对氧磷酶-1基因多态性与南京地区脑梗死发病风险的关联研究

目的探讨对氧磷酶-1（paraoxonase 1,PON1）基因多态性位点rs705381、rs854572、rs3735590、rs854571和rs662与南京地区人群脑梗死发病的相关性。方法 Massarray SNP分型技术检测并分析292例脑梗死患者和292例健康人群中上述5个多态性位点的基因型和频率分布;AU5400生化分析仪检测上述人群的常规生化指标;二元非条件Logistic回归模型分析上述位点不同基因型与脑梗死发病风险的相关性。结果血压、空腹血糖（FBG）、三酰甘油（TG）、糖化血红蛋白（Hb A1C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、C反应蛋白（CRP）、同型半胱氨酸（Hcy）的表达异常与脑梗死相关（P均0.05）,而脑梗死患者PON1基因rs662位点的CT（52.4%vs 41.44%,P〈0.05,校准OR=1.62,95%CI=1.06~2.49）和CT/TT（65.41%vs 56.16%,P〈0.05,校准OR=1.49,95%CI=1.00-2.25）基因型频率分布明显高于健康人群,但与上述临床指标无明显的相关性。结论 PON1基因rs662位点的多态性可能是南京地区脑梗死发病的遗传易感因素。

化疗药物对高表达SNCG的乳腺癌细胞株T47D的抑制作用的实验研究

目的:探讨各种化疗药物对高表达γ突触核蛋白(SNCG)的乳腺癌T47D细胞株的抑制作用。方法:常规培养不表达及高表达SNCG的乳腺癌MCF-7及T47D细胞株,采用MTT法观察顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)、依立替康(CPT-11)对细胞的抑制作用,并用流式细胞术分析药物作用后的细胞周期变化及细胞凋亡。结果:作用60 h后,ADM、VCR、TAX及CPT-11对T47D细胞的抑制作用显著低于MCF-7细胞(P<0.01),而DDP、5-FU对T47D细胞的抑制作用与MCF-7细胞相比差异无显著性(P>0.05),且显著高于其他4种抗肿瘤药物(P<0.01)。药物作用T47D细胞60 h后,DDP、5-FU组的细胞增殖指数(PI)及Caspase-3表达均较对照组及其他4组差异有极显著性(P<0.01)。结论:DDP及5-FU对高表达SNCG的T47D细胞的抑制作用显著高于ADM、VCR、TAX及CPT-11,此可为临床对乳腺癌患者个体化治疗方案的选择提供体外实验依据。

tsRNA作为肿瘤诊断和预后标志物的研究进展

转运RNA(transfer RNA,tRNA)可结合相应的氨基酸,并将其运送到核糖体上,促进蛋白质的翻译。tRNA衍生的小RNA(transfer RNA-derived small RNA,tsRNA)是tRNA被切割而产生的。tsRNA具有重要的生物学功能,可发挥调节基因表达和调控蛋白质翻译等作用。近年来,研究揭示了tsRNA在癌症中的双重调控作用,特别是其在癌症患者体液中的显著差异性,强调了tsRNA作为一种潜在的肿瘤诊断和预后评估生物标志物的重要性。结直肠癌相关tsRNA中,5′tiRNA-His-GTG上调可促进肿瘤的发生和发展;由血管生成素切割产生的5′-tiRNA-Val上调,促进肿瘤转移和生长;tRF-20-MEJB5Y13上调,可促进结直肠癌细胞迁移和侵袭。胃癌相关tsRNA中,tRF-19-3L7L73JD上调可促进恶性肿瘤的进展,而tRF-24-V29K9UV3IU、tRF-5026a和tRF-Val上调可抑制肿瘤的增殖及进展。临床应用方面,血浆5-tRF-GlyGCC表达升高,诊断结直肠癌的曲线下面积达0.882,血浆tRF-5026a下降,诊断结直肠癌曲线下面积为0.883。胃癌患者血清tRF-27-FDXXE6XRK45、tRF-29-R9J8909NF5JP和tRF-23-Q99P9P9NDD的表达显著升高,诊断胃癌曲线下面积分别为0.805、0.889和0.783;三阴性乳腺癌血清中tDR-000620下降,与淋巴结转移和疾病复发相关。胃癌患者的血浆外泌体中,tRF-38、tRF-25和tRF-18表达升高,这些指标可用于诊断胃癌,且可能是术后预测因子;肝癌患者血浆外泌体的tRNA-ValTAC-3、tRNA-GlyTCC-5、tRNA-ValAAC-5和tRNA-GluCTC-5的表达水平明显增加,可能是新兴的标志物。本文综述了tsRNA的生成、分类及生物学功能,重点阐述tsRNA作为肿瘤标志物的研究进展以及其在不同肿瘤中发挥的作用。

