突变型P53蛋白在肺腺癌中的表达及其临床意义

背景与目的突变型TP53基因不仅丧失了抑癌功能,其编码的突变型P53蛋白还能获得促进细胞增殖、抑制细胞凋亡等功能。目前TP53基因在肺腺癌中突变的临床意义尚不十分明确。本研究旨在探讨突变型P53蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性分析120例肺腺癌手术患者的临床病理资料,应用免疫组化法检测患者组织标本中突变型P53蛋白的表达,采用χ2检验分析突变型P53蛋白表达与各临床病理参数的关系,采用单因素生存分析及多因素生存分析法分析突变型P53蛋白表达与总生存期的关系。结果突变型P53蛋白在肺腺癌组织中的表达率为63.7%,突变型P53蛋白的表达与肿瘤大小(P=0.041)及病理分期(P=0.025)有关。单因素生存分析提示肿瘤大小(P=0.031)、淋巴结转移(P<0.001)、病理分期(P<0.001)以及突变型P53蛋白的表达(P=0.038)与患者总生存期密切相关。多因素生存分析提示仅有淋巴结转移(P=0.014)是患者总生存期的独立影响因素。结论TP53基因突变的肺腺癌患者预后较差,突变型P53蛋白可以作为预测患者预后的分子标志物。

非小细胞肺癌组织miRNA-221表达及其与预后的关系研究

背景与目的 microRNAs是肿瘤的重要调控因子,其中miRNA-221的表达与多种肿瘤相关,本研究旨在探讨miRNA-221在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法分析江苏省肿瘤医院2005年11月-2007年1月期间行手术治疗的117例非小细胞肺癌患者的临床资料。采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测上述病例肺癌标本中miRNA-221的水平;应用χ2检验分析miRNA-221表达水平与各临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier方法分析miRNA-221表达与非小细胞肺癌生存期(overall survival,OS)之间的关系;采用Cox风险比例模型分析各个协变量的联合效应。以P<0.05认为差异有统计学意义。结果 miRNA-221的表达量与患者年龄相关,与患者性别(χ2=0.070,P=0.791)、病理类型(χ2=0.414,P=0.520)、p-TNM分期(χ2=0.068,P=0.794)及吸烟史(χ2=0.206,P=0.650)无明显关系;生存分析显示miRNA-221高表达组患者生存期显著低于低表达组(P<0.001)。Cox风险比例模型分析显示miRNA-221表达可作为非小细胞肺癌患者预后不良的标志。结论 miRNA-221的高表达提示非小细胞肺癌患者预后较差,是潜在的肺癌预后预测分子标志物。

miR-203下调Bmi-1基因对肺腺癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨miR-203在肺腺癌中的表达,并分析其与肺腺癌细胞侵袭转移的关系及其分子机制。方法实时定量PCR检测40例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-203的相对表达水平及其与临床病理特征之间的关系;实时定量PCR检测H1650、A549、H1975、SPC-A-1肺腺癌细胞株中miR-203表达水平;生物信息学软件预测miR-203潜在的靶基因;脂质体2000介导miR-203模拟物、Bmi-1基因或Bmi-1 siRNA转染H1975细胞株;Western blotting检测Bmi-1蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-203是否作用于Bmi-1 mRNA的3’UTR区预测靶位;Transwell小室侵袭实验检测H1975细胞株的侵袭转移能力。结果 40例肺腺癌组织中miR-203的相对表达量为0.065±0.013;肺腺癌miR-203表达与淋巴结转移有关,而与其他临床病理参数均无关;miR-203在肺腺癌细胞株H1650、A549、H1975、SPC-A-1中的相对表达量分别为0.280±0.102、0.308±0.168、0.167±0.073和0.287±0.096。生物信息学软件预测Bmi-1是miR-203的潜在靶基因;过表达miR-203可明显降低Bmi-1蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因检测证明miR-203可作用于Bmi-1基因mRNA的3’UTR区预测靶位。过表达miR-203+Bmi-1 siRNA可显著抑制肺腺癌细胞株H1975的侵袭迁移能力;在miR-203过表达的H1975细胞株中同时过表达Bmi-1可恢复其侵袭能力。结论 miR-203可通过下调Bmi-1基因表达抑制H1975肺腺癌细胞株的侵袭转移,是一种潜在抑制转移的miRNA分子。

