TFAP2A对肾小球硬化相关基因ADCK4转录调控机制的研究

目的探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域。方法生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系。JASPAR数据库预测ADCK4基因转录起始位点-464 bp/+206 bp区域包含TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A siRNA浓度分别为5、10、15µmol/L,TFAP2A过表达质粒质量浓度分别为50、100、300µg/L,通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对ADCK4基因启动子水平的调控作用。TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞,实时荧光定量PCR检测TFAP2A、ADCK4 mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测TFAP2A、ADCK4蛋白表达。染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与ADCK4启动子的特定区域结合。结果生物信息学分析显示FSGS肾组织中RNA-Seq RNA表达上调的基因273个,表达下调的基因219个;ADCK4与TFAP2A表达水平呈正相关(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15µmol/L的ADCK4启动子相对萤光素酶活性增强,TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300µg/L的ADCK4启动子萤光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组相比,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平升高;过表达实验中,与对照组比较,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。染色质免疫沉淀试验发现TFAP2A能与ADCK4启动子的特定区域结合。结论转录因子TFAP2A负向调控ADCK4基因表达,增加了调控足细胞重要基因的转录因子成员。

TFAP2A对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用观察

目的观察转录因子AP-2α(TFAP2A)对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用。方法基于GEO数据库及GEO Profiles数据集,比较肾透明细胞癌组织与正常肾组织中NPHS2、TFAP2A的表达差异。构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,预测NPHS2基因的-519 bp~+20 bp启动子区包含转录因子TFAP2A的结合位点。培养HEK-293T细胞,对照siRNA组转染control siRNA,实验组分别转染TFAP2A siRNA(浓度分别为5、10、15 pmol/µL)和TFAP2A过表达质粒(质量浓度分别为50、100、300 ng/mL),通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对NPHS2基因启动子水平的调控作用。将HEK-293T细胞分为对照组、干扰组及过表达组,分别转染con‐trol siRNA、TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒;采用荧光定量PCR检测TFAP2A、NPHS2 mRNA,采用Western blotting法检测NPHS2蛋白。结果肾透明细胞癌组织中TFAP2A、NPHS2表达低于正常肾组织。成功构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,NPHS2基因转录起始位点上游-519 bp~+20 bp区域包含两个TFAP2A转录因子结合位点。双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照siRNA组相比,转染5、10、15 pmol/µL TFAP2A siRNA的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性均增强,转染300 ng/mL TFAP2A过表达质粒的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性降低(P均<0.05)。干扰组NPHS2 mRNA及蛋白表达高于对照组,过表达组NPHS2 mRNA及蛋白表达低于对照组(P均<0.05)。结论NPHS2启动子-519 bp~+20 bp区域存在潜在的TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A可下调NPHS2的启动子活性、mRNA及蛋白表达。

PKD1抑制剂CID755673通过诱导线粒体功能障碍加重急性肾损伤

目的 探讨PKD1在急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)中的表达及其作用机制。方法 采用免疫组化法检测癌旁正常肾组织和AKI患者肾活检组织中以及顺铂(Cisplatin)处理的小鼠肾组织中PKD1的表达;体外培养小鼠肾小管上皮细胞(mouse proximal tubular epithelial cells, mPTC),应用qRT-PCR和Western blot法检测PKD1及凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平;运用流式细胞术检测细胞凋亡、线粒体膜电位及线粒体活性氧水平。结果 免疫组化检测:PKD1在AKI患者肾活检组织中的表达(4.07±0.994)明显高于癌旁正常肾组织(1.001±0.073,P=0.021 1);在Cisplatin诱导的小鼠AKI肾组织中也发现,与对照组(0.992±0.072)相比,AKI肾组织中PKD1表达水平明显上调(2.457±0.317,P=0.002 5);在mPTC中,与Cisplatin组比较,Cisplatin+CID组中Bax mRNA及蛋白表达增加(P<0.05)及Caspase-3活化水平升高(P=0.026),抗凋亡蛋白BCL-2 mRNA及蛋白水平则进一步下调(P<0.05)。流式细胞术实验:与Cisplatin组比较,Cisplatin+CID组细胞凋亡百分比(Cisplatin组为21.77±2.378、Cisplatin+CID组为43.01±2.796,P<0.000 1)及线粒体活性氧水平(Cisplatin组为1.562±0.023、Cisplatin+CID组为1.957±0.088,P=0.002)进一步增加;而线粒体膜电位水平进一步降低(Cisplatin组为0.725 7±0.163、Cisplatin+CID组为0.46±0.026,P=0.043)。结论 PKD1在AKI损伤中显著上调,抑制PKD1明显加重Cisplatin诱导的AKI,其有望成为防治AKI的新靶点。

