SYBR Green实时定量PCR检测胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表达及其临床意义

目的:研究胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGF mRNA的表达情况及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应技术对22例胰腺癌细胞及其相对应的癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA进行定量检测,并分析其与临床病理特点之间的关系。结果:统计结果显示HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中的表达高于癌旁组织(P<0.01),相关性分析显示肿瘤组织中HIF-lα表达与VEGF、bFGF表达之间显著正相关性(P<0.01)。HIF-1α表达与肿瘤大小和淋巴结转移显著相关(P<0.01),与TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄无相关性,VEGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关(P<0.05),bFGF高表达与肿瘤大小、淋巴转移淋巴转移相关(P<0.05),而与TNM分期、性别及年龄无相关性。结论:HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中存在高表达,HIF-1α表达与TNM分期、肿瘤大小和淋巴转移相关,VEGF和bFGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关。实时荧光定量PCR检测HIF-1α、VEGF和bFGF对评估胰腺癌病人预后可能有一定的价值,也为胰腺癌的治疗提供了治疗靶点。

肝癌中骨桥蛋白和血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的探讨骨桥蛋白(OPN)和血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达以及与转移、复发的关系。方法采用免疫组化法检测64例肝癌组织、10例肝硬化组织及10例正常组织中OPN、VEGF的表达,分析两者与临床病理特征的关系。结果OPN和VEGF在肝癌组织的含量显著高于肝硬化及正常组织(P<0·05),OPN、VEGF的高表达与肝癌的早期复发转移显著相关(P<0·01),且OPN和VEGF在肝癌组织的表达呈正相关(r=0·73,P<0·01)。结论OPN和VEGF在肝癌组织中显著高表达,且和早期复发转移相关,OPN可能参与了肿瘤血管生成的过程。

核因子κB活化在脓毒血症急性肝损伤发病中的作用机制

目的探讨核因子κB(NF-κB)活化在脓毒血症所致大鼠急性肝损伤发病中的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒血症急性肝损伤模型,将大鼠随机分为3组:CLP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)+CLP组、假手术组,观察术后24h肝组织的病理损伤及肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(STB)、非结合胆红素(UCB)的变化,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中NF-κBp65的表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化。结果CLP可致大鼠肝急性病理损伤,模型组ALT、AST、STB、UCB显著高于假手术组,NF-κBp65的表达及TNF-a含量明显高于假手术组,PDTC干预组肝组织NF-κBp65的表达及TNF-a含量明显下降,ALT、AST、STB、UCB相应降低。结论CLP所致脓毒血症能显著增强肝组织NF-κB的表达进而启动TNF-a等炎症因子表达增加而参与大鼠急性肝损伤发生;用PDTC抑制NF-κB活性能够降低肝组织中TNF-a表达,且能改善脓毒血症所致大鼠急性肝损伤。

改良胰管空肠黏膜吻合术预防胰十二指肠术后胰瘘的效果

目的:研究改良胰管空肠黏膜吻合术预防胰十二指肠术后胰瘘的效果。方法:回顾性分析57例行胰十二指肠切除术后消化道重建患者的临床资料,比较不同胰肠吻合术对术后胰瘘发生率的影响。结果:40例行胰肠套入吻合术,出现并发症17例(42.5%),其中胰瘘8例(20.0%)。17例行改良胰管空肠黏膜吻合术,出现并发症2例(11.8%),未发生胰瘘。两种术式间并发症发生率和胰瘘发生率差异均有显著性(均P<0.05)。结论:改良胰管空肠黏膜吻合术在预防胰瘘及减少并发症方面优于胰肠套入吻合术。

胃癌患者癌组织与血浆中miR-195的表达及临床病理意义

目的:研究miR-195在胃癌患者癌组织与血浆中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测47例胃癌患者肿瘤组织与对应癌旁正常组织中miR-195的表达水平,以及相应47例胃癌患者术前血浆与10例健康者血浆中miR-195的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果:与癌旁正常组织相比,胃癌组织中miR-195表达降低,且其表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄、TNM分期、肿瘤分化程度无关(P>0.05);与健康者相比,胃癌患者血浆中miR-195表达降低,且其表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄、TNM分期、肿瘤分化程度无关(P>0.05)。结论:miR-195在胃癌患者癌组织及术前血浆中表达降低,且可能与淋巴结转移相关。

