高通量测序分析结肠腺瘤患者肠道黏膜菌群的构成变化

目的探讨结直肠癌发展早期肠道菌群的变化规律。方法通过结肠镜活检收集31例结肠腺瘤患者的腺瘤组织以及20例健康志愿者的肠道黏膜,提取基因组DNA,对细菌16SrRNA基因序列V_3~V_4高变区进行PCR扩增,lluminaMiSeq平台上高通量测序分析。结果结肠腺瘤患者的肠道黏膜菌群多样性比健康对照人群显著增高(P<0.01),腺瘤组黏膜菌群结构和健康对照者相比差异显著。门水平上:结肠腺瘤组变形菌门明显增多(P<0.01),厚壁菌门/拟杆菌门比值下降。属水平上:结肠腺瘤组乳球菌属、链球菌属和假单胞菌属增多(P<0.01),而肠球菌属,杆菌属丰度明显下降(P<0.01)。不同病理类型腺瘤比较发现:结肠高级别和低级别上皮内瘤变组肠道黏膜菌群整体结构相似,埃希菌-志贺菌属在高级别上皮内瘤变组呈现上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论结肠腺瘤患者肠道菌群多样性和构成与正常健康人存在明显差异,腺瘤患者黏膜菌群结构发生明显失衡,形成了易于肿瘤生长的肠道微生态环境。

MiR-183调控PDCD4表达对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用

目的观察miR-183在体外通过靶向调控程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用。方法将不同浓度的miR-183模拟物(miR-183mimics)和拮抗剂(miR-183inhibitors)通过细胞转染技术转入SW1990胰腺癌细胞株中,筛选出合适浓度,进一步应用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测PDCD4基因和蛋白表达水平;MTT法检测miR-183inhibitors对SW1990细胞生长的影响,流式细胞术和Hoechst染色检测SW1990细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达。结果细胞转染50nmol/L miR-183mimic和150nmol/L inhibitor后,miR-183基因的表达量与对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。qPCR和Western blot发现miR-183 mimics能下调PDCD4的表达,而miR-183inhibitors能上调PDCD4的表达,下调bcl-2(P<0.05)。MTT法显示miR-183inhibitors能抑制细胞增殖,流式细胞术和Hoechst染色显示miR-183inhibitors能促进胰腺癌细胞的凋亡及阻滞细胞周期于G0/G1期。结论 miR-183拮抗剂体外能抑制胰腺癌细胞增殖,促进凋亡和阻滞细胞周期,且可能通过靶向调节PDCD4基因发挥其调节作用。