新型多肽AMPP2在TGF-β1诱导的系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的 探究新型多肽AMPP2在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及相关机制。方法 体外用TGF-β1(10μg/L)及AMPP2(10 ng/L)干预系膜细胞,分为Control组、AMPP2组、TGF-β1组及TGF-β1+AMPP2组。CCK-8法检测各组系膜细胞增殖活力;Western blot法检测各组细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)-4、CDK-6、细胞增殖核抗原(PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)及磷酸化的SMAD同源物3/SMAD同源物3(p-SMAD3/SMAD3)的蛋白表达水平;qPCR法检测各组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的m RNA表达水平。结果 与Control组相比,TGF-β1组系膜细胞增殖活力增加(P<0.05),与TGF-β1组相比,TGF-β1+AMPP2组系膜细胞增殖活力下降(P<0.05);与Control组相比,TGF-β1组CDK-4、CDK-6、PCNA蛋白以及α-SMA、COL-Ⅰ、FN蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05),与TGF-β1组相比,TGF-β1+AMPP2组上述蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05);与Control组相比,TGF-β1组p-SMAD3/SMAD3水平显著升高(P<0.05),与TGF-β1组相比,TGF-β1+AMPP2组p-SMAD3/SMAD3的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论 AMPP2可能通过调控TGF-β1/SMAD3通路抑制系膜细胞增殖。

紫癜性肾炎复发患儿的临床、病理、预后及复发因素分析

目的探讨紫癜性肾炎(HSPN)的复发因素及与预后相关的临床和病理特征。方法随访HSPN38例患儿2～15年,对获得的完整临床及病理资料进行分析,分别按其临床、病理类型,预后分级标准进行分类比较。结果患儿预后与起病时的临床分型、病理类型、小管间质损伤程度及正规治疗疗程密切相关,与发病年龄无关;在导致复发的因素中,感染、尤其上呼吸道感染最常见。结论为改善儿童HSPN预后,除积极控制感染、减少复发次数外,尽早肾活检、制定正规治疗方案极其重要。

肾病综合征患儿肾组织中AP-1及TGF-β_1的表达与激素疗效关系的探讨

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿肾组织激活蛋白_1(AP_1)、转化生长因子_β1(TGF_β1)的表达与激素耐药、肾脏病理损害的相关性,以期阐明PNS激素耐药的可能机制。方法应用非生物素免疫组化ElivisionTMplus法检测48例PNS(SSNS8例,SRNS20例,SDNS20例)患儿肾组织中AP_1亚基c_Jun和TGF_β1的表达水平,用计分法半定量评价肾脏的病理损害程度。结果①肾小球内和肾小管间质内AP_1和TGF_β1的表达,均为SRNS>SDNS>SSNS(P<0.01)。②SSNS、SDNS、SRNS3组肾小球的病理损害分数分别为4.25±1.49,5.25±1.65,8.10±2.57(SRNS与SDRS比较P<0.01,SDRS与SSNS比较P>0.05);SSNS、SDNS、SRNS3组肾小管间质的病理损害分数分别为4.13±0.99,6.90±1.55,11.10±2.94(P<0.01)。③肾组织中AP_1和TGF_β1的表达与肾小球和肾小管间质病理损害的程度呈正相关(相关系数分别为:0.463,0.352;0.547,0.646,P均<0.05)。结论SRNS患儿肾组织中AP_1和TGF_β1的表达增强,并与肾脏病理损害程度密切相关。

