肝癌中骨桥蛋白和血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的探讨骨桥蛋白(OPN)和血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达以及与转移、复发的关系。方法采用免疫组化法检测64例肝癌组织、10例肝硬化组织及10例正常组织中OPN、VEGF的表达,分析两者与临床病理特征的关系。结果OPN和VEGF在肝癌组织的含量显著高于肝硬化及正常组织(P<0·05),OPN、VEGF的高表达与肝癌的早期复发转移显著相关(P<0·01),且OPN和VEGF在肝癌组织的表达呈正相关(r=0·73,P<0·01)。结论OPN和VEGF在肝癌组织中显著高表达,且和早期复发转移相关,OPN可能参与了肿瘤血管生成的过程。

SYBR Green实时定量PCR检测胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表达及其临床意义

目的:研究胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGF mRNA的表达情况及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应技术对22例胰腺癌细胞及其相对应的癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA进行定量检测,并分析其与临床病理特点之间的关系。结果:统计结果显示HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中的表达高于癌旁组织(P<0.01),相关性分析显示肿瘤组织中HIF-lα表达与VEGF、bFGF表达之间显著正相关性(P<0.01)。HIF-1α表达与肿瘤大小和淋巴结转移显著相关(P<0.01),与TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄无相关性,VEGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关(P<0.05),bFGF高表达与肿瘤大小、淋巴转移淋巴转移相关(P<0.05),而与TNM分期、性别及年龄无相关性。结论:HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中存在高表达,HIF-1α表达与TNM分期、肿瘤大小和淋巴转移相关,VEGF和bFGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关。实时荧光定量PCR检测HIF-1α、VEGF和bFGF对评估胰腺癌病人预后可能有一定的价值,也为胰腺癌的治疗提供了治疗靶点。

核因子κB活化在脓毒血症急性肝损伤发病中的作用机制

目的探讨核因子κB(NF-κB)活化在脓毒血症所致大鼠急性肝损伤发病中的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒血症急性肝损伤模型,将大鼠随机分为3组:CLP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)+CLP组、假手术组,观察术后24h肝组织的病理损伤及肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(STB)、非结合胆红素(UCB)的变化,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中NF-κBp65的表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化。结果CLP可致大鼠肝急性病理损伤,模型组ALT、AST、STB、UCB显著高于假手术组,NF-κBp65的表达及TNF-a含量明显高于假手术组,PDTC干预组肝组织NF-κBp65的表达及TNF-a含量明显下降,ALT、AST、STB、UCB相应降低。结论CLP所致脓毒血症能显著增强肝组织NF-κB的表达进而启动TNF-a等炎症因子表达增加而参与大鼠急性肝损伤发生;用PDTC抑制NF-κB活性能够降低肝组织中TNF-a表达,且能改善脓毒血症所致大鼠急性肝损伤。

改良胰管空肠黏膜吻合术预防胰十二指肠术后胰瘘的效果

目的:研究改良胰管空肠黏膜吻合术预防胰十二指肠术后胰瘘的效果。方法:回顾性分析57例行胰十二指肠切除术后消化道重建患者的临床资料,比较不同胰肠吻合术对术后胰瘘发生率的影响。结果:40例行胰肠套入吻合术,出现并发症17例(42.5%),其中胰瘘8例(20.0%)。17例行改良胰管空肠黏膜吻合术,出现并发症2例(11.8%),未发生胰瘘。两种术式间并发症发生率和胰瘘发生率差异均有显著性(均P<0.05)。结论:改良胰管空肠黏膜吻合术在预防胰瘘及减少并发症方面优于胰肠套入吻合术。

