基于吡咯环系的新型c-Met抑制剂的设计、合成与生物活性研究

基于Ⅱ型c-Met抑制剂的结合模式和骨架跃迁的策略,设计、合成了两类含吡咯环系的新型c-Met激酶抑制剂.目标化合物的结构经核磁共振氢谱、质谱和高效液相色谱予以确证.生化水平的活性筛选显示化合物9a～9c对c-Met激酶均表现出良好的抑制活性,IC50小于2.1μM;化合物9a还对VEGFR-2和c-kit等激酶均表现显示出良好的抑制活性,IC50小于8.0μM.细胞水平的活性测试进一步验证了化合物9a对c-Met靶点的抑制活性.已有结果表明,吡咯衍生物9a具有作为活性骨架开展后续改造的良好潜力.

内生真菌Colletotrichum sp. B501的寡糖提取物对黄花蒿发根中青蒿素生物合成的诱导(英文)

在黄花蒿 (ArtemisiaannuaL .)发根液体培养中 ,黄花蒿内生炭疽菌 (Colletotrichumsp .B5 0 1)细胞壁寡糖提取物可促进发根青蒿素的合成。经寡糖诱导子 (2 0mg/L)处理 4d后 ,发根青蒿素含量达 1.15mg/g ,比对照高出6 4 .2 9%。诱导作用与诱导子浓度、作用时间相关。诱导处理 1d后 ,X射线能谱分析表明黄花蒿发根细胞中Ca2 + 积累量显著增高 ,电镜观察发现液泡内出现高电子致密物 ,具活性氧清除作用的过氧化物酶表现出高活性 (6 .5unit·min-1·g-1FW)。诱导处理第三天 ,细胞核DNA呈梯度条带降解 ,部分细胞出现程序化死亡。内生菌细胞壁寡糖提取物引起的生理反应有利于细胞中青蒿素的生物合成。

胶束形成前十二烷基硫酸钠与天青A变色机理的研究

应用光谱探针技术研究了胶束形成前十二烷基硫酸钠(SDS)与天青A(AA)相互作用的吸收光谱,比较了SDS和硫酸软骨素(CS)与AA相互作用的光谱曲线,考察了乙醇和NaCl对SDS-AA复合物吸收光谱的影响,对胶束形成前SDS与AA变色反应的机理进行了研究。研究结果表明,SDS-AA反应体系呈现蓝色→紫红色→蓝色的颜色变化,主要是由于SDS有序集合体中结合态AA分子定向聚集,形成聚集体的程度不同所造成的。依据cSDS和ΔA498/ΔcSDS的关系,确定了SDS水溶液的临界预胶束浓度(critical premicelle concentration,CPC),其数值为1.0×10-4mol·L-1。

海洋微生物:新天然药物的重要源泉

本文从兼具材料稀有性、结构新颖性、功能独特性和药源可供性四种特性出发,对海洋微生物可作为新天然药物的重要资源进行了剖析,并对海洋微生物的关键共性问题进行深入探讨。

植物内生菌研究新进展

Recent advances on the biodiversity, ecological roles, and functional metabolites of endophytes were summarized with some speculative comments for better understanding of this subject.

芦荟多糖的纯化工艺与体外抗肿瘤活性

目的:研究芦荟多糖的提取、纯化工艺及体外抗肿瘤活性,为芦荟的产业化开发提供实验依据。方法:采用水提醇沉,三氯乙酸法除蛋白,DEAE-52离子交换色谱分离。用Sephacryl S-400凝胶柱层析纯化并确定芦荟多糖的相对分子量,HPLC法检测纯度,GC法鉴别单糖组成及分子摩尔比。以MTT法观察其体外抗肿瘤活性等。结果:从中华芦荟(Aloe vera L.var. chinesis(Haw.)Berger.)凝胶冻干粉中提取分离得到纯多糖AVP,经HPLC检测为单一对称峰,相对分子量为86000,由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为10.3∶1.0。AVP对人肝癌细胞(SMMC-7721)、人胃癌细胞(BGC-823)及人肺癌细胞(A549)的增殖均有抑制作用。结论:该法分离的芦荟多糖AVP纯度好,收率高达3.6%,可用于进一步的研究和开发,提高芦荟的资源利用率。

透明质酸与天青A空间定向相互作用机理

采用光谱探针技术分析研究了天青A(AA)与透明质酸(HA)相互作用的吸收光谱,运用光谱法考察了AA/HA摩尔比、羟丙基-β-环糊精、乙醇、Triton X-100、pH以及NaCl对AA和HA反应体系的影响.测得HA对AA的最大结合数N=3.22×103,结合常数K=2.86×106,并且建立了AA与HA大分子空间定向相互作用的实验研究模型.实验结果表明,AA与HA相互作用产生的变色反应,不仅与AA和HA分子间的静电相互作用有关,而且还与HA大分子上结合态AA的密度有关.HA大分子上结合态AA分子间的疏水相互作用是形成550 nm吸收峰以及产生变色反应的主要原因.

