一种检测KPC和NDM耐药基因的双重PCR-LF方法建立及初步应用

目的建立一种双重聚合酶链反应-侧流层析(PCR-LF)方法快速检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)和新德里金属β-内酰胺酶(NDM)两种耐药基因。方法根据KPC和NDM的基因保守区,分别设计并合成了特异性引物,建立双重PCR和LF技术相结合的检测体系,通过优化扩增和LF检测体系,将建立起的方法初步应用于临床标本检测。结果双重PCR-LF可用于KPC和NDM两种碳青霉烯酶基因的检测,检测下限均为200 CFU/mL。以药敏表型检测为参考方法,利用双重PCR-LF直接检测120份临床无菌体液标本,两种方法结果差异无统计学意义(P>0.05),Kappa值为0.644,表明一致性较好。结论双重PCR-LF方法用于KPC和NDM两种耐药基因检测快速有效,对于指导临床用药与监控院内细菌碳青霉烯类抗菌药物耐药性的传播具有重要意义。