临床药学专业实习教学体系的构建与实践

临床药学专业实习教学是高等医药学教育的重要组成部分，是实用型高级医药人才培养过程中极为重要的环节。专业实习中应兼顾医、药、医药结合专业特色，使学生具备临床药学工作所需的双重技能。随着近年来临床药学专业教育和医院药学工作的迅速普及和人们对这一新专业认识的不断提高，在培养阶段加强临床医、药学实践及基本训练和综合技能训练成为本专业不可或缺的重要教学环节。

C57BL/6小鼠关节软骨细胞的提取及凋亡模型的建立

目的体外培养C57BL/6小鼠关节软骨细胞,建立符合骨关节炎实验需求的凋亡模型。方法采用两步酶消化配合机械吹打法分离C57BL/6小鼠关节软骨细胞,倒置相差显微镜分别观察5代软骨细胞的形态及生长情况,甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,CCK-8法分别检测5代软骨细胞的活力情况,实时荧光定量(RT-PCR)法分别检测5代软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA的变化。在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20μmol/L)的星形孢菌素及200μmol/L H_(2)O_(2)作用24 h,通过检测细胞凋亡率,选择合适的浓度,并利用AOEB法进一步验证10μmol/L星形孢菌素的促凋亡作用。结果体外培养的C57BL/6小鼠关节软骨细胞,第1代类圆形,第2代三角形,第3代三角形及短梭形,3代后软骨细胞主要呈长梭形且形态不规则,胞核增大,胞质边缘模糊化。经甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色证实为软骨细胞。与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的细胞活力显著降低(均P<0.05)。与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的Ⅱ型胶原mRNA相对表达量显著降低(均P<0.001)。与H_(2)O_(2)阳性对照相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞24 h凋亡率为(63.97±1.67)%,差异无统计学意义。AOEB结果显示,与正常细胞相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞后,凋亡早期细胞核质体呈绿色,细胞形状不规则;凋亡晚期细胞,核质体呈橙色,细胞核碎裂成点状,大小不一。结论本研究成功培养了C57BL/6小鼠关节软骨细胞,10μmol/L星形孢菌素作用3代内软骨细胞24 h建立凋亡模型最适宜。