急性胰腺炎大鼠二十碳烯酸代谢的变化及PGE1对其的影响

目的了解大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)不同时相血清PGE2、PGF1α、TXB2等变化规律,以及这些变化与胰腺病理积分之间的相关性。研究外源性PGE1对上述代谢物变化的影响。方法实验用SD大鼠90只,随机分为对照组、ANP及PGE1治疗组。以3.5%牛磺胆酸钠经胰管内注射诱导大鼠实验性ANP,PGE1治疗组则于造模前及造模后1h腹腔内注射PGE13.0μg/kg体重。各组于造模后第3h、6h、12h处死部分大鼠,取其血清及胰腺组织,分别检测血清淀粉酶、PGE2、PGF1α、TXB2浓度及胰腺病理评分,行相关性分析。结果与对照组相比,ANP组术后3h、6h、12h的淀粉酶、TXB2的血清浓度显著升高(P<0.01),PGE2则显著下降(P<0.05),PGF1α有所下降,但无统计学意义。PGE1治疗组,各时相淀粉酶、TXB2的血清浓度显著回落,与ANP组相应时相比较,有统计学意义(P<0.01),PGE2、PGF1α有所上升,但不显著。PGE1治疗组的胰腺出血、坏死积分显著低于ANP组,而水肿、白细胞浸润的积分无显著差别,相关性分析显示胰腺出血、坏死的积分与淀粉酶、TXB2等的血清浓度呈正相关。结论二十碳烯酸的异常代谢参与了ANP的发生、发展,外源性PGE1通过干预这种异常代谢,影响胰腺炎的发展。

SYBR Green实时定量PCR检测胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表达及其临床意义

目的:研究胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA的表达情况及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应技术对22例胰腺癌细胞及其对应的癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA进行定量检测,并分析其与临床病理特点之间的关系。结果:统计结果显示HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中的表达高于癌旁组织(P<0.01),相关性分析显示肿瘤组织中HIF-lα表达与VEGF、bFGF表达呈显著正相关(P<0.01)。HIF-1α表达与肿瘤大小和淋巴结转移显著相关(P<0.01),与TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄无相关性,VEGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关(P<0.05),bFGF高表达与肿瘤大小、淋巴转移淋巴转移相关(P<0.05),而与TNM分期、性别及年龄无相关性。结论:HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中存在高表达,HIF-1α表达与TNM分期、肿瘤大小和淋巴转移相关,VEGF和bFGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关。实时荧光定量PCR检测HIF-1α、VEGF和bFGF对评估胰腺癌患者预后可能有一定的价值,也为胰腺癌的治疗提供了治疗靶点。

慢性应激与肿瘤关系的研究进展

慢性应激是个体面对特殊环境变化而不能调整和稳定内环境稳态时所经历的持续的情感及心理反应。近年来的研究表明,应激通过神经系统启动瀑布式级联效应,神经内分泌介质修饰肿瘤微环境和应激相关神经内分泌介质激活瘤细胞内增殖和转移相关信号通路,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。理解慢性应激在肿瘤演进中的作用和机制,有利于设计合理的干预措施治疗肿瘤。

高压液相色谱法检测梗阻性黄疸大鼠肠道通透性

目的用高压液相色谱方法快速准确测量肠道通透性，探讨正常和阻塞性黄疸大鼠的肠道通透性状态。方法24只SD大鼠被随机平均分成2组：健康对照组和梗阻性黄疸组。胆总管完全结扎后获得梗阻性黄疸动物模型。测定所有SD大鼠第6天尿中乳果糖和甘露醇溶液的排出率。所有SD大鼠在第5天晚10时起禁食；第6天早8时灌胃2ml乳果糖和甘露醇溶液（含100mg乳果糖和50mg甘露醇），收集之后24h内的全部尿液。尿样经离心和预处理后，用带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定，样本分析时间为10min。结果甘露醇和乳果糖标准曲线线性良好，线性的相关系数r分别为0．998823和0．999943；方法学的重复性误差（CV％，，n=12）：乳果糖（I。）3．52，甘露醇（M）1．61；回收率：乳果糖（L）98％．4±3％，甘露醇（M）101．1％±3％。第1组和第11组尿中的乳果糖（L）和甘露醇（M）排出率（％）的比值（L／M）分别为0．33土0．04和2．OO土0．16，第1I组l，／M值显著比第1组大（P〈O．001）。结论带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定尿中乳果糖和甘露醇的排出率，方法准确、重复性和回收率满意。梗阻性黄疸SD大鼠L／M比值的测定可反映肠黏膜的通透性和肠道屏障功能。

