神经突触结合蛋白Ⅰ-C2A区重组表达及其在心脏缺血-再灌注大鼠模型中的显像研究

目的 利用基因工程方法重组表达神经突触结合蛋白Ⅰ的C2A片段,探讨其在心肌细胞凋亡显像中的应用价值.方法 （1）将C2A基因连接到含有谷胱甘肽转移酶（GST）的重组原核表达载体pGEX-6P-1上,转化感受态细菌BL21,异内基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后纯化.（2）用异硫氰酸荧光素（FITC）标记纯化的蛋白,通过细胞结合实验鉴定蛋白质活性.（3）采用2-亚氨基噻吩方法,进行99TcmO-4标记C2A-GST融合蛋白,标记后的蛋白质用纸层析法测定其放化纯.（4）制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,通过尾静脉注射99Tcm-C2A-GST,1 h后用SPECT仪进行显像 显像结束后,处死大鼠,取出心肌,用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,分离缺血心肌和存活心肌,测质量及其放射性计数,比较缺血心肌与正常心肌每克组织百分注射剂量率（%ID/g）值之间差别.采用SPSS12.0软件行统计分析,数据间比较采用t检验.结果 （1）成功表达的C2A-GST蛋白,相对分子质量约为3.8×104.（2）荧光显微镜下观察FITC-C2A-GST具有结合凋亡细胞的功能.（3）标记后的99Tcm-C2A-GST放化纯为（98.90±0.43）%.（4）大鼠显像示缺血损伤心肌显影清晰,体外测定缺血心肌摄取99Tcm-C2A-GST为（2.41±0.32）%ID/g,对照组99Tcm-C2A-GST-N-羟基琥珀酰亚胺（C2A-GST-NHS）的摄取为（0.82±0.24）%ID/g,两者之间差别具有统计学意义（t=10.6,P＜0.01）.结论 通过基因工程方法重组神经突触膜蛋白Ⅰ的C2A区域,重组后其具有监测缺血-再灌注大鼠模型中的心肌凋亡的作用.