急性胰腺炎大鼠二十碳烯酸代谢的变化及PGE1对其的影响

目的了解大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)不同时相血清PGE2、PGF1α、TXB2等变化规律,以及这些变化与胰腺病理积分之间的相关性。研究外源性PGE1对上述代谢物变化的影响。方法实验用SD大鼠90只,随机分为对照组、ANP及PGE1治疗组。以3.5%牛磺胆酸钠经胰管内注射诱导大鼠实验性ANP,PGE1治疗组则于造模前及造模后1h腹腔内注射PGE13.0μg/kg体重。各组于造模后第3h、6h、12h处死部分大鼠,取其血清及胰腺组织,分别检测血清淀粉酶、PGE2、PGF1α、TXB2浓度及胰腺病理评分,行相关性分析。结果与对照组相比,ANP组术后3h、6h、12h的淀粉酶、TXB2的血清浓度显著升高(P<0.01),PGE2则显著下降(P<0.05),PGF1α有所下降,但无统计学意义。PGE1治疗组,各时相淀粉酶、TXB2的血清浓度显著回落,与ANP组相应时相比较,有统计学意义(P<0.01),PGE2、PGF1α有所上升,但不显著。PGE1治疗组的胰腺出血、坏死积分显著低于ANP组,而水肿、白细胞浸润的积分无显著差别,相关性分析显示胰腺出血、坏死的积分与淀粉酶、TXB2等的血清浓度呈正相关。结论二十碳烯酸的异常代谢参与了ANP的发生、发展,外源性PGE1通过干预这种异常代谢,影响胰腺炎的发展。

SYBR Green实时定量PCR检测胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表达及其临床意义

目的:研究胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA的表达情况及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应技术对22例胰腺癌细胞及其对应的癌旁组织中HIF-1α、VEGF和bFGFmRNA进行定量检测,并分析其与临床病理特点之间的关系。结果:统计结果显示HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中的表达高于癌旁组织(P<0.01),相关性分析显示肿瘤组织中HIF-lα表达与VEGF、bFGF表达呈显著正相关(P<0.01)。HIF-1α表达与肿瘤大小和淋巴结转移显著相关(P<0.01),与TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄无相关性,VEGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关(P<0.05),bFGF高表达与肿瘤大小、淋巴转移淋巴转移相关(P<0.05),而与TNM分期、性别及年龄无相关性。结论:HIF-1α、VEGF和bFGF在胰腺癌中存在高表达,HIF-1α表达与TNM分期、肿瘤大小和淋巴转移相关,VEGF和bFGF表达与肿瘤大小和淋巴转移相关。实时荧光定量PCR检测HIF-1α、VEGF和bFGF对评估胰腺癌患者预后可能有一定的价值,也为胰腺癌的治疗提供了治疗靶点。

慢性应激与肿瘤关系的研究进展

慢性应激是个体面对特殊环境变化而不能调整和稳定内环境稳态时所经历的持续的情感及心理反应。近年来的研究表明,应激通过神经系统启动瀑布式级联效应,神经内分泌介质修饰肿瘤微环境和应激相关神经内分泌介质激活瘤细胞内增殖和转移相关信号通路,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。理解慢性应激在肿瘤演进中的作用和机制,有利于设计合理的干预措施治疗肿瘤。

阑尾少见病四例报告

病例1,女,18岁.因阵发性腹痛42h入院,自上腹转移至右下腹,伴恶性、压食、发热.近3个月时腹泻,日3～4次,水样便无脓血.停经3月余.体检:T39.6℃.腹消隆起,右下腹明显肌紧,压痛,反跳痛,宫底脐下可扪及.WBC11.3×109/L,N85%,L13%,M2%.术中见阑尾位于盲肠前,被大网膜包裹,长9cm,直径1.4 cm,充血水肿,附炎性渗出物,作阑尾切除术并大网膜部分切除,术后康复.病检示阑尾阿米巴病,粘膜坏死,中腔积脓.

