抑癌基因MIIP对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖与凋亡影响研究

目的迁移侵袭抑制蛋白(invasive migration inhibitor protein,MIIP)是近来发现的抑制肿瘤侵袭转移的基因,研究显示其在多种恶性肿瘤组织中表达降低。本研究探讨沉默MIIP表达对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期与凋亡及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/p38通路的影响。方法体外培养人鼻咽癌CNE-1细胞,利用MIIPsiRNA转染CNE-1细胞为MIIPsiRNA组,采用国际通用的与所有基因均无同源性序列的non-target siRNA转染为阴性对照组,以未经处理的CNE-1细胞为空白对照组,48h后收集各组细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测MIIP mRNA表达情况,利用蛋白质印迹法检测MIIP蛋白表达情况;通过细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)法检测细胞增殖情况,利用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2和EGFR/p38通路相关蛋白表达情况。结果空白组、阴性对照组和MIIPsiRNA组MIIP mRNA水平分别为1.04±0.17、1.07±0.16和0.20±0.04,MIIP蛋白分别为0.94±0.13、0.92±0.14和0.13±0.03,与空白对照组和阴性对照组比较,MIIPsiRNA组MIIP mRNA、MIIP蛋白表达降低,均P<0.001;空白组、阴性对照组和MIIPsiRNA组G0/G1期细胞比例分别为(58.88±4.25)%、(58.79±6.15)%和(30.67±4.26)%,S期细胞比例分别为(33.00±4.07)%、(35.76±4.12)%和(46.35±5.20)%,G2/M期细胞比例分别为(8.12±2.35)%、(5.45±1.95)%和(22.98±3.76)%;与空白对照组和阴性对照组比较,G2/M期细胞比例增多,差异有统计学意义,P<0.001;与阴性对照组比较,MIIPsiRNA组G0/G1期细胞比例有所减少,S期变化差异无统计学意义,G2/M期细胞比例增多,P<0.001;空白组、阴性对照组和MIIPsiRNA组凋亡率分别为(20.4±4.1)%、(20.8±4.1)%和(9.5±1.9)%。与空白对照组和阴性对照组比较,MIIPsiRNA组细胞凋亡率降低,P<0.05;空白组、阴性对照组和MIIPsiRNA组PCNA蛋白分别为0.14±0.02、0.15±0.02和0.43±0.07,Cyclin D1蛋白分别为0.37±0.06、0.35±0.05和0.62±0.10,Bax蛋白分别为0.36±0.06、0.34±0.05和0.27±0.04,Bcl-2蛋白分别为0.29±0.04、0.28±0.04和0.45±0.07。与空白对照组和阴性对照组比较,MIIPsiRNA组PCNA、Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高,均P<0.001;Bax蛋白表达降低,均P<0.05。结论沉默MIIP基因表达可能通过促进EGFR/p38信号通路激活,促进CNE-1细胞增殖,抑制凋亡。