氯化钴对人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU的线粒体损伤及其耐药性的影响

目的:氯化钴(CoCl2)作用于人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU致其化学性缺氧,观察其线粒体损伤及耐药性的影响。方法:采用梯度浓度CoCl2(0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00μmol/L)培养人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU,MTT法测定Patu8988/5-FU细胞增殖活性和耐药性;JC-1荧光染色流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;RT-PCR检测HIF-1α及多药耐药基因MDR1的表达情况;罗丹明外排实验检测Patu8988/5-FU细胞膜上的P-gp泵功能。结果:随着CoCl2浓度升高或以100μmol/L作用时间延长,Patu8988/5-FU增殖活性下降,线粒体膜电位去极化增加。常氧和缺氧时其对5-氟脲嘧啶(5-Fu)的耐药指数分别达到28.11±3.19、52.08±3.53(P<0.01);HIF-1α和MDR1 mRNA的表达亦明显高于常氧对照组(P<0.05)。罗丹明在缺氧细胞株内的积聚量低于常氧对照组(P<0.01)。结论:利用CoCl2模拟Patu8988/5-FU化学性缺氧存在浓度和时间依赖性;缺氧使Patu8988/5-FU获得性耐药性增加可能是通过引起HIF-1α表达增加和上调多药耐药基因MDR1的表达引起的。

腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术的护理

目的探讨腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术患者的护理对策。方法对11例腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术的患者术前做好心理护理和术前宣教,术后做好病情观察并预防并发症的护理。结果11例患者手术均获成功,手术中出血约40-250ml,平均（110±3）ml;手术时间60-145min,平均（853±7）min;术中放置腹腔引流管引流量50-100ml;住院时间5-9d,平均（7.4±0.2）d。无一例患者出现手术并发症。结论认真做好腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术患者的术前准备,积极预防术后并发症的发生,对患者术后康复十分重要。

谷氨酰胺联合生长激素对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜屏障的作用

目的:探讨谷氨酰胺联合生长激素对梗阻性黄疸大鼠肠道通透性和细菌移位的作用。方法:本研究是前瞻性随机对照的动物实验设计。胆总管结扎后获得梗阻性黄疸(阻黄)动物模型。60只SD大鼠被随机平均分成6组:第1组,健康对照组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第2组,假手术对照组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第3组,阻黄组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第4组,阻黄+谷氨酰胺[0.2 g/(kg.d)灌胃]组;第5组,阻黄+生长激素[2 U/(kg.d)皮下注射]组;第6组,阻黄+谷氨酰胺[0.2 g/(kg.d)灌胃]+生长激素[2 U/(kg.d)皮下注射]组。术后第9天每只大鼠给予双糖灌胃,第10天收集24 h尿液及肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结和下腔静脉血标本并分别行乳果糖/甘露醇(L/M)检测、细菌培养和血清生化检测。结果:第1组与第2组之间,以及第4组与第5组之间L/M值差异无统计学意义(P>0.05),其余所有组间两两相互比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第6组细菌移位率比第4组或者第5组小(P<0.003 3),而第4组与第5组间无明显差异(P>0.003 3);第4组细菌移位率比第3组小(P<0.003 3);第6组细菌移位率比第1组或者第2组大(P<0.003 3),而第1组或第2组间无明显变化(P>0.003 3)。结论:在梗阻性黄疸中联用谷氨酰胺和生长激素在减少肠道高通透性和细菌移位率上明显比单独应用任意一种更有效。