非小细胞肺癌中长链非编码RNAAFAP1-AS1的表达特征及其与患者预后的关系

目的观察长链非编码RNAAFAP1-AS1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨AAFAP1-AS1与NSCLC患者预后的关系。方法选取82例病理学确诊为NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,制作组织芯片,检测AFAP1-AS1在癌组织及癌旁组织中的表达。通过Cox单因素和多因素回归模型分析AFAP1-AS1与NSCLC预后的关系。结果 AFAP1-AS1在NSCLC肿瘤组织中的表达高于癌旁组织,并且AFAP1-AS1高表达的患者预后明显差于AFAP1-AS1低表达患者(P<0.05)。结论 AFAP1-AS1在NSCLC肿瘤组织中表达上调,可作为判断NSCLC预后的重要指标。

食管癌合并糖尿病患者术后营养支持的临床研究

目的探讨不同营养方式对合并糖尿病的食管癌患者术后血糖情况、营养状况及术后恢复情况的影响。方法选取2015年1月至2015年8月期间在江苏省肿瘤医院胸外科就诊的食管癌合并糖尿病患者32例,根据术后肠内营养开始时间随机分为术后第1天组(d1),术后第3天组(d3)和术后第7天组(d7)。每日监测7段血糖;术后第1、3和7天分别检测患者的营养指标(转铁蛋白、白蛋白和前白蛋白);观察术后相关并发症发生情况。结果所有手术患者术后血糖控制尚可,未出现严重糖代谢并发症。3组患者术后营养指标无显著差异(P>0.05)。早期应用肠内营养能促进术后胃肠功能恢复(P<0.05),并且可减少术后切口感染及肺部感染的发生率(P<0.05)。结论术后第1天开始应用肠内营养有助于食管癌合并糖尿病患者控制血糖水平,提高机体营养状态,减少并发症发生,缩短患者术后恢复期。

系统性鉴定长非编码RNA MALAT1调控的微小RNA

背景与目的长非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤的发生、侵袭转移等过程中发挥着重要的调控作用。本研究通过实验和生物信息学手段系统性研究lnc RNA MALAT1调控的微小RNA(micro RNA,miRNA)。方法设计特异性敲减MALAT1的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO),在A549细胞中敲减MALAT1,通过Tqa Man Low Density Array(TLDA)芯片研究敲减MALAT1后miRNA表达变化;使用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)方法分析敲减MALAT1之后差异表达基因,寻找富集的miRNA。结果 ASO有效降低了MALAT1表达,敲减MALAT1之后153个miRNA表达显著变化,其中131个miRNA表达上调,22个miRNA表达下调。在A549细胞中敲减MALAT1后,458个基因发生显著差异表达,GSEA分析发现多个miRNA在差异表达基因中被显著富集。对TLDA和GSEA数据取交集并进一步分析确认28个被MALAT1调控的miRNA。结论本研究系统鉴定了MALAT1对miRNA的调控,为进一步研究提供了基础。

高通量转录组测序技术研究过表达GPC5对A549细胞基因表达影响

背景与目的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican-5,GPC5)是一个重要的抑癌基因,然而GPC5对肺腺癌细胞增殖能力和基因表达的影响目前研究甚少。本研究拟在肺腺癌A549细胞中过表达GPC5以研究细胞增殖能力和基因表达变化情况。方法通过慢病毒载体构建稳定过表达GPC5的A549细胞株,通过Cell Counter Kit 8(CCK8)、平板克隆和Ed U实验检测细胞增殖能力;通过高通量转录组测序研究基因表达变化。结果相对于空白载体组,CCK8实验发现过表达GPC5可以明显抑制A549细胞的增殖速率;平板克隆实验结果显示,过表达GPC5之后A549细胞克隆形成能力下降(181±17 vs 278±23);Ed U染色结果显示过表达GPC5后阳性染色细胞比例下降。转录组测序结果提示过表达GPC5之后,2,108个基因表达发生明显变化,其中具有正性调节细胞增殖作用的基因明显下调。结论过表达GPC5可以明显抑制肺腺癌细A549的增殖能力,而且过表达GPC5后具有正性调节细胞增殖作用的基因表达下调。

