血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌细胞中自噬水平的关系及机制研究

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否能够引起血管平滑肌细胞(VSMC)自噬,探讨其相关作用机制。方法以VSMC为研究对象,设立组别分别为空白组、AngⅡ组、自噬抑制剂(3 MA)组、自噬促进剂雷帕霉素(Rap)组、血管紧张素Ⅱ(AT1)受体抑制剂(ARB)组、3 MA+AngⅡ组、Rap+AngⅡ组、ARB+AngⅡ组,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,蛋白质免疫印迹法检测自噬相关蛋白脂化和膜相关蛋白(LC3Ⅱ)表达的变化,免疫荧光法检测自噬小体数目的变化。结果实验中空白组吸光度为(0.159±0.001),AngⅡ组吸光度为(0.151±0.003),相比空白组,加入AngⅡ药物对细胞存活率变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示加入AngⅡ促进VSMC的LC3 Ⅱ表达量增多,呈现时间依赖性、浓度依赖性,表明AngⅡ促进VSMC自噬发生。3 MA对AngⅡ(10-7 mol/L,24 h)引起的LC 3Ⅱ表达量增多起到抑制作用,Rap对AngⅡ(10-7 mol/L,24 h)引起的LC 3Ⅱ表达量增多起到叠加作用。ARB对AngⅡ(10-7 mol/L,24 h)引起的LC 3Ⅱ表达量增多起到抑制作用,表明自噬是由AngⅡ通过ATI受体引起的。结论AngⅡ通过AT1受体引起血管平滑肌细胞发生自噬。