蟾蜍灵对阿霉素肾病大鼠蛋白尿的影响及机制研究

目的:研究蟾蜍灵对阿霉素肾病大鼠蛋白尿的影响及相关机制。方法:40只SD大鼠随机分成3组:正常组、模型组和蟾蜍灵组,除正常组外大鼠尾静脉一次性注射阿霉素7.5 mg/kg,1周后,蟾蜍灵组每天腹腔注射蟾蜍灵0.1 mg/kg,持续3周,每周检测24 h尿蛋白定量,治疗3周后处死所有大鼠,全自动生化检测仪检测血清白蛋白、甘油三酯等相关指标,比色法检测血清氧化应激水平,光镜和电镜观察肾小球病理改变,Western blot检测肾皮质中整合素连接激酶(ILK)蛋白的表达。结果:蟾蜍灵能够降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白和血脂水平,减轻足细胞病变,抑制过氧化反应,降低肾皮质中ILK的高表达。结论:蟾蜍灵通过保护足细胞,减轻阿霉素肾病大鼠蛋白尿水平,而其抵抗足细胞损伤的机制可能与其降低氧化应激水平、下调ILK蛋白的表达量相关。

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成的影响

目的结缔组织生长因子(CTGF)是一种重要的参与肾纤维化的细胞因子,为了进一步阐明外源性CTGF的作用机制,该文探讨了外源性CTGF对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为3组:①对照组;②CTGF小剂量组(终浓度为2.5ng/mL);③CTGF大剂量组(终浓度为20ng/mL)。用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR检测HK2细胞胶原Ⅲα mRNA水平的变化,免疫组织化学方法观察HK2细胞胶原Ⅲα的表达。结果不同浓度的CTGF作用于HK2细胞48h后,均可使HK2细胞由椭圆形变为梭形。大剂量CTGF刺激HK2细胞48h后胶原Ⅲα mRNA水平显著升高(P<0.05),大剂量CTGF组HK2细胞胞浆表达胶原Ⅲα也显著增加(P<0.05)。结论CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞发生形态改变,大剂量的CTGF刺激可以增加人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ的合成。

急性肾功能衰竭预后的相关因素探讨

了解影响小儿急性肾功能衰竭（ARF）预后的临床相关因素。方法回顾性总结了1988～1997年住院的ARF患儿39例。结果1．小儿ARF近期死亡率17．9％，总死亡率23．1％，预后不良35．9％。2．年龄越小死亡率越高，婴幼儿ARF死亡率在50％以上；药物性肾衰预后差。Scr与预后明显相关；而病程中合并严重感染、高钠血症、血K+＞6．0mmol／L死亡率高；腹膜透析病人死亡率也明显高于血液透析者。3．发展为慢性肾衰主要取决于原发病类型，而与年龄、Scr、并发症等无关。结论小儿ARF预后差。影响预后的因素包括发病年龄、原发疾病、肾功能减退程度、并发症及治疗等。

系膜增殖性肾炎核因子-κB活化及其与系膜基质扩大的关系

目的 :探讨系膜增殖性肾炎 (Ms PGN)患儿肾组织中核因子 -κB(NF-κB)的活化及其与系膜基质扩大的关系 ,明确 NF-κB在 Ms PGN发病机制中的作用。方法 :应用免疫组化及真彩色医学图像分析系统观察 Ms PGN患儿肾活检组织中 NF- κB的活化 ,并分析其与 Ms PGN病理改变的关系。结果 :Ms PGN患儿肾小球及肾小管中 NF-κB的活性显著增加 ,且与 Ms PGN病变程度及肾间质中单核细胞浸润密切相关。肾小球中 NF- κB的活化与系膜基质扩大呈直线相关。结论 :NF- κB的活化在 Ms PGN发病机制中发挥着重要作用 ,阻断 NF- κB的活化将可能为防治 Ms PGN的发生和进展提供新的思路。

