合蛋白Amb t polcalcin1在豚草花粉过敏患者的致敏率为14%。

鼻腔中央区变应性疾病研究进展

鼻腔中央区变应性疾病(central compartment allergic disease,CCAD)是国际上新近命名的一种慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)亚型,其特征在于吸入性变应原在鼻腔中央区域黏膜产生2型炎症反应。早期可表现为局限于中鼻甲、上鼻甲及鼻中隔后上部位的黏膜水肿和息肉样变,进展后可导致邻近窦口发生阻塞,形成弥漫性鼻窦炎伴鼻息肉(diffuse sinus-itis with nasal polyps,CRSwNP),给治疗带来了更多挑战。文章就CCAD临床症状、内镜和影像学表现、致敏特点及组织病理学特征做一综述,总结CCAD与其他类型CRS的本质区别,为优化临床诊疗策略提供一定参考。

RUNX1在鼻息肉黏膜上皮细胞凋亡中的作用研究

目的探究Runt相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1,RUNX1)在鼻息肉(nasal polyps,NPs)组织中的表达差异,并分析RUNX1在NPs原代人鼻黏膜上皮细胞(primary human nasal epithelial cells,pHNECs)凋亡中的作用及调控机制。方法以免疫蛋白印迹(WB)和免疫组织化学染色检测组织层面RUNX1的表达水平。采用肿瘤坏死因子α(TNF-α,20 ng/ml)体外诱导pHNECs发生凋亡,进行Hoechst染核观察细胞凋亡。随后,通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和WB检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因2(B-cell lymphoma-2,BCL-2);BCL2相关蛋白质X(BCL2-associated X,BAX);含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的表达,评估凋亡水平。将sh-RUNX1-6质粒转染至pHNECs凋亡模型,用WB和流式细胞术评估RUNX1沉默对凋亡的影响。通过SPSS 19.0软件和GraphPad Prism 5软件进行统计学分析。结果NPs组织中RUNX1的表达明显高于正常下鼻甲组织,差异具有统计学意义(0.274±0.042比0.110±0.027,t=9.675,P<0.05)。与下鼻甲组织相比,NPs中BAX和Caspase-3高表达,而BCL-2低表达,差异具有统计学意义(BAX 0.346±0.032比0.302±0.037,Caspase-30.228±0.061比0.158±0.065,BCL-20.090±0.047比0.276±0.057,t值分别为2.680、2.361、7.575,P值均<0.05)。TNF-α诱导后pHNECs中RUNX1的蛋白、mRNA表达和凋亡水平均呈时间依赖性升高,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。sh-RUNX1-6质粒转染能够下调TNF-α刺激下pHNECs中RUNX1的表达。沉默TNF-α刺激下pHNECs中的RUNX1后,细胞中BAX和Caspase-3的蛋白水平降低,而BCL-2表达增高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论RUNX1在NPs组织中高表达,沉默RUNX1能够抑制TNF-α诱导的pHNECs凋亡,从而减轻细胞炎症损伤。