miR-1229-3p抑制结直肠癌疾病进展及作为潜在生物标志物的研究

目的:探讨微小RNA(microRNA, miRNA)在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)疾病进展中的作用及临床应用价值。方法:基于TCGA数据库,筛选分析人类结肠癌及癌旁组织的转录组差异表达miRNA,以miRNA-1229-3p作为研究对象,在GEO数据库与Starbase数据库中验证其表达水平。采用生物信息学方法对miR-1229-3p的生物功能特征进行分析,构建miR-1229-3p过表达细胞系及miR-1229-3p敲降细胞系,通过CCK-8实验、克隆形成实验、EdU实验、Transwell实验、流式细胞术实验在体外探究miR-1229-3p对CRC细胞增殖、转移、凋亡的影响,并通过裸鼠移植瘤试验探究miR-1229-3p对CRC细胞体内增殖的影响。通过DIANA、TargetScan、miRDB数据库筛选miR-1229-3p的靶基因,并通过KEGG富集分析、GO分析靶基因的生物学功能。检测60例CRC患者及60例健康体检者血浆外泌体中的miR-1229-3p含量,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)分析其对CRC患者的诊断效能。结果:数据分析显示,miR-1229-3p在CRC细胞和组织中表达下调。生物信息学方法预测结果显示,miR-1229-3p与肿瘤的进展途径(如上皮间质转化、血管形成等)呈显著负相关(R<0,P<0.05)。体内、外研究表明,过表达miR-1229-3p后,CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制,且其潜在靶基因SETD7在细胞中的表达下调;而敲低miR-1229-3p后可抑制CRC细胞的凋亡。CRC患者血浆外泌体中的miR-1229-3p含量较健康体检者降低,ROC曲线分析显示,miR-1229-3p诊断CRC的约登指数最大值为0.586 8,曲线下面积为0.863 2(P<0.01)。结论:miR-1229-3p在CRC中表达下调,SETD7是其潜在的靶基因,miR-1229-3p可抑制CRC细胞增殖、迁移与侵袭,促进CRC细胞凋亡,有望作为诊断CRC的潜在生物标志物。

长链非编码RNA 91H对食管鳞癌组织中IGF2表达的调控作用及机制研究

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)91H对食管鳞癌(ESCC)组织中胰岛素样生长因子2(IGF2)异常表达的调控机制,评价其在ESCC发生、发展中的作用。方法收集232例ESCC患者癌组织和癌旁组织标本以及食管鳞癌细胞系TE-1和Eca-109,用实时荧光定量PCR及免疫荧光法检测其91H和IGF2的表达水平,亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测印记基因H19调控区域(ICR)的甲基化程度。结果肿瘤患者浸润程度越深、肿瘤等级和TNM分期越高,91H的表达量越低而IGF2表达量越高(P<0.05),用91H RNA干扰后,TE-1细胞IGF2 mRNA的表达水平为4.91±1.68,明显高于阴性对照组1.38±0.61(P<0.05);Eca-109细胞IGF2 mRNA的表达水平为3.62±1.44,明显高于阴性对照组1.75±1.00(P<0.05);经5-aza-CdR去甲基化处理后,细胞甲基化程度越低,91H表达水平越高(P<0.05)。结论 lncRNA 91H的表达与H19 ICR区甲基化程度密切相关,其对IGF2表达起抑制作用,提示lncRNA 91H可作为一个新的遗传学标志物。

