KDM2B调控FAK信号通路在卵巢癌细胞骨架排列中的作用

目的分析组蛋白去甲基化酶(KDM2B)对卵巢癌细胞骨架排列中的调控作用,并探讨KDM2B作用的可能分子机制。方法以人卵巢癌细胞系HO8910为研究模型,采用慢病毒pLKO.1-puro-shRNA表达系统建立KDM2B稳定敲减细胞系(KDM2B敲减组);采用KDM2B慢病毒质粒包装慢病毒,并感染上述人卵巢癌细胞,建立KDM2B过表达细胞系(KDM2B过表达组),以感染慢病毒空载组的HO8910细胞作为对照组。RT-qPCR和western blot检测各组KDM2B mRNA及蛋白质的表达水平;F-actin荧光染色法检测卵巢癌细胞骨架排列变化;对照组及KDM2B敲减组进行转录组测序分析;RT-qPCR检测黏着斑激酶(FAK)通路上游基因ITGB1、ITGA6 mRNA的表达水平;免疫荧光染色试验检测FAK蛋白的表达水平;使用GEPIA肿瘤数据库分析FAK在卵巢癌组织样本中的表达水平,并分析FAK与KDM2B的相关性。结果RT-qPCR结果证实,与对照组相比,KDM2B敲减组KDM2B mRNA水平降低,KDM2B过表达组KDM2B mRNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);western blot结果表明,与对照组相比,KDM2B敲减组KDM2B蛋白水平下降,KDM2B过表达组KDM2B蛋白水平上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。F-actin荧光染色法结果证实,与对照组相比,KDM2B过表达组F-actin的表达量增加,排列显示相同且规则的方向,而KDM2B敲减组F-actin的表达量降低,且排列无序。转录组测序结果表明,KDM2B调控FAK信号通路。GEPIA肿瘤数据库分析结果显示,FAK在卵巢癌组织中的表达升高,且与KDM2B呈正相关(r=0.37,P<0.01)。结论KDM2B促进F-actin的表达,使卵巢癌细胞骨架排列更加规则有序,其作用机制与FAK通路激活有关。

Linc00462在胃癌患者组织及血清中的表达及临床意义

目的检测Linc00462在胃癌患者组织及血清中的表达水平,并分析其生物学功能,评价其作为胃癌筛查及预后判断的生物学标志物的可行性。方法收集80例胃癌患者的癌组织及配对癌旁组织标本,另收集48例胃癌患者及22例体检健康者血清标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组Linc00462的表达水平;Pearson相关检测分析Linc00462的表达与胃癌患者临床病理参数以及生存时间的相关性。采用shRNA敲减Linc00462,并采用生长曲线、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及基质胶侵袭试验分别检测胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。结果胃癌患者癌组织中Linc00462的表达水平显著高于配对癌旁组织(t=4.008,P<0.001);Linc00462的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小(χ^2=9.785,P=0.037)、分化程度(χ^2=4.467,P=0.037)、脉管癌栓(χ^2=13.745,P=0.004)及神经侵犯(χ^2=7.355,P=0.005)密切相关;高表达Linc00462患者的平均生存时间显著短于低表达者(中位生存时间:26.5个月vs 37个月)(χ^2=6.005,P=0.014)。胃癌患者血清Linc00462表达水平显著高于体检健康者(t=3.280,P<0.01),且与患者的肿瘤大小(χ^2=16.099,P=0.008)和分化程度(χ^2=16.335,P=0.006)相关。Linc00462敲减后,胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降。结论 Linc00462在胃癌患者组织和血清中表达升高,可作为胃癌筛查及预后判断的分子标志物。