重组人转化生长因子β_1诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

用不同剂量的rhTGF－β1与人肝癌细胞SMMC－7721共同繁育不同时间后，用荧光显微镜进行形态学观察；提取细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳分析电泳条带；用流式细胞仪分析细胞周期变化；用免疫组化法检测bcl－2、c－myc基因表达的变化。结果显示：细胞经rhTGF－β1作用后体积缩小、核染色质固缩或成碎片状；细胞DNA电泳呈典型的“阶梯状”条带；细胞周期分析显示rhTGF－β1先使SMMC－7721细胞停滞在G0／G1期，继而诱发细胞产生凋亡；免疫组化检测发现rhTGF－β1可下调bcl－2和c－myc蛋白的表达。研究表明：rhTGF－β1诱导人肝癌细胞凋亡与G0／G1期阻滞密切相关；bcl－2、c－myc基因产物的下调在rhTGF－β1诱导的细胞凋亡过程中可能起重要的调控作用。

4′-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P<0.01);4-MS作用72h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。40mg/L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P<0.01)。20、40mg/L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P<0.01)。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。

人精子抗原基因－2表达产物相关抗体对精子运动的影响

在构建成人睾丸ｃＤＮＡ文库的基础上，用兔抗人精子抗体自文库中筛选出了８株阳性克隆，并对其中的ＨＳＧ２表达产物进行理化特性测定和抗ＨＳＧ２表达产物抗体的生物学活性测定。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示溶原蛋白的分子量约为１５５ＫＤａ。抗ＨＳＧ２表达产物抗体能明显的抑制精子的运动能力，对精子凝聚、顶体蛋白酶和精子表面的ＣｏｎＡ受体无影响。提示ＨＳＧ２表达产物可能成为精子疫苗的候选成份。

HSG2表达精子抗原在抗精子抗体检测中的应用

ＨＳＧ２表达精子抗原在抗精子抗体检测中的应用周作民，沙家豪，胡志刚，王黎熔，林敏（南京医科大学组胚教研室，南京，２１００２９）抗精子抗体的研究对于免疫性不孕症的诊治和免应避孕疫苗的研究有着极其重要的意义。这一研究的首要前提是建立一个灵敏、准确的抗体检...

子宫平滑肌瘤细胞原代培养及鉴定

目的:建立人子宫平滑肌瘤细胞原代培养方法,为子宫肌瘤发病机制及治疗药物筛选的研究提供理想的细胞株系。方法:采用消化法及组织块贴壁2种方法进行子宫平滑肌瘤细胞培养。倒置显微镜下观察原代培养的细胞,并用免疫组化染色对其进行鉴定。结果:2种方法均可获得大量子宫肌瘤细胞,所培养的细胞在倒置显微镜下呈梭形和典型"峰-谷"样生长,α-Actin免疫组化染色呈强阳性。结论:采用该2种方法均可成功进行人子宫平滑肌瘤细胞的原代培养,且培养的人子宫平滑肌细胞生长良好,纯度高,可用于子宫肌瘤发病机制及治疗药物筛选的研究。

甲硝唑对精子运动影响的研究

甲硝唑对精子运动影响的研究葛百明，沙家豪，周作民，胡志刚，张适（南京医科大学组胚教研室，南京，２１００２９）杀精子剂作为外用的避孕药在临床上已应用多年，目前的杀精剂主要是非离子表面活性剂［１，２］和高分子聚羧酸［３］，但避孕效果不很理想（８４．７～９...

YRRM1基因检测在无精症病因分析中的应用

YRRM（YchromosomeRNArecognitionmotif）为无精子因子（AZF）的重要候选成分，已证明YRRM的丢失可导致无精子或严重少精。应用PCR方法检测核型正常（46XY）的65例无精症男子和25例严重少精男子基因组DNA中的YRRM，发现6例无精症病人中有YRRM的丢失，严重少精病人中1例有YRRM的丢失。结果表明，应用该方法检测YRRM基因片段是切实可行的，对无精症和严重少精的病因诊断具有一定的应用价值。

精子发生基因的研究

育龄夫妇中约有10%不能生育,其中一个重要的原因是男方生精障碍,表现为严重少精子(<200万/ml)或无精子,约占不育男子的10%.除输精管道梗阻、感染等病因外,遗传性状改变也是一重要因素.Tiepolo和Zuffardi等于1976年发现6例无精子症患者均有Y染色体长臂的缺失,包括远端的荧光区和与其相连的非荧光区,因此推测在Yq11上存在着“Y染色体精子生成基因”.由于许多男性无精症患者均有Yq11的异常,故将其称为“无精子因子”(azoospermia factor简称AZF)。

男性无精子或少精子患者YRRM基因检测

ＹＲＲＭ（ＹｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅＲＮＡｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｍｏｔｉｆ）为ＡＺＦ（无精子因子）的重要候选成分。应用ＰＣＲ方法检测了５０例正常男子、２３６例无精子症和８２例严重少精子症男子基因组ＤＮＡ中的ＹＲＲＭ１和ＹＲＲＭ２基因，发现中国男子无ＹＲＲＭ２基因，２１例无精子症和３例严重少精子症患者有ＹＲＲＭ１的丢失。结果表明，应用该方法检测ＹＲＲＭ１基因片段是切实可行的。