环磷酰胺静脉冲击治疗儿童难治性肾病近期疗效观察及影响因素分析

目的：了解CTX－PT治疗儿童难治性肾病的近期疗效以及影响疗效的相关因素。方法：总结1991年9月－1999年12月接受CTX－PT治疗的难治性肾病86例，并就其疾病类型，临床观察指标等与疗效的关系进行了分析。结果：（1）本组CTX－PT完全缓解45例（52．33％），部分缓解18例（20．93％），总有效率73．26％，完全缓解病人86．66％在第三疗程，100％发生在第五疗程内。（2）影响疗效的因素主要有疾病的临床，病理类型，对激素治疗的反应以及Scr水平。单纯性肾病疗效明显好于肾炎性（总有效率分别为80．95％和52．17％，P＜0．05）；病理表现为MCNS及轻度MsPGN者疗效分别为88．89％和93．33％，明显好于其它病理类型；激素依赖及频繁复发病人CTX－PT有效率明显高于激素耐药者（P＜0．05），而频繁复发与激素依赖者疗效相仿；Scr水平在治疗前较高者提示可能疗效也差。CTX－PT疗效与性别，发病年龄，病程，治疗前血清Alb,Glb,Ch，免疫球蛋白，24小时尿蛋白排泄量等无关（P＞0．05）。（3）毒副作用：本组30例（34．88％）未见明显CTX毒副作用，56例（65．12％）出现不同程度的副作用，最常见的副作用是胃肠道反应占59．30％，其次为轻度脱发（10．47％），6．98％的病人表现为血小板下降或肝功能异常，血白细胞减少和反复感染各为4．65％，2例（2．33％）出现出血性膀胱炎。结论：CTX－PT治疗儿童难治性肾病总有效率为73．26％，影响疗效的因素主要有疾病的临床，病理类型，对激素治疗的反应以及Scr水平等。

紫癜性肾炎患儿血清中多肽的差异表达研究

目的通过构建紫癜性肾炎(HSPN)患儿病初血清中的多肽组学分析,探讨多肽在紫癜性肾炎发病中的作用及可能机制。方法收集临床紫癜性肾炎患儿病初血清及健康儿童血清各3例,分为正常组(NC组)和疾病组(HSPN组);应用液相色谱-串联质谱分析,构建2组间的多肽组学分析,初步筛选出差异表达倍数达2倍及以上且变化具有统计学意义(P<0.05)的多肽,并通过生物信息学进一步分析差异表达的多肽。结果从2组中共识别并鉴定了1729条非冗余多肽,差异表达倍数达2倍及以上且差异具有统计学意义的多肽有196条,其中72条高表达、124条低表达,它们主要来源于167种蛋白前体。生物信息学分析结果显示差异表达多肽对应的前体蛋白主要涉及细胞黏附、刺激反应、免疫系统过程、细胞过程等。结论HSPN患儿病初血清中的内源性多肽表达谱发生了显著变化,提示差异表达的多肽可能参与HSPN的发病过程,在疾病的发生发展中发挥作用。HSPN患儿血清中鉴定的多肽变化可能推进我们目前对相关疾病的认识,为临床诊治及预后判断提供新的思路。

原发性肾病综合征患儿肾组织中长链非编码RNA的差异表达研究

目的本研究通过检测长链非编码RNA(lncRNA)在微小病变型肾病综合征(MCNS)患儿肾组织中的改变,探讨lncRNA在MCNS中的作用。方法收集临床MCNS患儿肾组织标本及对照组儿童肾组织标本各3例,分为正常组(NC组)和疾病组(MCNS组)。应用芯片技术筛选出2组间差异表达的lncRNA,应用RT-PCR法验证差异表达的lncRNA,并通过生物信息学进一步分析差异表达的lncRNA。结果芯片结果显示:与NC组比较,MCNS组有1446条lncRNA高表达,1519条lncRNA低表达(差异倍数>3)。RT-PCR结果显示:与NC组比较,MCNS组ENST00000425497,ENST00000445520,ENST00000451596和uc001goh.1表达显著上调,ENST00000420452,ENST00000445172,ENST00000502435,ENST00000533039,ENST00000546134和NR_033946表达显著下调,与芯片数据一致。生物信息学分析结果显示:差异表达的lncRNA主要涉及钙离子信号通路、MAPK信号通路、核糖体信号通路、氧化磷酸化信号通路等过程。结论MCNS患儿肾组织中的lncRNA表达谱发生了显著变化,提示差异表达的lncRNA可能参与MCNS的发病过程。这一结果可能推进我们目前对相关疾病的认识,为临床诊治及预后判断提供新的思路。