胃癌神经旁浸润的临床特征与预后分析

目的 探讨胃癌神经旁浸润（PNI）的临床意义.方法 对2004年1月至2008年5月期间178例行胃癌根治术后的胃癌组织石蜡标本行苏木精-伊红染色,以肿瘤细胞浸润神经束或神经束膜判定为PNI阳性.分析PNI与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 PNI阳性78例（43.8%）.PNI与肿瘤浸润深度（P＜0.01）、淋巴结转移（P＜0.01）和TNM分期（P＜0.01）有关,但与患者的年龄、性别、肿瘤位置和分化程度无关.单因素分析显示,胃癌患者总体生存率与PNI、胃癌浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关（均P＜0.01）;PNI阳性患者平均生存期（28.6个月）明显短于PNI阴性患者（44.3个月）（P＜0.01）.多因素分析显示,PNI是影响患者总体生存率的独立因素（相对危险度为2.257,95%CI为1.268～4.019,P=0.006）.结论 PNI与肿瘤的进展有关,胃癌术后检测PNI可以作为判断患者预后指标之一.

围手术期应用糖皮质激素对胃癌患者术后康复的影响

目的探讨围手术期应用糖皮质激素(GC)对胃癌患者术后康复的影响。方法39例接受胃癌根治切除术的患者,分成GC组(20例)和对照(C)组(19例)。两组均应用早期肠内营养支持。GC组术前2 h及术后24 h加用琥珀酸钠氢化可的松(Cor)静脉滴注。比较两组患者的血清白蛋白、前清蛋白、总蛋白、血钠、血糖、肝肾功能、总淋巴细胞计数及并发症的发生率等指标。结果GC组术后第7天的血清白蛋白水平明显高于C组[(34.9±2.1)g/L v.s(31.4±3.1)g/L](P<0.01)。两组术后第7天前清蛋白均明显低于术后第1天(P<0.05)。两组血糖、血钠、肝肾功能改变以及术后并发症的发生率均无明显改变。结论胃癌患者围手术期应用糖皮质激可有效改善患者术后白蛋白水平,促进康复。

缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子在胰腺癌中的表达及意义

目的:研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子1alpha(Hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)的表达并探讨其意义。方法:Western blot法检测22例胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和FGF蛋白的表达,分析HIF-1α与VEGF、FGF之间的相关性以及与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期之间的关系。结果:HIF-1α、VEGF和FGF在胰腺癌组织中的蛋白表达水平明显高于胰腺癌周组织(P<0.01),HIF-1α与VEGF、FGF之间的表达具有显著相关性(P<0.01)。HIF-1α的表达与胰腺癌的TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移有关(P<0.01),VEGF和FGF的表达与胰腺癌的肿瘤大小和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:HIF-1α可以上调VEGF和FGF的表达,在胰腺癌的发生、发展中起着重要作用。

临床病理因素和手术方法对胆囊癌预后的影响

目的分析与胆囊癌预后有关的临床病理因素。方法回顾性分析2001—2006年61例进展期胆囊癌外科治疗资料。结果按第6版UICC/AJCC的胆囊癌临床分期标准,IB期8例,IIA期22例,IIB期11例,III期14例,IV期6例。姑息性胆囊切除和/或胆道引流术26例;胆囊切除、局部淋巴结清扫14例,保留肝外胆管的根治性切除7例,联合肝外胆管切除的根治术13例;肝胆胰脏器联合切除1例。37例中有18例淋巴结阳性。52例术后得到随访。满6个月生存为41例(67.2%);满1年生存26例(42.6%);存活2年以上者10例(16.4%);3年以上存活7例(11.5%);1例存活5年以上(1.6%)。术后2年内死亡的51例中,31例随访到死亡前症候:21例有进行性黄疸;14例有肝脏内多个转移;12例有顽固性腹水。非明确胆道病原因死亡者5例。结论临床分期和手术方式与胆囊癌患者的预后有关。