中华芦荟酸性多糖的分离纯化与抗炎活性

目的:拟检测分析中华芦荟中可能存在的酸性多糖并初步探究其抗炎活性。方法:以中华芦荟为原料,采用热水提取、三氯乙酸法除蛋白、DEAE-52离子交换色谱经NaCl洗脱得到芦荟酸性多糖。用Sephacryl S-400凝胶柱色谱法进一步纯化,HPLC判断其纯度及相对分子量,用紫外、红外、薄层层析和气相色谱分析鉴定其结构组成。用二甲苯致小鼠耳肿胀模型检测其抗炎活性。结果:从芦荟叶片中分离得到一种纯酸性多糖APS-2,相对分子量为1.3×106Da。单糖组成为葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖和葡萄糖醛酸,它们以1→3和1→6糖苷键连接。从其分子量、单糖组成与连接方式可判断出APS-2为新多糖,且对二甲苯所致的小鼠耳肿胀有明显的缓解作用。结论:从中华芦荟中分离得到的新酸性多糖APS-2有较好的抗炎活性,此发现为该芦荟的深入开发利用提供了有价值的依据。

促进黄花蒿发根青蒿素合成的内生真菌诱导子的制备

应用酸解法对黄花蒿(ArtemisiaannuaL.)内生胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)菌丝体进行提取,在黄花蒿发根培养系统中比较了各制备提取物的青蒿素诱导活性。活性提取物经过SephadexG25层析后,部分纯化的内生菌寡糖提取物(MW<2500)可显著促进发根青蒿素的合成,培养23d的发根经诱导子(0.4mg/mL)处理4d后,青蒿素产量可达13.51mg/L,比同期对照产量提高51.63%,诱导作用与诱导子浓度、作用时间相关。内生菌寡糖诱导子的制备和使用,在青蒿素生物技术生产研究中为首次应用。

贯叶连翘中的新抗真菌黄酮苷(英文)

从贯叶连翘 (HypericumperforatumL .)地上部分的 80 %乙醇提取物中分离得到 1个新的黄酮苷和 6个已知黄酮类化合物。采用红外光谱、紫外光谱、质谱和核磁共振光谱等波谱技术测得新黄酮苷的结构为 6″_O_乙酰基槲皮素_3_O_β_D_阿洛糖苷 (1 ,6″_O_acetylquercetin 3_O_β_D_alloside) ,6个已知化合物分别被鉴定为槲皮苷 (quercitrin)、金丝桃苷 (hyperoside)、蓄苷 (avicularin)、芦丁 (rutin)、槲皮素 (quercetin)和山萘酚 (kaemferol)。体外抗真菌活性实验表明 ,新黄酮苷 (1 )、槲皮苷和槲皮素对植物病原菌HelminthosporiumsativumPamelKingetBakke具有一定的抑制作用 ,三者的最小抑制浓度 (MIC)分别为 :2 5、5 0和 5 0 μg/mL。另外 ,1和槲皮苷对禾赤色镰孢霉 (FusariumgraminearumSchw .)的生长也有抑制作用 (MIC值均为 1 0 0 μg/mL)。

新骨架免疫抑制剂产生菌IFB-TL01的鉴定

目的鉴定1株产新骨架免疫抑制剂的大刀螳螂肠道真菌IFB-TL01。方法根据菌株形态特征、ITS序列进行分析、鉴定,利用Microstation BIOLOG微生物鉴定系统评价生理生化特征。结果该菌具有典型多节孢菌特征(Nodulisporium-like)的无性产孢结构,ITS序列与光轮层炭壳菌(Daldinia eschscholzii)同源性最高,相似度达99%,生理生化测试结果与光轮层炭壳菌相符。结论菌株IFB-TL01属于炭球菌属,与该属光轮层炭壳种最为接近。

1株能产生抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108的鉴定

目的鉴定1株能产抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108。方法根据菌株形态特征、生理生化特性、部分核糖体序列进行分析、鉴定。结果该菌株为草茎点霉(Phoma herbarum)。结论形态加分子指纹法进行真菌分类鉴定是1种可靠、快速的鉴定方法。

黄花蒿种质资源的RAPD分析

目的研究青蒿素高产的黄花蒿植株的遗传多样性特征。方法结合青蒿素量的测定,应用RAPD技术对10个产地黄花蒿进行遗传多样性分析。结果发现RAPD多态位点为53.6%,证明在黄花蒿野生群体中存在较丰富的遗传多样性。UPGMA分析表明:在黄花蒿中可能至少存在具有遗传分化的4个分支,黄花蒿遗传分化与青蒿素量的变化及地理分布有一定的相关性。结论黄花蒿具有明显的遗传分化,这些遗传分化是黄花蒿种质资源筛选的关键,是青蒿素“高量育种”和生物技术开发的基础。