蛋白激酶D在急性肾损伤中的表达及作用研究

目的探讨蛋白激酶D(PKD)在急性肾损伤(AKI)小鼠肾脏中的表达和影响。方法取27只C57/B6J小鼠随机分为3组:对照组、顺铂(Cisplatin)组和Cisplatin+CID755673(CID)组,腹腔注射顺铂诱导AKI模型,造模后72 h处死小鼠收集肾组织及血清。另取23只C57/B6J小鼠随机分为3组:假手术(Sham)组、双侧肾缺血再灌注(BIR)组和BIR+CID组,夹闭双侧肾蒂30 min诱导AKI模型,造模后24 h处死小鼠收集肾组织及血清。免疫组化染色检测肾组织PKD表达。测定小鼠血清肌酐和尿素氮(BUN)浓度,取肾脏组织行PAS染色,评估肾脏功能。实时定量PCR检测PKD、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)、凋亡相关基因(Bax)、凋亡效应蛋白(caspase-3)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达水平。免疫印迹法检测PKD、NGAL、KIM-1、Bax及活化的caspase3蛋白表达。结果顺铂处理及缺血/再灌注诱导后,AKI小鼠肾组织中PKD的表达较对照组显著增加(P<0.05)。抑制PKD显著加重顺铂和缺血/再灌注诱导的AKI小鼠的肾功能障碍和肾小管上皮细胞损伤,加重肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应。结论PKD在AKI小鼠肾脏中显著上调,抑制PKD可显著加重肾损伤,为防治AKI提供了新的治疗靶点。

儿童过敏性紫癜血清sTREM1和sTLT1的水平及意义

目的:检测过敏性紫癜(Henoch-Sch?nlein purpura,HSP)患儿外周血可溶性髓样细胞表达触发受体1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells 1,sTREM1)和可溶性髓样细胞表达触发受体样转录物1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1,sTLT1)的水平,探讨sTREM1和sTLT1在HSP患儿中的临床意义。方法:选取HSP患儿102例和正常儿童50例作为研究对象,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清sTREM1和sTLT1的水平。结果:HSP患儿sTREM1阳性率77.45%高于对照组20.00%(P<0.05);肾型HSP患儿sTREM1的检出率高于皮肤型。HSP患儿血清sTLT1水平[(98.57±24.72)ng/mL]高于对照儿童[(62.84±22.74)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05);关节型、腹型及混合型HSP的sTLT1水平高于皮肤型(P均<0.05)。sTREM1检出组的IgA、白细胞、血小板高于sTREM1未检出组,差异有统计学意义(P均<0.05)。sTLT1与血小板呈正相关(r=0.389,P<0.05)。结论:sTREM1和sTLT1可能参与了儿童HSP的发病,可作为儿童HSP炎症和病情严重度的标志物。

红霉素和阿奇霉素序贯治疗小儿肺炎支原体肺炎的临床疗效

目的探究红霉素与阿奇霉素序贯治疗小儿肺炎支原体肺炎的临床效果.方法将2017年5月至2018年6月我院收治的72例小儿肺炎支原体肺炎患儿分为观察组和对照组.采用常规疗法+阿奇霉素对对照组患儿进行治疗,采用红霉素与阿奇霉素序贯疗法对观察组患儿进行治疗.治疗结束后对比两组患儿肿瘤坏死因子-α(TNF-仅)水平、临床疗效、临床症状改善情况、不良反应发生情况.结果两组患儿不良反应发生率相比差异无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,观察组平均止咳时间、退热时间、住院时间均较短,治疗总有效率较高,血清TNF-α水平较低(P<0.05).结论采用红霉素与阿奇霉素序贯疗法对小儿肺炎支原体肺炎患儿进行治疗可有效改善其临床症状,降低血清TNF-α水平.