永生化人肝细胞系的建立及其生物学特性

目的建立一种由慢病毒载体表达人端粒酶反转录酶亚单位,具有原代肝细胞的特性的永生化肝细胞系。方法采用离体两步胶原酶灌注法无菌条件下分离肝细胞,构建慢病毒载体并包装高滴度慢病毒,肝细胞被采用表达永生化基因的慢病毒转染。通过筛选功能基因阳性表达克隆建立永生化肝细胞系,倒置相差显微镜观察形态学变化,免疫组化检测细胞角蛋白18(CK18)表达,RT-PCR及Westernblot检测功能基因及蛋白表达。结果采用功能基因阳性表达筛选建立了永生化肝细胞系,其可连续扩增传代,具有原代肝细胞的特性并未呈现致瘤性,揭示出肝脏实质细胞的形态学特征并且表达肝细胞主要的功能基因标志。结论通过功能基因阳性表达筛选成功建立具有原代肝细胞特性的永生化肝细胞系。

奥曲肽诱导胃癌术前腹腔化疗淋巴结内肿瘤细胞凋亡

目的探讨临床行卡铂腹腔内化疗前加用奥曲肽对胃癌淋巴结转移灶癌细胞凋亡的影响。方法 40例胃癌伴淋巴结转移患者行胃癌根治性切除术。20例腹腔化疗前加用奥曲肽(0.1 gq8h.×3)为治疗组,另外20例未用奥曲肽作为对照组。用免疫组化ABC法检测淋巴转移灶p53蛋白(p53)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)及Bcl相关X蛋白(Bax)基因表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果治疗组淋巴转移灶p53和Bax表达较对照组明显增强(P<0.05),并与细胞凋亡呈正相关;Bcl-2表达降低,并与细胞凋亡呈负相关。结论胃癌术前腹腔化疗前加用奥曲肽可能通过p53、Bcl-2及Bax介导使转移淋巴结癌细胞凋亡增加,有助于提高根治性手术的治疗效果。

胆固醇结石患者肝脏核受体基因蛋白的表达

目的探讨胆囊胆固醇结石(CGS)患者肝脏的核受体基因的蛋白表达。方法对20例CGS(胆石组)和10例无胆石症的胆囊息肉患者(对照组)测定了胆石胆固醇成分及血清脂类成分:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和胆汁脂类成分(胆固醇、磷脂和胆汁酸),并计算胆汁总脂和胆汁胆固醇饱和指数。Westernblot法测定肝脏肝受体同类物1(LRH-1)、法尼醇受体(FXR)、人类固醇异生物受体(SXR)及肝脏X受体a(LXRa)基因的蛋白表达量。结果胆石组血清HDL-C浓度明显低于对照组[(0.91±0.05)mmol/Lvs.(1.31±0.09)mmol/L](P<0.01);胆汁胆固醇摩尔百分比浓度较对照组高[(7.89±0.39)mol%vs.(5.15±0.89)mol%](P<0.01);胆汁总脂较对照组明显下降[(105.62±10.51)g/Lvs.(153.50±13.20)g/L](P<0.05);胆石组LRH-1蛋白表达高于对照组[(0.88±0.05)vs.(0.69±0.03)](P<0.05),LXRa、FXR和SXR表达两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论人肝脏LRH-1的蛋白表达增高与胆囊胆固醇结石形成有关。

腹腔镜胆囊切除术在治疗亚急性期胆囊炎的应用

目的将腹腔镜胆囊切除术(LC)和开腹胆囊切除术(OC)治疗亚急性期胆囊炎进行对比,探讨LC治疗亚急性期胆囊炎的安全性。方法对亚急性期胆囊炎LC术178例及OC术215例各项临床资料进行回顾分析。结果 LC术组平均手术时间大于OC术组,术后住院天数少于OC术组。LC术组术中损伤胆管比例小于OC术组,两者在胆漏和胆囊窝积液比例无明显差异,LC术组的穿刺口感染率高于OC术组的切口感染率。结论只要掌握好手术方法,亚急性期胆囊炎的LC术是安全的。