嗅鞘细胞条件培养液对PC12细胞神经丝蛋白、突触蛋白、突触素蛋白表达的影响

目的:观察嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)条件培养液对PC12细胞神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)、突触蛋白(synapsin)和突触素蛋白(synaptophysin)表达的影响,探讨嗅鞘细胞条件培养液促神经细胞分化生长的作用机制。方法:原代培养并纯化OECs,收集培养上清制备成嗅鞘细胞培养液(OEC culture medium,OECCM),与PC12细胞培养24、48、72h,观察细胞形态学变化;通过免疫荧光法检测PC12细胞NF的表达及分布;蛋白质印迹法检测NF、突触蛋白和突触素的相对含量。结果:OECCM培养的PC12细胞长有突起,并随着培养时间的延长,细胞形态酷似神经元;免疫荧光染色显示NF起初在核周分布,OECCM作用后NF的分布范围逐渐增加,其分布面积与β-tubulin分布面积的比值显著增高(P<0.05)。蛋白质印迹法显示OECCM组NF、突触蛋白(synapsin)和突触素蛋白(synaptophysin)的表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞能分泌一些促PC12细胞分化的因子,这些因子能促进PC12细胞NF骨架的组装,并诱导神经元功能蛋白的表达,使该细胞在结构和功能上向神经元分化。

人Slit2全长cDNA的真核表达及鉴定

目的:对人神经轴突导向因子Slit2(hSlit2)全长cDNA进行真核表达并进行鉴定。方法:采用分段克隆的方法获得hSlit2全长cDNA的克隆,并构建hSlit2全长cDNA真核表达重组质粒pCMV-GFP-C/hSlit2,用磷酸钙共沉淀法将其转染到人胚肾细胞HEK-293细胞中,通过免疫印迹法鉴定其蛋白表达。结果:经酶切鉴定证实hSlit2全长cDNA的真核表达载体构建成功,免疫荧光蛋白和Western blot结果证实hSlit2全长cDNA在HEK-293细胞中的表达。结论:人神经轴突导向因子hSlit2真核表达载体构建成功,为进一步完善hSlit2蛋白及各水解片段功能研究提供了实验基础。

类风湿关节炎遗传多态性及NSAID药物临床疗效的研究

目的研究中国汉族人群中类风湿关节炎(RA)发生危险因素与环氧合酶2(COX-2)rs5275基因多态性的关系,以及非甾体抗炎药(NSAID)的临床疗效。方法采用以医院为基础的病例-对照研究,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术分析214例类风湿关节炎患者和478例对照COX-2 rs5275(8473 T>C)基因基因多态性,计算各种基因型的RA发生风险及其95%可信区间,其中60例的RA患者给予NSAID药物治疗,并随访治疗3个月后的疗效,根据治疗前后的DAS28评分,分析NSAID药物的疗效。结果 COX-2 rs5275基因多态3种基因型TT、TC、CC在RA组和对照组的频率分别为62.5%(TT)、32.7%(TC)、4.8%(CC)和67.5%(TT)、28.0%(TC)、4.5%(CC),Logistic回归发现与携带COX-2 rs5275 TT基因型的个体相比较,携带COX-2 rs5275 CC等位基因型与RA的发病风险无明显相关。60例RA患者药物治疗后的DAS28评分较治疗前有明显下降。结论 COX-2 rs5275基因多态性可能不是RA发生的危险因素,需要进一步研究证实,NSAID药物对RA疗效显著。

嗅鞘细胞对活化的星形胶质细胞的作用

目的:研究体外培养的大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)对活化的星形胶质细胞(astrocytes,AST)的作用。方法:体外培养嗅鞘细胞和星形胶质细胞。星形胶质细胞经纯化传代,细胞融合后利用划伤法得到活化的星形胶质细胞,将嗅鞘细胞与活化的星形胶质细胞共培养24h后,观察星形胶质细胞增殖能力的改变,以及其表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)的变化。结果:活化的星形胶质细胞与嗅鞘细胞共培养后,MTT实验表明其增殖能力增强;免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法测定结果表明共培养后活化的星形胶质细胞表达的GFAP和CSPG降低。结论:嗅鞘细胞作用于活化后的星形胶质细胞以后,能够促进星形胶质细胞的分裂增殖,同时能够减少星形胶质细胞胶质化,降低抑制性细胞因子的表达。

miR-146a rs2910164 C>G基因多态性与先天性心脏病易感性的研究

目的研究中国汉族人群中miR-146a rs2910164 C>G基因多态性与先天性心脏病发生危险因素关系。方法采用以医院为基础的病例-对照研究,运用质谱SNP分型技术对120例法洛四联症(TOF)患儿,124例大动脉转位(TGA)患儿和136例对照人群进行了miR-146a rs2910164 C>G基因多态性分析,计算各种基因型的先心发生风险及其95%可信区间。结果 miR-146a rs2910164 C>G基因多态三种基因型CC,CG,GG在TOF组、TGA组以及对照组的频率分别为33.9%(CC),49.2%(CG),16.9%(GG);36.1%(CC),51.6%(CG),12.3%(GG)以及35.8%(CC),51.5%(CG),12.7%(GG);通过Logistic回归分析,发现携带miR-146a rs2910164 CG或GG等位基因型与TOF和TGA的发病风险无明显相关。结论 miR-146a rs2910164 C>G基因多态性可能不是先天性心脏病发生的危险因素,相关结果需要进一步研究证实。