高压液相色谱法检测梗阻性黄疸大鼠肠道通透性

目的用高压液相色谱方法快速准确测量肠道通透性，探讨正常和阻塞性黄疸大鼠的肠道通透性状态。方法24只SD大鼠被随机平均分成2组：健康对照组和梗阻性黄疸组。胆总管完全结扎后获得梗阻性黄疸动物模型。测定所有SD大鼠第6天尿中乳果糖和甘露醇溶液的排出率。所有SD大鼠在第5天晚10时起禁食；第6天早8时灌胃2ml乳果糖和甘露醇溶液（含100mg乳果糖和50mg甘露醇），收集之后24h内的全部尿液。尿样经离心和预处理后，用带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定，样本分析时间为10min。结果甘露醇和乳果糖标准曲线线性良好，线性的相关系数r分别为0．998823和0．999943；方法学的重复性误差（CV％，，n=12）：乳果糖（I。）3．52，甘露醇（M）1．61；回收率：乳果糖（L）98％．4±3％，甘露醇（M）101．1％±3％。第1组和第11组尿中的乳果糖（L）和甘露醇（M）排出率（％）的比值（L／M）分别为0．33土0．04和2．OO土0．16，第1I组l，／M值显著比第1组大（P〈O．001）。结论带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定尿中乳果糖和甘露醇的排出率，方法准确、重复性和回收率满意。梗阻性黄疸SD大鼠L／M比值的测定可反映肠黏膜的通透性和肠道屏障功能。

CDKN3基因在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长、细胞周期的影响

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)基因在肝癌组织中的表达,以及被沉默后对肝癌细胞生长和细胞周期的影响。方法采用普通及定量RT-PCR、蛋白免疫印迹法检测36例手术切除的肝癌组织和匹配的癌旁组织以及人肝癌细胞株中CDKN3的表达;观察沉默CDKN3表达后肝癌细胞生长曲线、克隆形成能力和细胞周期的变化。结果与癌旁样本相比,CDKN3基因在63.9%(23/36)肝癌组织中的mRNA表达显著上调,差异具有统计学意义(P<0.000 1);RNA干扰技术沉默CDKN3表达后,MHCC-LM3和Huh-7细胞生长和克隆形成能力被明显抑制(P<0.05);应用流式细胞术发现沉默CDKN3的表达能够诱导肝癌细胞发生G0/G1期阻滞(P<0.05)。结论 CDKN3基因在肝癌中表达上调,其通过影响细胞周期分布从而促进肝癌细胞的增殖,在肝癌发生、发展过程中可能发挥重要作用。

氯化钴对人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU的线粒体损伤及其耐药性的影响

目的:氯化钴(CoCl2)作用于人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU致其化学性缺氧,观察其线粒体损伤及耐药性的影响。方法:采用梯度浓度CoCl2(0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00μmol/L)培养人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU,MTT法测定Patu8988/5-FU细胞增殖活性和耐药性;JC-1荧光染色流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;RT-PCR检测HIF-1α及多药耐药基因MDR1的表达情况;罗丹明外排实验检测Patu8988/5-FU细胞膜上的P-gp泵功能。结果:随着CoCl2浓度升高或以100μmol/L作用时间延长,Patu8988/5-FU增殖活性下降,线粒体膜电位去极化增加。常氧和缺氧时其对5-氟脲嘧啶(5-Fu)的耐药指数分别达到28.11±3.19、52.08±3.53(P<0.01);HIF-1α和MDR1 mRNA的表达亦明显高于常氧对照组(P<0.05)。罗丹明在缺氧细胞株内的积聚量低于常氧对照组(P<0.01)。结论:利用CoCl2模拟Patu8988/5-FU化学性缺氧存在浓度和时间依赖性;缺氧使Patu8988/5-FU获得性耐药性增加可能是通过引起HIF-1α表达增加和上调多药耐药基因MDR1的表达引起的。

IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B的增殖及Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用

目的探讨IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖的影响及可能的机制。方法用不同浓度IWR-1(2、4、8、16μmol/L)处理Hep3B细胞,CCK-8法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR检测β-catenin和c-myc m RNA表达的变化。结果 IWR-1对人肝癌Hep3B细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞术结果显示,Hep3B细胞的细胞周期呈现明显的G_0/G_1期阻滞,且细胞凋亡率明显升高(P<0.01),呈现剂量依赖性。IWR-1可引起β-catenin和c-myc m RNA表达下降,β-catenin、c-myc蛋白表达下降,而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升。结论 IWR-1可以抑制人肝癌细胞株Hep3B的增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路来实现。

腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术的护理

目的探讨腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术患者的护理对策。方法对11例腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术的患者术前做好心理护理和术前宣教,术后做好病情观察并预防并发症的护理。结果11例患者手术均获成功,手术中出血约40-250ml,平均（110±3）ml;手术时间60-145min,平均（853±7）min;术中放置腹腔引流管引流量50-100ml;住院时间5-9d,平均（7.4±0.2）d。无一例患者出现手术并发症。结论认真做好腹腔镜脾切除同期行胆囊切除术患者的术前准备,积极预防术后并发症的发生,对患者术后康复十分重要。