Fas/FasL基因多态性与乳腺癌发生的相关性

目的：探讨Fas/FasL基因多态性与汉族人群乳腺癌发病风险的关联性。 方法：提取250例乳腺癌患者和250例体检健康者外周血基因组DNA，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术对Fas基因1377G〉A,670A〉G和FasL基因844T〉C位点多态性进行基因分型，用非条件Logistic回归方法计算风险比（OR）及95%可信区间（95%CI）。 结果：与Fas 1377多态性位点GG基因型相比，GA、AA基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）分别为0.44（0.29~0.68），0.29（0.17~0.48），P均〈0.01］。与Fas 670多态性位点AA基因型相比，AG、GG基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）分别为0.63（0.42~0.94）和0.36（0.21~0.60），P均〈0.01］。与FasL 844多态性位点CC基因型相比，TC基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）为0.58（0.40~0.84），P=0.012）。 结论：Fas-FasL基因多态性与乳腺癌发病风险相关。

胃癌生长抑素受体mRNA表达的研究

目的:研究胃癌组织中生长抑素受体(SSTR)各亚型的分布与表达特性。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测24例胃癌肿瘤组织与癌旁正常组织中5种SSTR亚型mRNA的表达。结果:胃癌肿瘤组织及癌旁组织中SSTR1、2、5mRNA阳性表达率均为100%(24/24);SSTR3、4mRNA在肿瘤组织的阳性表达率分别为79%(19/24)和71%(17/24),在癌旁组织的阳性表达率分别为83%(20/24)和75%(18/24)。RT-PCR产物凝胶定量分析结果表明胃癌肿瘤组织各型生长抑素受体mRNA的表达量均较癌旁组织为低,但差异无统计学意义,P>0·05。胃癌肿瘤组织中以SSTR2mRNA表达量最高,其次为SSTR5、SSTR1、SSTR3mRNA,SSTR4mRNA表达量最低。结论:胃癌肿瘤组织中存在5种生长抑素受体亚型的表达,并以SSTR2的表达最为显著。

长链非编码RNA多态性与肿瘤相关性的研究

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,LncRNAs)是一类转录本长度超过200个核苷酸残基(nt)的RNA分子,位于细胞核或细胞质内,大多由RNA聚合酶Ⅱ转录,但不能编码蛋白质。越来越多的证据表明LncRNA基因也发生遗传变异,导致LncRNA基因存在着广泛的基因多态性,而大多数LncRNA基因多态性与肿瘤的发生、转移和预后相关。文中结合国内外最新报道,对LncRNAs多态性与前列腺癌、肝癌、膀胱癌、急性淋巴细胞性白血病及甲状腺肿瘤的相关性研究进展作一综述,旨在为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。

盐酸小檗硷对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响

目的:探讨盐酸小檗硷(BBR)在体外对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响。方法:采用不同浓度的BBR与人肝Bel-7402细胞株共同培养不同的时间后,通过RT-PCR、流式细胞术及Western-Blotting技术分别检测LDLRmRNA、LDLR及过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果:经BBR处理过的肝细胞的LDLRmRNA表达明显增加,且其表达强度与所加入的BBR浓度及及作用时间呈正相关;最小有效剂量是0.25μg/ml,最短起效时间是2h,24h仍保持较高的表达水平。而PPAR-γ的mRNA表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:BBR能通过增加LDLR的表达而有效调节细胞对脂蛋白的摄取和代谢,从而维持细胞外LDL-C水平的稳定。

胃癌患者不同组织CD44v5+细胞表达率的比较

目的 探讨胃癌患者不同组织CD4 4v5的表达规律。方法 采用流式细胞术对于 39例胃癌患者的癌灶、癌旁组织、淋巴结转移灶和外周血细胞的CD4 4v5表达率进行了检测和对比分析。结果 胃癌患者不同组织的CD4 4v5 +细胞检出率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。胃癌患者各种组织CD4 4v5 +细胞表达率大小顺序为癌灶 >癌旁组织 >淋巴结转移灶 >外周血细胞 ,前三者和外周血细胞之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,而前三者之间却无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在胃癌患者的各种组织中 ,伴肿瘤转移患者的CD4 4v5 +细胞检出率均显著高于未转移者 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 胃癌患者身体各种组织的CD4 4v5 +细胞表达率显著升高 ,且CD4 4v5 +细胞表达率与肿瘤转移密切相关。