医护一体化延续性护理干预对过敏性紫癜患儿遵医行为及复发的影响

目的探讨医护一体化延续性护理干预在过敏性紫癜(HSP)患儿中的应用效果。方法74例HSP患儿随机分为两组各37例,对照组给予常规护理,观察组在对照组基础上实施医护一体化延续性护理干预。比较两组的康复情况、遵医行为、复发率。结果观察组出院3个月后的遵医行为评分高于对照组,腹痛缓解时间、关节疼痛缓解时间及紫癜消失时间短于对照组,疾病复发率低于对照组(P<0.05)。结论医护一体化延续性护理干预可改善HSP患儿的遵医行为,促进康复,降低复发风险。

临床路径护理对轮状病毒性肠炎患儿临床症状及生活质量的影响

目的研究临床路径护理对轮状病毒性肠炎患儿临床症状及生活质量的影响。方法选择2018年2月至2019年1月我院收治的80例轮状病毒性肠炎患儿,随机分为两组各40例。对照组患儿采取常规护理,观察组患儿采取临床路径护理。比较两组患儿的临床症状消失时间及生活质量。结果观察组患儿的退热、止吐、止泻以及住院时间均显著短于对照组(P<0.05)。观察组的健康调查简表(SF-36量表)各维度评分均显著高于对照组(P<0.05)。结论临床路径护理可缩短轮状病毒性肠炎患儿的临床症状消失时间,提高患儿的生活质量。

小儿肺热清颗粒治疗小儿肺炎支原体肺炎的临床疗效及其对炎性因子的影响

目的探讨小儿肺热清颗粒治疗小儿肺炎支原体肺炎(MPP)的临床疗效及其对炎性因子的影响。方法肺炎支原体肺炎患儿110例,根据随机数字表法分为对照组与试验组,各55例。对照组给予阿奇霉素干混悬剂治疗,第1天根据体质量10 mg·kg^(-1),qd,总剂量<0.5 g·d^(-1),第2~5天根据体质量5 mg·kg^(-1),qd,总剂量<0.25 g·d^(-1),第6~7天停药;试验组在对照组基础上加服小儿肺热清颗粒,po,1~3岁,每次4 g;3~7岁,每次6 g;7~8岁,每次8 g,tid,服5 d,停2 d。7 d为1个疗程,共治疗2个疗程。比较2组临床疗效,外周血炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)及C反应蛋白(CRP)治疗前后变化情况。结果治疗后对照组和试验组临床疗效显效的总有效率分别为72.73%和96.36%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后对照组和试验组IL-6的水平分别为(15.92±0.90)和(10.04±1.35)ng·L^(-1),IL-10的水平分别为(34.45±4.90)和(31.55±2.50)ng·L^(-1),CRP的水平分别为(8.27±2.73)和(7.46±1.04)mg·L^(-1),对照组IL-6、IL-10与CRP水平均高于试验组(均P<0.05)。结论小儿肺热清颗粒治疗小儿MPP可显著改善临床症状,减轻炎性反应,提高机体免疫力。

D-二聚体及细胞因子IL-8、IL-10、IL-2在儿童重症支原体肺炎并发胸腔积液的诊断和预后价值探讨

观察儿童重症支原体肺炎并发胸腔积液的诊断和预后评估中,D-二聚体及细胞因子白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)、白介素-2(IL-2)、检验的价值。方法 回顾性分析我院于2020年12月10日至2022年5月31日收治的122例重症肺炎支原体肺炎患儿为研究对象,根据患儿是否合并胸腔积液分为对照组(未合并胸腔积液者)、观察组(合并胸腔积液者),均行D-二聚体及细胞因子IL-8、IL-10、IL-2检查,持续跟踪观察组患儿的预后情况,观察D-二聚体、细胞因子IL-8、IL-10及IL-2对预后及诊断的价值。结果 (1)病情判断:①观察组D-二聚体、IL-8、IL-10水平较之对照组更高,观察组IL-2水平较之对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。②D-二聚体、IL-2、IL-8及IL-10单一指标诊断重症支原体肺炎并发胸腔积液约登指数、灵敏度、特异度、符合率较高。(2)预测预后:观察组预后不良者D-二聚体、IL-8较之预后良好者更高,观察组预后不良者IL-2较之预后良好者更低,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良者、预后良好者IL-10水平比较无差异(P>0.05)。结论 儿童重症支原体肺炎并发胸腔积液诊断与预后评估中,可通过分析D-二聚体、IL-8、IL-10、 IL-2水平进行分析预测,具有较高价值。