谷氨酰胺联合生长激素对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜屏障的作用

目的:探讨谷氨酰胺联合生长激素对梗阻性黄疸大鼠肠道通透性和细菌移位的作用。方法:本研究是前瞻性随机对照的动物实验设计。胆总管结扎后获得梗阻性黄疸(阻黄)动物模型。60只SD大鼠被随机平均分成6组:第1组,健康对照组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第2组,假手术对照组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第3组,阻黄组,生理盐水1.5 ml/d灌胃;第4组,阻黄+谷氨酰胺[0.2 g/(kg.d)灌胃]组;第5组,阻黄+生长激素[2 U/(kg.d)皮下注射]组;第6组,阻黄+谷氨酰胺[0.2 g/(kg.d)灌胃]+生长激素[2 U/(kg.d)皮下注射]组。术后第9天每只大鼠给予双糖灌胃,第10天收集24 h尿液及肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结和下腔静脉血标本并分别行乳果糖/甘露醇(L/M)检测、细菌培养和血清生化检测。结果:第1组与第2组之间,以及第4组与第5组之间L/M值差异无统计学意义(P>0.05),其余所有组间两两相互比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第6组细菌移位率比第4组或者第5组小(P<0.003 3),而第4组与第5组间无明显差异(P>0.003 3);第4组细菌移位率比第3组小(P<0.003 3);第6组细菌移位率比第1组或者第2组大(P<0.003 3),而第1组或第2组间无明显变化(P>0.003 3)。结论:在梗阻性黄疸中联用谷氨酰胺和生长激素在减少肠道高通透性和细菌移位率上明显比单独应用任意一种更有效。

基于生物电阻抗法减重手术早期身体成分变化的研究

目的探讨减重手术后早期病人身体成分变化,从而制定营养及治疗方案。方法回顾性分析2019年3月至2022年4月于南京医科大学附属淮安第一医院接受腹腔镜胃袖状切除术(laparoscopic sleeve gastrectomy,LSG)的106例病人。手术前及随访病人利用生物电阻抗法检测人体成分指标、肥胖指标、肌肉指标、水分指标及营养指标。结果106例病人均成功实施LSG,女性66例(62.3%),男性40例(37.7%),年龄(28.4±7.2)岁。于术后1个月、3个月、6个月及12个月完成随访的病人分别有85例(80.2%)、72例(67.9%)、65例(61.3%)、60例(56.6%)。人体成分指标:体重、身体总水分、蛋白质、无机盐、体脂肪、肌肉量及去脂体重较术前下降;体重及体脂肪不断下降,分别由术前(108.6±20.5)kg及(49.8±12.8)kg下降至术后12个月时的(72.4±14.7)kg及(20.1±5.7)kg。肥胖指标:体重指数、体脂百分比、腰臀比、内脏脂肪面积、肥胖度、四肢及躯干脂肪均呈进行性下降;术后12个月时,体重指数由术前的(38.6±5.9)kg/m2下降至(26.2±4.6)kg/m2,体脂百分比由术前的(45.4±5.2)%下降至(26.9±6.2)%,内脏脂肪面积由术前的(173±46)cm2下降至(78±32)cm2。肌肉指标:骨骼肌质量、上臂围度、上臂肌肉围度、双上肢及躯干节段肌肉量在术后6个月内不同程度降低;双下肢节段肌肉量在术后1个月即下降至稳定。水分指标:细胞内水分及细胞外水分减少,细胞外水分比率在术后3个月升高。营养指标:InBody评分在术后3个月及6个月均较前一随访时间点升高,身体细胞量在3个月内呈现下降趋势。结论减重手术后身体成分获得改变,可为体重控制、肌肉增减、营养平衡等提供一定的科学依据。

