NYD-SP15基因的原核表达及多克隆抗体的制备

目的:克隆NYD-SP15基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体。方法:PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框,克隆入原核表达载体PET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳。将此融合蛋白Ni柱纯化后免疫BALB/C小鼠,Western blotting鉴定。结果:成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒,并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株,表达的His标签融合蛋白,分子量为58kDa左右,经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体。经Western blotting法分析,抗体为NYD-SP15特异性抗体。结论:构建的NYD-SP15基因的原核表达载体,体外高效表达蛋白,免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体,将为眼部增殖性视网膜病变(PVR)的研究及治疗奠定坚实的基础。