miR-21真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨人微小RNA-21(miR-21)重组表达质粒对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响及可能机制。方法设计合成靶向miR-21的互补双链DNA,退火后与真核表达载体pPG-miR-EGFP克隆连接,构建pPG-miR-21-EGFP重组表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM 2000将鉴定正确的重组表达质粒pPG-miR-21-EGFP转染人胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察转染效率。实验分为3组:空白对照组、空载体组、重组表达质粒组。以RT-PCR检测转染前后胃癌细胞miR-21的表达水平。MTT法评价重组表达质粒抑制肿瘤细胞生长的效果,流式细胞术及Hoechst 33258法检测转染后胃癌SGC-7901细胞周期的分布和凋亡。Western blot法、免疫细胞化学法分别检测转染前后PTEN、PCNA、PDCD4、bcl-2、cyclin D1蛋白表达的水平。结果酶切及测序鉴定证实成功构建重组质粒pPG-miR-21-EGFP,转染人胃癌SGC-7901细胞后,荧光显微镜下观察转染效率达75%。RT-PCR检测显示重组表达质粒组胃癌细胞miR-21的表达下调,与空白对照组和空载体组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot法、免疫细胞化学法检测结果显示重组表达质粒组胃癌细胞cyclinD1、PCNA、bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05),而PDCD4、PTEN蛋白的表达上调(P<0.05)。重组表达质粒组的细胞生长缓慢,凋亡指数增加。流式细胞术检测结果显示重组表达质粒组G1期细胞的百分比较空白对照组增加[(69.71±0.314)%vs(50.1±0.331)%],S期细胞较空白对照组明显减少[(14.68±0.448)%vs(28.47±0.316)%](P<0.05)。结论重组表达质粒pPG-miR-21-EGFP可显著下调miR-21在胃癌SGC-7901细胞中的表达,并在一定程度上抑制胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,使较多的细胞停留在G1期,S期细胞减少,其作用机制可能是通过下调cyclinD1、PCNA、bcl-2蛋白的表达,上调PDCD4、PTEN蛋白的表达而实现的。

非小细胞肺癌不同区域淋巴结转移18F-FDG PET-CT显像诊断效能研究

目的 18F-FDG PET-CT显像是判断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)术前分期的重要方法。本研究对NSCLC不同区域淋巴结的最佳最大标准摄取值(maximum standardized uptake value,SUVmax)、淋巴结/纵隔血池摄取比、淋巴结/肝脏血池摄取比进行研究,探讨PET-CT显像对不同区域淋巴结转移的诊断效能差异和临床价值。方法回顾性分析2016-01-01-2018-12-31南京医科大学附属南京医院、南京市第一医院行18F-FDG PET-CT显像后2周内接受肺癌根治术的77例患者病例资料,根据2017年第8版肺癌TNM分期,患者为N0~2期。以手术病理诊断为"金标准",采用χ2检验比较18F-FDG PET-CT显像对肺门(N1区)和同侧纵膈(N2区)淋巴结转移诊断效能差异,根据受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线探讨N1和N2区淋巴结SUVmax值、淋巴结/纵隔血池摄取比、淋巴结/肝脏血池摄取比差异,多因素Logistic回归分析评估PET-CT诊断淋巴结转移假阳性的影响因素。结果 77例患者共清除353组区域淋巴结,包括N1区淋巴结107组和N2区淋巴结246组。84组(23.8%)淋巴结存在转移,269组(76.2%)淋巴结未见转移。18F-FDG PET-CT N1区(83.3%)淋巴结转移诊断灵敏度高于N2区(62.0%),χ2=5.381,P=0.02。N2区(96.4%)淋巴结诊断特异性高于N1(83.6%),χ2=13.415,P=0.010。N1区淋巴结最佳SUVmax、淋巴结/纵隔血池摄取比和淋巴结/肝脏血池摄取比分别为4.05、1.90和1.17;N2区分别为2.95、1.26和0.93。多因素分析显示,阻塞性肺炎(OR=7.325,95%CI为2.342~22.905)和N1区淋巴结(OR=4.255,95%CI为1.600~11.319)是易发生PET-CT假阳性的因素,P<0.05。结论 18F-FDG PET-CT诊断NSCLC淋巴结转移效能与淋巴结位置有关,呈现N1区淋巴结灵敏度高、N2区淋巴结特异性高的特点。不同部位淋巴结采用不同参考指标有助于提高诊断准确性。