减重手术后身体成分变化及有效体重减轻的预测因素分析

目的观察肥胖患者胃袖状切除(sleeve gastrectomy,SG)术后的身体成分变化情况以及了解有效减重的影响因素。方法本研究按照纳入和排除标准纳入2019年10月至2022年10月期间在南京医科大学附属淮安第一医院接受SG手术治疗的肥胖患者,收集其术前(1 d)及术后第1、3、6、12个月时的人体体格测量学指标、脂质代谢指标和身体成分数据,分析有效减重的风险因素。结果本研究共纳入170例患者。①术后各时间点时的人体体格测量学指标,如体重、体质量指数、腰围、臀围、腰臀比相较基线(术前1 d)值明显降低(P<0.05)且呈持续下降趋势(P<0.05),同时总体重减少百分比和多余体重减少百分比呈持续升高趋势(P<0.05)。②术后各时间点时的脂质代谢指标如甘油三酯、总胆固醇及尿酸,除了第6和12个月时的总胆固醇与术前比较差异无统计学意义(P>0.05)且术后第1个月时尿酸较术前升高(P<0.05)外,其他指标在术后各时间点均较基线值明显降低(P<0.05)。③术后各时间点时除了术后第3、6、12个月时左和右下肢去脂体重百分比(P>0.05)外的所有身体成分指标均较基线值明显降低(P<0.05)且部分身体成分指标如(左和右上肢、左和右下肢及躯干)脂体重、脂体重百分比、内脏脂肪面积和肥胖度在术后1年内呈持续下降趋势(P<0.05)。④至术后第3个月时有93例患者达到有效减重标准(多余体重减少百分比≥50%)。多因素logistic回归分析结果发现,术前右下肢的脂体重越小,达到有效减重的概率更高[回归系数为–0.794,标准误为0.225,Wald χ^(2)值为12.424,OR(95%CI)=0.452(0.290,0.703),P<0.001],该指标的受试者操作特征曲线下面积(95%CI)为0.782(0.672,0.893)、敏感性为0.679、特异性为0.792、最佳截断值为7.35 kg。结论本研究结果提示,SG能明显改善肥胖患者的人体体格测量学指标和脂质代谢指标,在短期内能达到有效的减重效果。SG术后,从全身到四肢和躯干的身体构成发生了一定的变化,且术后右下肢的脂体重与术后短期有效减重密切相关,但它区分达有效减重的能力中等。

腹腔镜胃袖状切除术对于不同体重指数单纯性肥胖患者的疗效分析

目的探讨腹腔镜胃袖状切除术对不同肥胖程度患者的减重效果。方法回顾性分析2019年3月-2022年5月于南京医科大学附属淮安第一医院接受腹腔镜胃袖状切除术的152例肥胖患者的病历资料,其中女119例(78.3%),男33例(21.7%),年龄18~58岁,平均(30.9±7.9)岁。Ⅰ度肥胖(体重指数30.0~34.9 kg/m^(2))38例、Ⅱ度肥胖(体重指数35.0~39.9 kg/m^(2))57例、Ⅲ度肥胖(体重指数≥40.0 kg/m^(2))57例。记录并分析术前及术后1、3、6、12个月患者身体测量指标、生化指标、多余体重下降百分比及体重下降百分比。采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析。结果152例患者均成功实施腹腔镜胃袖状切除术。体重、体重指数、腰围、臀围、腰臀比、肝功能、血糖、血脂在术后随访各时间点均有下降,尿酸在术后1个月较术前升高,术后3、6、12个月较术前下降。至术后12个月,体重(75.9±17.0)kg(t=15.14,P<0.001)、体重指数(26.2±3.7)kg/m^(2)(t=14.44,P<0.001)、腰围(89.0±10.7)cm(t=9.20,P<0.001)、臀围(100.6±7.6)cm(t=12.67,P<0.001)、谷丙转氨酶(18.2±16.6)μ/L(t=2.83,P=0.018)、谷草转氨酶(15.2±14.2)μ/L(t=2.84,P=0.018)、空腹血糖(4.6±0.5)mmol/L(t=2.01,P=0.026)、甘油三酯(1.1±0.5)mmol/L(t=3.71,P=0.005)、尿酸(340.2±102.7)μmol/L(t=4.46,P=0.001),均较术前降低且差异有统计学意义。术后6个月,Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ度肥胖组多余体重下降百分比分别为(92.7±35.5)%、(86.1±16.0)%、(67.5±14.0)%,三组间差异有统计学意义(F=5.38,P=0.010);体重下降百分比分别为(20.5±7.4)%、(28.5±5.2)%、28.9±6.1%,总体差异也有统计学意义(F=3.50,P=0.043)。术后1年,3组间多余体重下降百分比及体重下降百分比差异无统计学意义。结论腹腔镜胃袖状切除术治疗单纯性肥胖效果良好,体重、腰围、臀围、肝功能、血糖、血脂及尿酸均获得改善。术后前6个月,Ⅰ度肥胖较Ⅱ度肥胖患者多余体重下降百分比高,获得相对较好的减重效果,但至术后1年,Ⅲ度肥胖患者减重效果也逐步显著。