无精子症和严重少精子症DYS240基因位点的分析

无精子因子（AZF）的缺失将导致无精子症和严重少精子症。本研究应用PCR方法分析了65倒核型正常的无精子症和25例核型正常的严重少精子症病人的DYS240基因位点。结果显示，无精子症病人中6例缺失DYS240基因位点，严重少精子症病人中4例缺失DYS240基因位点。提示DYS240基因是AZF的一个重要的候选成分。

尿道粘膜印片检测沙眼衣原体

对１０９例前列腺炎病人尿道粘膜上皮印片进行检测，发现上皮细胞内沙眼衣原体包涵体２１例，革兰阴性双球菌１２例，衣原体包涵体和革兰阴性双球菌同时被检出者１５例，其余６１例二者均无。另外对３２例患前列腺炎、尿道炎及附睾炎的病人，分别作前列腺液涂片和尿道粘膜印片检查，结果发现，印片的阳性检出率明显高于前列腺液涂片的阳性率。提示临床医师应注意被检标本的采集。

半定量PCR比较正常小鼠和Tfm小鼠Leydig细胞17α－羟化酶mRNA的水平

本研究运用反转录合成ｃＤＮＡ和半定量ＰＣＲ的方法，测定了正常小鼠和Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｍＲＮＡ／β－肌动蛋白ｍＲＮＡ的比值，以比较二者睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｍＲＮＡ的水平。结果显示：１．正常小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞的１７α－羟化酶和β－肌动蛋白ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期均在２８个循环时完成，Ｔｆｍ小鼠的β－肌动蛋白ｃＤ－ＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期在２８个循环完成，而１７α－羟化酶ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期直至３２个循环仍没完成；２．在指数期时，正常小鼠Ｌｅｇｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｃＤＮＡ／β－肌动蛋白ｃＤＮＡ为４．２８±０．８８，Ｔｆｍ小鼠为０．０７９±０．０４；正常小鼠１７α－羟化酶ｍＲＮＡ的水平高于Ｔｆｍ小鼠５４．１８倍。结果进一步证实Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞１７α－羟化酶ｍＲＮＡ水平低下是导致该酶活性降低的根本原因。

反转录－多聚酶链反应扩增小鼠睾丸17α－羟化酶mRNA

１７α－羟化酶催化雄激素合成的中间步骤，它对了解睾丸间质细胞内雄激素的合成具有重要的意义。本研究首先提取小鼠睾丸组织ＲＮＡ，然后以１７α－轻化酶ＤＮＡ两端的特定序列为引物，反转录合成ｃＤＮＡ，再以ｃＤＮＡ为模板行ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ。结果显示，反转录ＰＣＲ后获得一条３６０ｂｐ的电泳带，为１７α－羟化酶ｃＤＮＡ。结果表明，用反转录ＰＣＲ方法扩增睾丸１７α－羟化酶ｍＲＮＡ是切实可行的。

TGF-β对分离纯化的滋养细胞生长和功能的影响

目的 研究TGF β(transforminggrowthfactorbeta)对体外分离纯化培养的滋养细胞增殖及功能的影响。方法 将Percoll梯度离心法分离纯化的滋养细胞接种于培养板 ,2 4h贴壁后换液。加药组分别加含 2 5、5 0、10 0 μg/LTGF β的 199培养液 ,对照组培养液中无TGF β ,继续培养2 4h ,在光镜下观察各组细胞生长情况 ,用MTT法测定加药和对照组OD值 ;用酶联法测定培养液中人绒毛膜促性腺激素 (hCG)的浓度 ,并取培养板中的盖片进行hCG免疫组化染色及图像分析。结果 加药组细胞生长密度及MTT法测得的OD值小于对照组 ;培养液中hCG浓度及盖片免疫组化的OD值均明显小于对照组。结论 TGF β可抑制体外培养的滋养细胞生长及分泌hCG的功能。

无精子症配偶宫颈粘液内的抗精子抗体分析

目的：研究无精子症男子配偶宫颈粘液内的抗精子抗体。方法：应用ELISA方法检测宫颈粘液中的抗精子抗体。结果：400例有精子男子配偶中92例为抗精子抗体阳性（23％），200例无精子症男子配偶中42例为抗精子抗体阳性（21％），两组比较差异不显著。结论：无精子症病人配偶中抗精子抗体的产生可能是精浆中的精子吸附抗原的结果。

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响王燕蓉卢小东徐晶芬（宁夏医学院组胚教研室）（南京医科大学组胚教研室）枸杞多糖（ＬＢＰ）具有抗衰老，增强机体ＳＯＤ活性，防止细胞膜损伤，增强免疫功能的作用。我们利用体外培养方法观察了ＬＢＰ对人早期绒毛细胞生长及...