N-乙酰半胱氨酸对AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞纤维化相关蛋白表达的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK2)纤维化相关蛋白表达的影响。方法将HK2细胞分为4组:对照组、AngⅡ组、NAC组、AngⅡ+NAC组,以NAC(5 mmol/L)、AngⅡ(1 mmol/L)处理细胞,48 h后收集细胞。Western blot法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、胶原蛋白1(collagen 1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。PCR法检测FN、collagen 1、α-SMA mRNA水平的变化。免疫荧光法观察α-SAM在HK2细胞中的表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组HK2细胞内纤维化相关蛋白FN、collagen 1、α-SMA的蛋白和mRNA表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与NAC组比较,AngⅡ+NAC组FN、collagen 1、α-SMA的蛋白和mRNA表达均减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。此外,对照组、NAC组细胞中未见α-SMA荧光信号,AngⅡ组α-SMA呈红色荧光,而AngⅡ+NAC组中α-SMA的红色荧光显著减弱。结论NAC能通过抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞纤维化相关蛋白的表达,从而在慢性肾脏病的防治中发挥重要作用。

tRF-011690对阿霉素诱导的足细胞自噬的影响

目的:探究tRNA衍生片段-011690(tRNA-derived fragment-011690,tRF-011690)在阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的足细胞自噬中的作用及机制。方法:用ADR(1μg/mL)和tRF-011690 mimic干预足细胞,分为Control组、ADR组、ADR+tRF-011690 mimic组和ADR+tRF-011690 NC组;RT-qPCR法检测各组tRF-011690、LC3和p62的mRNA表达水平;Western blot法测定各组LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达量。用ADR(1μg/mL)和雷帕霉素(Rapamycin)200 ng/mL干预足细胞,分为Control组、ADR组、ADR+Rapamycin组和Rapamycin组;RT-qPCR法检测各组tRF-011690表达水平,Western blot检测各组p-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白相对表达量。结果:同Control组相比,ADR组足细胞中tRF-011690表达水平下降,LC3和p62 mRNA表达水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量显著增加(P<0.05);同ADR+tRF-011690 NC组相比,ADR+tRF-011690 mimic组tRF-011690表达水平显著上升(P<0.05),LC3和p62 mRNA表达量显著降低,LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量显著降低(P<0.05)。同Control组相比,ADR组p-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量均增加(P<0.05);同ADR组相比,ADR+Rapamycin组p-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量均降低,tRF-011690表达显著上升(P<0.05)。结论:tRF-011690可能作为mTOR通路的下游效应分子抑制ADR诱导的足细胞自噬。

蟾蜍灵调控系膜细胞增殖与细胞周期激酶抑制剂p21的关系

目的:观察蟾蜍灵对大鼠系膜细胞(mesangial cell,MC)p21表达的影响,探讨其调控系膜细胞增殖的机制。方法:MTT法观察不同浓度蟾蜍灵(0.01、0.04、0.08、0.16μmol/L)对PDGF-BB(20 ng/ml)诱导的MC增殖的影响;流式细胞术测定MC细胞周期的变化;RT-PCR法测定p21基因表达的改变;Western blot法测定p21蛋白水平变化。结果:PDGF-BB刺激MC12 h后,加入不同浓度蟾蜍灵干预24 h,蟾蜍灵从0.04μmol/L至0.16μmol/L的呈浓度依赖抑制PDGF-BB诱导的MC增殖(P<0.05)。0.08μmol/L蟾蜍灵干预24 h后,可使PDGF-BB诱导的MC G0/G1期细胞比例升高,使S期细胞比例下降,且上调P21mRNA和蛋白水平的表达(P<0.05)。0.08μmol/L蟾蜍灵对正常系膜细胞无明显影响(P>0.0.5)。结论:蟾蜍灵可能通过上调细胞周期激酶抑制剂p21的表达来抑制PDGF-BB诱导的MC的增殖。