淋巴化疗对胃癌淋巴转移灶的临床治疗研究

目的:研究淋巴化疗对胃癌淋巴转移灶的直接治疗作用。方法:实验组(淋巴化疗组):术前经内镜胃粘膜下注射,加手术时胃浆膜下及腹膜内注射化疗药与活性碳的混悬液;对照组(血液化疗组):术前经股动脉插管灌注化疗药的水溶液,用流式细胞术检测化疗前后的胃癌组织及化疗后的转移淋巴结。结果:淋巴化疗后,检测术后阳性淋巴结,其SPF(S期细胞比例)、APO(细胞凋亡)发生率及bcl-2表达与动脉灌注化疗组之间的差异有高度显著性(P<0.01)。结论:经血液途径给药的化疗对淋巴系统转移灶作用甚微,而淋巴化疗能促进淋巴系统肿瘤细胞凋亡的发生,对淋巴转移灶具有直接的治疗作用。

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景:研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白occludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的:探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法:建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型,MTT法检测阿司匹林(5～20 mmol/L)和MEK抑制剂U0126(10～40μmol/L)对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林(8.78 mmol/L)组、U0126(14.91μmol/L)组、联合组(U0126+阿司匹林)和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测p-ERK1/2、occludin蛋白表达。结果:阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES-1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显,细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组p-ERK1/2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论:阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长,下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。

脂联素及其受体基因多态性与乳腺癌相关性的研究进展

脂联素是体内唯一一种来源于脂肪组织的保护性脂肪因子,与乳腺癌的发生、发展密切相关。近年来关于脂联素与乳腺癌发病危险性的研究取得了较大进展,本文就脂联素及其受体基因多态性与乳腺癌的相关性研究进展做一综述。

内皮抑素治疗肿瘤的研究进展

内皮抑素(endostain,ES)是一种内源性肽段,可抑制内皮细胞生长进而抑制新血管的生成,具有广谱抗肿瘤活性。尽管ES具有较低的毒性、免疫原性和耐受性等优点,但其对于肿瘤治疗的临床试验效果具有争议。文中对ES的来源、结构、作用机制以及现有的治疗策略作一综述。

恶性肿瘤细胞DNA倍体分类方法的改进及其临床应用

采用流式细胞术建立一种改良的细胞DNA倍体分类方法,对100例恶性肿瘤患者瘤组织进行了DNA倍体分类,并对其倍体类型和瘤组织细胞生物学特性、患者临床生物学行为之间的关系进行了分析。结果表明瘤组织细胞的DNA倍体类型分为:二倍体、近二倍体、四倍体、非整倍体和多异倍体细胞,后4种倍体类型统称为DNA异倍体。患者瘤组织细胞DNA倍体分类不同,其细胞生物学特性明显不同,患者临床生物学行为也明显不同。改良后的DNA倍体分类方法,不仅能客观地反映肿瘤细胞的生物学特性,而且还能准确地反映患者肿瘤的恶性程度和不同的临床生物学行为特征,可在临床推广应用。

