转录因子Foxp3在自发免疫耐受大鼠移植肝内的表达

目的研究自发免疫耐受大鼠移植肝内转录因子Foxp3的变化。方法双袖套法建立大鼠原位肝脏移植模型。取肝组织,通过实时荧光定量PCR检测大鼠移植肝内Foxp3 mRNA的表达;Western blot检测肝内Scurfin蛋白含量的变化。结果自发耐受组大鼠肝移植1周内Foxp3 mRNA及其蛋白产物Scurfin的表达明显下降,在7d左右开始上升,14d达到峰值,30d后Foxp3 mRNA的表达开始下降,但仍高于正常值的(2.86±0.12)×10-3(P<0.05)。结论转录因子Foxp3可能参与大鼠肝移植自发免疫耐受的形成。

成人间活体肝移植中小肝综合征的预防策略

小肝综合征(small-for-sizesyndrome)是造成成人间活体肝脏移植预后差的重要原因,其确切概念尚未完全统一,本文对其发病机制的研究进展作了概括,同时主要从移植物的选择、门静脉压力的控制、肝静脉的回流及移植物内炎症基因表达的调控四个方面介绍了预防小肝综合征发生的策略.

P53及PCNA与小肝癌根治切除术后早期复发的相关性研究

目的 研究小肝癌根治切除术后短期(≤6个月)内复发与肝癌组织中P5 3和PCNA表达的相互关系及其临床价值。方法 应用免疫组化方法检测根治切除小肝癌38例病理标本中P5 3与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,结合临床资料分析其意义。结果 应用统计学方法对实验结果进行秩和检验(a=0 .0 5 ) ,复发组与非复发组的P5 3表达无显著性差异(z =- 1.5 19,P >0 .0 5 ) ;而PCNA的表达差异显著(z =3.783,P <0 .0 5 )。结论 P5 3与小肝癌根治术后的短期复发无关,而PCNA的表达与小肝癌根治术后的短期复发存在相关性,此研究判断小肝癌预后可能更为准确。

尿激酶型纤溶酶原活化物和基质金属蛋白酶类在腹主动脉瘤组织中的表达

目的探讨尿激酶型纤溶酶原活化物(u-PA)和明胶酶A(MMP-2)、明胶酶B(MMP-9)在腹主动脉瘤(AAA)组织中的表达及产生的源泉。方法用u-PA和MMP-2、MMP-9单克隆抗体以免疫组织化学方法在30例AAA组织和30例正常腹主动脉组织切片上检测u-PA和MMP-2、MMMP-9抗原(蛋白);用u-PA的寡核苷酸探针和MMP-2、MMP-9的cDNA探针以原位杂交方法,在上述AAA组织和正常腹主动脉组织的冰冻切片上探测u-PA和MMP-2、MMP-9的mRNA。结果u-PA和MMP-9主要在AAA组织中层和外膜巨噬细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达;MMP-2在AAA组织中主要由中层平滑肌细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达。结论由巨噬细胞产生的u-PA直接激活原MMP-2和原MMP-9,在AAA形成和扩张中起着关键性作用。

几种不同预测大鼠肝脏体积(重量)方法的比较

目的 研究大鼠肝脏CT扫描结果与实际肝脏重量和体积的关系 ,建立术前、术后间接预测肝脏体积的方法。方法 30只SD大鼠 ,用肝脏CT扫描的方法测定大鼠肝脏的体积 ,同时测定大鼠的体重 ,处死大鼠后测定鼠肝的重量、体积及各叶的重量 ,用直线回归的方法探讨肝脏重量与肝体积、体重、体表面积及CT测定肝体积的关系。结果 30只大鼠肝脏重量 (1 1 .1 4± 1 .55)g与肝脏体积 (1 1 .2 0± 1 .51 )cm3数值基本相等 ,肝脏各叶重量占全肝重量中的比例相对恒定 ,肝脏重量与大鼠体重、体表面积及CT测定的肝脏体积分别具有线性依存关系 ,其差异有非常显著性(P<0 .0 1 ) ,CT预测各叶肝重与肝脏各叶重量之间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 根据大鼠的体重、体表面积及CT扫描肝体积与大鼠肝重相关性 ,可以预测大鼠各叶肝重 ,用于小移植物的实验研究 。

活体肝移植供体的选择及术后评估28例

目的探讨活体肝移植供体的选择标准 ,评估其术后状况。方法回顾总结 1995年1月至 2 0 0 3年 7月 2 8例活体肝移植供体术前检查、选择标准 ;术后随访其肝肾等重要脏器功能、并发症情况。结果 2 8例供体平均住院日为 10 (8～ 2 0 )d。本组 1例术后发生肝脏断面渗血 ,经保守治疗后痊愈。 1例在“T”形管拔除后发生胆漏 ,经手术引流后痊愈。其余 2 6例无并发症出现。随访时间 2个月至 8年。所有供体均恢复正常体力活动。结论保证供体的安全是开展活体肝移植的首要原则。在具备丰富肝脏手术经验的基础上 ,供体手术是安全、可行的。

细胞毒性T淋巴细胞抗原4免疫球蛋白重组腺相关病毒载体的构建及其在移植肝中的表达

目的 将细胞毒性T淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)cDNA克隆到腺相关病毒载体pSNAV中,获得目的基因在移植肝表达,为器官移植免疫耐受基因治疗奠定基础。 方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建pSNAV-CTLA-4Ig,转化DH-5α,得到抗性克隆,BamH Ⅰ酶切鉴定。用脂质体将psNAV-CTLA-4Ig导入BHK-21中,G418筛选,以HSV1-rc感染此细胞株,产生pSNAV-CTLA-4Ig病毒。斑点杂交法测定病毒滴度, PCR鉴定CTLA-4Ig基因的整合并测序鉴定CTLA-4Ig全长,免疫组织化学方法检测CTLA-4Ig蛋白在大鼠移植肝中的表达。 结果 重组质粒经BamH Ⅰ酶切得到CTLA-4Ig全长cDNA片段,表明CTLA-4Ig成功地插入pSNAV内;病毒滴度测定的病毒颗粒数为8.5×1011／ml;PCR扩增产物为500~600 bp的基因片段,证实有CTLA^4Ig基因的整合;所测得的DNA序列与已知的CTLA-4Ig基因序列完全一致。经pSNAV-CTLA-4Ig病毒灌注的肝脏可见CTLA-4Ig蛋白的表达。 结论将CTLA-4Ig cDNA成功克隆到腺相关病毒载体pSNAV内,证实CTLA^4Ig cDNA正确插入pSNAV多克隆位点内,CTLA-4Ig蛋白可在移植肝中表达。

重组肝细胞生长因子促进大鼠移植肝细胞的再生

目的探讨术后应用重组肝细胞生长因子(r HGF)对大鼠移植肝细胞再生的促进作用。方法采用改良“二袖套法”建立SD大鼠原位部分肝移植模型,受鼠分为实验组和对照组,术后经尾静脉分别给予r HGF和相同体积的生理盐水,2次/d。两个组分别在术后第1、2、4、7d时随机挑取5只大鼠处死,称取移植物湿重,采血检测血清丙氨酸转氨酶及白蛋白,流式细胞仪检测移植肝的增殖活性,免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第1、2d,实验组移植物湿重较对照组同时间段明显增加;术后第4、7d,实验组血清丙氨酸转氨酶水平较对照组同时间段明显降低,而白蛋白水平较对照组同时间段明显增高;术后第2、4d,实验组的移植肝增殖指数和Ki-67表达较对照组高(P<0.05)。结论大鼠部分肝移植后使用r HGF能够明显促进移植肝细胞的再生。