慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪性肝病:当前的认识与争议

我国有众多慢性乙型肝炎(CHB)患者,近些年非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病率也不断上升,CHB合并NAFLD的患病率也呈现上升趋势。由于CHB和NAFLD的最终结局是导致肝硬化和肝细胞癌的发生,因此两种疾病并存已经引起了广泛的关注和研究。目前CHB合并NAFLD导致肝细胞癌风险、全因死亡率和抗病毒治疗效果仍有争议,且相互作用机制仍不清楚。因此本文就CHB合并NAFLD进行简要综述,并对目前其相互关系进行探讨,为临床治疗提供参考。

Notch1抑制干扰素刺激基因信号调控非酒精性脂肪性肝炎中肝细胞脂噬作用的机制

目的:研究髓系Notch1特异性敲除抑制干扰素刺激基因(STING)信号调控肝细胞脂噬作用机制。方法:通过高脂饮食(HFD)构建小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,分离小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)和原代肝细胞以构建共培养体系。12只Notch1^(FL/FL)小鼠随机分成2组:Notch1^(FL/FL)+正常饮食(NCD)组、Notch1^(FL/FL)+HFD组;12只Notch1^(M-KO)小鼠随机分成2组:Notch1^(M-KO)+NCD组、Notch1^(M-KO)+HFD组。分别留取小鼠血清标本进行血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)检查,取肝组织样本进行HE染色、免疫荧光(IF)、免疫印迹、qRT-PCR检测,酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液肿瘤坏死因子(TNF)α水平。组间数据比较采用t检验。结果:成功构建小鼠NASH模型,及小鼠BMMs和原代肝细胞共培养体系。与Notch1^(FL/FL)+HFD组相比,Notch1^(M-KO)+HFD组血清ALT[(250.02±58.21)U/L与(370.70±54.57)U/L,t=3.705,P=0.004]、TG[(29.90±3.54)mg/g与(43.83±8.56)mg/g,t=3.685,P=0.004]和TC[(33.70±8.43)mg/g与(90.53±12.53)mg/g,t=9.917,P<0.001],明显升高;肝组织HE染色显示肝细胞气球样变明显,IF染色显示巨噬细胞浸润增加(t=7.346,P<0.001)。与Notch1^(FL/FL) BMMs共培养的肝细胞组相比,BODIPY探针显示,Notch1^(M-KO)组中肝细胞内脂滴(LDs)沉积明显增多(t=3.835,P<0.001);溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和LDs共定位减少(t=7.103,P<0.001),微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/LC3-I:(t=5.0,P=0.007)、自噬相关基因12(Atg12)(t=28.36,P<0.001)表达下降,p-62表达上升(t=3.253,P=0.03);且LC3和LDs共定位减少(t=5.24,P=0.0003)。与Notch1^(FL/FL)组相比,Notch1^(M-KO)组小鼠BMMs中p-STING(t=5.318,P=0.006)、p-TANK1结合激酶1(TKB1)(t=6.467,P=0.002)、p-干扰素调节因子3(IRF3)(t=14.61,P<0.001)、p-P65(t=12.7,P=0.002)蛋白表达上升,同时伴有干扰素(IFN)-β(t=7.978,P<0.001)、TNFα(t=8.496,P<0.001)、白细胞介素1β(IL-1β)(t=4.7,P<0.001)、趋化因子配体-10(t=4.428,P=0.001)炎性介质的mRNA表达明显上升。使用CRISPR/Cas9敲除Notch1^(M-KO)小鼠BMMs中STING基因,与CRISPR-Control组相比,STING-KO组BMMs中p-TKB1(t=2.909,P=0.044)、p-IRF3(t=10.96,P<0.001)、p-P65(t=7.091,P=0.002)蛋白表达下降,上清液中TNFα[(732.3±129.35)pg/ml与(398.17±47.15)pg/ml,t=4.204,P=0.014]释放减少。而与STING-KO BMMs共培养的肝细胞中LC3-II/LC3-I(t=7.546,P=0.001)上升,p-62(t=10.96,P<0.001)表达下降,且LC3和LDs共定位增多。结论:髓系Notch1特异性敲除通过激活巨噬细胞STING信号,增加炎性介质基因表达,抑制肝细胞自噬流及脂噬的发生,加重LDs沉积和促进NASH的进展。