非小细胞肺癌组织微小RNA-145表达及其与预后的关系

目的 探讨微小RNA-145在非小细胞肺癌组织的表达及其与预后的关系.方法 分析江苏省肿瘤医院2005年11月至2007年1月行手术治疗的104例非小细胞肺癌患者的临床资料.采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测上述病例肺癌标本的微小RNA-145水平；应用x2,检验分析微小RNA-145表达水平与临床病理参数的关系；采用Kaplan-Meier方法分析微小RNA-145的表达与非小细胞肺癌患者生存期之间的关系；采用Cox风险比例模型分析各个协变量的联合效应.结果 微小RNA-145的表达量与患者年龄（x2=0.155,P＞0.05）、性别（x2=1.251,P＞0.05）、病理类型（x2=0.452,P＞0.05）、术后外科病理分期（p-TNM,x2 =0.156,P＞0.05）及吸烟史（x2 =2.6,P＞0.05）无明显相关；生存分析显示微小RNA-145低表达组较高表达组患者生存期明显缩短（P＜0.01）.Cox风险比例模型分析显示微小RNA-145低表达可作为非小细胞肺癌患者预后不良的标志.结论 微小RNA-145低表达提示非小细胞肺癌患者预后较差.

p16和Smad4表达缺失在肺腺癌预后的意义

目的 探讨p16和Smad4在人肺腺癌组织中的表达缺失及其与临床病理特征和预后的关系.方法 免疫组织化学法检测p16、Smad4蛋白在120例肺腺癌组织中的表达缺失,探讨p16和Smad4缺失表达与肺腺癌患者临床病理因素及预后的关系.结果 p16和Smad4在肺腺癌组织中的表达缺失率分别为45.0％和62.5％.p16的表达缺失与肿瘤的淋巴结转移（P＜0.01）和临床病理分期明显相关（P＜0.01）,Smad4的表达缺失与肿瘤大小（P＜0.05）,淋巴结转移（P＜0.05）以及肿瘤分化程度（P＜0.05）明显相关.p16和Smad4的表达缺失率与患者总生存期呈负相关（P＜0.01）,p16和Smad4表达共缺失者的总生存期最短（P＜0.01）.p16的表达缺失率与Smad4的表达缺失率呈正相关（r =0.182,P＜0.05）.结论 p16和Smad4在肺腺癌中表达缺失与肺腺癌的恶性生物学行为和不良预后有关.

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1介导的内源竞争性RNA网络研究

目的使用生物信息方法构建长非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）介导的内源竞争性RNA（ceRNA）网络。方法通过miRanda算法预测，MALAT1序列上存在1051个微小RNA（miRNAs，miR）结合位点；StarBase数据库下载MALAT1的紫外交联免疫共沉淀一高通量测序（CLIP—seq）数据；检索miRTarBase，筛选有文献证实的miRNA靶基因5595个；下载StarBase数据库中与MALATl表达存在正相关的基因528个。结果根据miRanda算法，MALAT1序列上存在1051个miRNA结合位点，结合MALATl的CLIP-seq数据进一步筛选，得到48个miRNA。与MALATl表达呈正相关的基因有528个；从miRTarBase数据库中筛选上述48个miRNA的靶基因，与正相关基因取交集，更获得323个基因。基于48个miRNA和323个基因构建MALATl的ceRNA网络。结论通过生物信息学方法可构建MALAT1介导的ceRNA调控网络。