蟾蜍灵对小鼠足细胞阿霉素模型nephrin和p38表达的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对阿霉素损伤足细胞nephrin和p38表达的影响。方法:体外培养正常足细胞并进行分组:对照组、蟾蜍灵组、阿霉素诱导组和阿霉素诱导+蟾蜍灵组。制备阿霉素损伤足细胞模型,蟾蜍灵按一定梯度浓度范围干预足细胞,MTT法确定其作用于足细胞的安全、有效剂量。倒置显微镜观察足细胞形态,实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin和p38基因相对表达水平。结果:MTT法提示蟾蜍灵浓度10-8mol/L,足细胞成活率在90%以上。阿霉素诱导组、阿霉素诱导+蟾蜍灵组、蟾蜍灵组,倒置显微镜下观察足细胞形态与对照组相比无明显改变。实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin mRNA相对表达,蟾蜍灵组较对照组无明显变化,阿霉素诱导组nephrin mRNA表达与对照组相比显著下降(P<0.05),阿霉素+蟾蜍灵组nephrin mRNA表达仍下降,但与阿霉素组比较明显升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测p38 mRNA表达,各组较对照组表达均升高(P<0.05),阿霉素诱导组升高最显著,阿霉素诱导+蟾蜍灵组较阿霉素诱导组表达明显降低(P<0.05)。结论:蟾蜍灵可能通过调控足细胞nephrin的表达减缓阿霉素对足细胞的损害,此调节过程可能与足细胞p38的表达变化有关。

体外醛固酮对大鼠系膜细胞凋亡基因的影响

目的醛固酮是慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)中引起肾损伤的重要因素,但其具体机制尚不明确。文中通过体外研究醛固酮对大鼠系膜细胞凋亡及相关基因P53、Bcl-2、C-myc表达的影响,探讨醛固酮参与肾损伤的可能机制。方法体外培养大鼠系膜细胞,应用锥虫蓝拒染法检测不同浓度醛固酮(10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mol/L)对系膜细胞的毒性作用,实验分为对照组、醛固酮组(培养液+10-6mol/L醛固酮);倒置显微镜观察醛固酮对系膜细胞形态的影响;应用Annexin V/PI双染流式细胞术检测醛固酮对大鼠系膜细胞凋亡的作用;应用荧光定量PCR方法检测醛固酮对系膜细胞凋亡相关基因P53、Bcl-2、C-myc表达的影响。结果倒置显微镜下:醛固酮组刺激系膜细胞形态未见明显变化;流式细胞仪检测凋亡结果显示:醛固酮组细胞凋亡率[(68.62±1.77)%]较对照组[(32.87±4.98)%]明显升高(P<0.05);荧光定量PCR结果显示:与对照组相比,醛固酮组P53基因相对表达量明显上升(1.00±0.09 vs 2.82±0.35,P<0.05),C-myc基因相对表达量也明显上升(1.00±0.12 vs 1.85±0.35,P<0.05),而Bcl-2基因相对表达量则显著下降(1.00±0.24 vs 0.11±0.01,P<0.05)。结论醛固酮可能通过上调P53基因及C-myc基因的表达,并下调Bcl-2基因的表达诱导系膜细胞凋亡,提示系膜细胞凋亡增加可能是醛固酮引起的肾损伤的机制之一。

N-乙酰半胱氨酸对血管紧张素Ⅱ诱导的HK-2细胞炎症相关因子的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所诱导的HK-2细胞炎症相关因子的抑制作用。方法将HK-2细胞分为四组(对照组、AngⅡ组、NAC组、AngⅡ+NAC组),以NAC(5 mmol/L)、AngⅡ(1 mmol)处理细胞,于48 h后收集细胞,PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素6(IL-6) mRNA水平的变化;Western blot法检测TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素1β(IL-1β)蛋白的表达变化;免疫荧光法观察TNF-α的荧光表达分布情况。结果与对照组相比,AngⅡ组HK-2细胞内炎症因子蛋白(TNF-α、MCP-1和IL-1β)、mRNA(TNF-α、IL-6)表达上调,经NAC处理后,AngⅡ+NAC组以上变化均减小,免疫荧光检测也显示相同结果。结论 NAC能抑制AngⅡ诱导的HK-2细胞内炎症相关因子的表达。