白细胞介素10基因启动子区多态性与胃癌易感性的关系研究

目的:分析胃癌(gastric cancer,GC)患者白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)的启动子区域转录起始位点上游第1082位点、819位点及592位点多态性,探讨其与GC易感性之间的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测GC组患者129例和正常对照组98例健康人的IL-10的基因多态性,免疫印迹法检测GC组与对照组的幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染情况,SPSS11.0软件包统计分析各位点的基因型分布和等位基因频率。结果:IL-10-1082位点的多态性在GC组(AA:57.36%、GA:40.31%、GG:2.32%)与对照组(AA:75.51%、GA:24.49%)的基因频率有显著性差异(P=0.01)。GA基因型在GC组中的频率显著高于对照组(P=0.012),G等位基因在GC组中的频率显著高于对照组(P=0.007)。IL-10-819及IL-10-592的各基因型及其等位基因在GC组及对照组中分布均无显著性差异(P>0.05)。在H.pylori感染组中IL-10-1082GA基因型在GC组中的分布显著高于其在对照组中的分布(OR=2.65,95%CI1.16,6.08;P=0.031)。结论:IL-10-1082GA基因型携带者GC的发病风险增高,IL-10-1082位点的G等位基因发病风险增高,且IL-10-1082GA基因型与H.pylori感染对于GC的发生有协同作用。

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖作用的影响

目的:探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响.方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,将含不同浓度氯吡格雷(0.01、0.1、0.5和1mmol/L)的培养液与GES-1细胞共同培养24、48及72h,采用MTT比色法计算细胞生长抑制率.以药物不同浓度对GES-1细胞生长抑制率作图,得到剂量反应曲线.依据Bliss法,利用SPSS15.0软件求出氯吡格雷的半数抑制浓度IC50和安全浓度IC90(存活率≥90%的药物浓度).倒置相差显微镜观察各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后细胞形态学变化,用流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后对细胞凋亡的影响.结果:氯吡格雷对GES-1细胞的损伤呈浓度依赖性(F=11.546,P=0.002),无时间依赖性(F=13.455,P=0.003).氯吡格雷作用24h、48h和72h的IC50分别为0.36、0.51和0.35mmol/L,IC90分别为0.08、0.16和0.08mmol/L.光镜下可见药物作用后贴壁细胞数量减少,细胞变圆,悬浮,部分细胞核浓缩,细胞损害随药物浓度增加而增大.流式细胞术显示:空白对照组及0.01、0.1、0.5、1mmol/L氯吡格雷组凋亡率为4.7%、5.3%、14.7%、51.0%、60.5%.随着氯吡格雷药物浓度增加,GES-1细胞的凋亡率亦随之增加.结论:氯吡格雷可抑制人胃黏膜上皮细胞的增殖,具有剂量依赖性,诱导细胞发生凋亡.

肺癌组织p53V、p16基因表达与DNA倍体的相关性及其临床意义

目的:探讨肺癌组织细胞肿瘤相关基因p53V、p16基因的表达与DNA倍体类型的相关性及其临床意义。方法:采用流式细胞术对63例非小细胞肺癌患者瘤组织p53V+、p16+细胞表达率和DNA含量进行了检测,并分析了p53V、p16基因表达与肿瘤细胞DNA倍体类型、S期细胞比例(SPF)、凋亡指数(AI)及肿瘤是否转移的关系。结果:肺癌组织细胞的p53V+细胞检出率、DNA指数(DI)及SPF均显著高于正常对照组(P<0.01),肿瘤转移者也显著高于未转移者(P<0.01),而AI分别显著低于正常对照组及未转移者(P<0.01);随着DNA倍体从D→ND→T→AN→M,p53V+细胞检出率逐渐增高。肺癌患者瘤组织p16+细胞检出率的变化规律与p53V的变化恰好相反。二者相关性分析显示,p53V+细胞与p16+细胞表达率呈显著负相关(r=-0.712,P<0.05)。结论:肺癌患者瘤组织细胞p53V和p16基因编码蛋白的表达水平与肿瘤细胞生物学特性关系密切,不仅可用于肺癌发生的分子机制研究,而且还可以为肺癌恶性度、转移、预后判断提供可靠的客观依据。

IGF2基因组印记作用与肿瘤发生关系的研究进展

胰岛素样生长因子2(IGF2)存在基因组印记的现象,IGF2基因也是第一个被发现的内源性印记基因。IGF2能促进细胞的增殖、分化以及个体的生长发育并抑制细胞凋亡。IGF2基因组印记与多种肿瘤的发生、发展相关。本文对IGF2基因组印记与多种肿瘤的相关性以及相关的信号通路作一综述。