长链非编码RNA uc.412介导转化生长因子-β1诱导的系膜细胞自噬的机制研究

目的探究长链非编码RNA uc.412(long non-coding RNA uc.412,LncRNA uc.412)在转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)诱导的系膜细胞自噬中的作用及相关机制。方法用TGF-β1(10μg/L)干预大鼠系膜细胞,Western blot法检测自噬标志物LC3、p62的蛋白表达,Real-time PCR法检测LncRNA uc.412的表达;采用LncRNA uc.412过表达慢病毒转染系膜细胞并用Real-time PCR法检测转染效率,分别采用Western blot法和Real-time PCR法检测LC3和p62在蛋白水平和mRNA水平表达变化;用TGF-β1(10μg/L)和Smad3特异性磷酸化抑制剂SIS3(1μmol)干预系膜细胞,Western blot法检测pSmad3的蛋白表达,Realtime PCR法检测LncRNA uc.412的表达。结果与对照组相比,TGF-β1组LC3Ⅱ/Ⅰ、p62表达上调(P<0.05),LncRNA uc.412表达增加(P<0.05);过表达LncRNA uc.412组LC3和p62在蛋白和mRNA水平高于对照组和病毒空载组(P<0.05);与对照组相比,TGF-β1组p Smad3蛋白和LncRNA uc.412表达上调(P<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+SIS3组p Smad3蛋白和LncRNA uc.412表达下降(P<0.05)。结论LncRNA uc.412可能作为TGF-β1/Smad3通路的下游效应分子促进系膜细胞自噬,并且为慢性肾脏病的诊治提供新的思路。

RREB1对TGF-β1诱导系膜细胞增殖的影响

目的:探讨ras反应元件结合蛋白1(ras responsive element binding protein 1,RREB1)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导大鼠系膜细胞增殖的影响。方法:用TGF-β1及RREB1-siRNA转染干预系膜细胞,CCK-8法检测系膜细胞增殖活力,RT-PCR法检测细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)及RREB1 mRNA水平,Western blot法检测PCNA、α-SMA及RREB1蛋白的表达,流式细胞术检测系膜细胞周期。结果:与对照组相比较,TGF-β1干预后CCK-8法检测系膜细胞增殖活力增加(P<0.01),PCNA、α-SMA及RREB1 mRNA和蛋白水平增加(P<0.01),细胞周期检测提示S期细胞百分率增多,G1期细胞百分率减少(P<0.01);与TGF-β1组相比较,RREB1-siRNA转染+TGF-β1干预后的系膜细胞增殖活力下降(P<0.01),PCNA、α-SMA及RREB1 m RNA和蛋白水平下降(P<0.01),细胞周期提示S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高(P<0.01)。结论:TGF-β1通过上调RREB1的表达诱导系膜细胞增殖。

pRP[Exp]-AATF重组质粒构建及其在系膜细胞中的表达

目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序,通过脂质转染法将细胞转染到大鼠系膜细胞中,以未转染的系膜细胞为空白对照组,转染后的为实验组,Western blot检测AATF所编码蛋白的表达水平。结果 PCR扩增产物AATF片段约1 600 bp,与理论相符;构建所得pRP[Exp]-AATF重组质粒,经双酶切琼脂糖凝胶电泳后得到约1 600 bp的条带,与预期结果相符;测序结果与Gen Bank中的大鼠AATF基因序列比对,同源性相符。经RT-qPCR证明,以未转染的系膜细胞中AATF表达水平为标准(1.00±0.00),转染后的实验组中AATF的相对表达量达(12.03±1.87),显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pRP[Exp]-AATF重组质粒,并能在肾小球系膜细胞中正常表达,为后续研究AATF基因的生物学功能、疾病治疗和临床应用奠定了实验基础。