枸骨内生真菌IFB-GLP-4的鉴定

从药用植物枸骨中分离到一株具有抗芽孢杆菌活性且能产生新骨架化合物的内生真菌,该菌命名为IFB-GLP-4,综合运用形态学和分子生物学方法对该菌进行分类鉴定,确定其为子囊菌亚门(Ascomycotina),腔菌纲(Loculoascomycetes),座囊菌(Dothideales),球座菌属(Guignardia),芒果球座菌(Guignardia mangiferae)。

Actin启动子的克隆及海洋丝状真菌Phoma herbarum YS4108的遗传转化(英文)

目的:建立一种简便有效的海洋丝状真菌Phoma herbarum YS4108的转基因方法。方法:用简并引物扩增和染色体步行克隆P.herbarum YS4108的actin启动子,以潮霉素抗性基因为选择标记,用部分原生质体化的单细胞进行电转化并摸索最佳电转化参数。结果:成功获得了actin启动子序列,并确定了最佳电转化参数:电压0.75kV(0.2cm电转化杯),电阻400?,载体DNA用量为9μg。在此条件下可获得多于100个转化子/电转化杯(106细胞)。结论:内源性的actin启动子可用于P.herbarum YS4108的电转化,该方法可用于P.herbarum的转基因研究。

海洋真菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法（ELISA）以检测海洋真菌多糖YS4108发酵过程中抗肿瘤多糖（YCP）的含量。方法以CDAP（1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐）为交联剂制备YCP-BSA偶联产物，利用该偶联产物为包被抗原，YCP为竞争抗原，两者与定量的YCP-McAb反应，建立检测YCP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为2．5mg/L，最佳单抗工作浓度为1：5000，HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1：4000。得到回归方程lg（B／B0％）=-0．1718lgCYCP＋1．9638，r=0．9916，可测量最适范围为1～1000μg／L，最小检测量为0．1μg／L，批内和批间RSD分别小于5．45％和8．37％。结论建立了快速测定YCP含量的间接竞争ELISA法。

黄花蒿内生菌Myrothecium roridum IFB-E091产生的一个新吲哚衍生物

从黄花蒿内生菌Myrothecium roridum IFB-E091固体发酵产物中分离获得3个化合物,分别被鉴定为:(S)-(-)-N-[2-(3-Hydroxy-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl)-ethyl]-acetamide(1)、N-(4-hydroxyphenethyl)acetamide(2)和asperfumoid(3),其中化合物1为新吲哚衍生物。体外细胞毒活性测定表明,化合物1对人肝癌细胞SMMC-7721和人宫颈癌细胞He La没有明显的抑制活性。

山麻黄内生菌Myrothecium roridum LLY的化学成分及其体外细胞毒活性研究

目的研究山麻黄Ephedra equisetina内生真菌Myrothecium roridum LLY固体发酵产物的化学成分,并进行体外细胞毒活性研究。方法采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱法进行分离纯化,利用高分辨质谱、核磁共振谱等方法鉴定化合物的结构。MTT法进行化合物体外细胞毒活性筛选,并采用流式细胞术和Western blotting法进行化合物细胞毒活性机制初步研究。结果从M.roridum LLY固体发酵产物中分离得到9个化合物,分别鉴定为吩嗪-1-羧酸(1)、1-甲氧基吩嗪(2)、N-methyl-1H-indole-2-carboxamaide(3)、甲基硫赭曲菌素(4)、ditryptophenaline(5)、7,8-二甲基异咯嗪(6)、deoxyleporin B(7)、尿嘧啶(8)和胸腺嘧啶(9)。MTT测定发现,化合物3对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖具有一定的抑制活性,其IC50值为38.0μg/m L,阳性对照顺铂的IC_(50)值为11.5μg/m L。细胞周期分析发现,化合物3可导致SMMC-7721细胞S期阻滞;Western blotting分析发现,化合物3可使SMMC-7721细胞中细胞周期负调控蛋白p27的表达上调,并且Cleaved-PARP蛋白被明显活化。结论化合物7为1个新的天然产物。化合物3能诱导SMMC-7721细胞凋亡;其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与S期细胞周期阻滞相关,并受到p27蛋白的调控。

白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin Fex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A(4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D(6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物7为首次从毛壳菌中分离得到。采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物1,3,4,5对人宫颈癌细胞株He La具有明显的抑制活性,IC50分别为99.43,23.77,97.92,86.25μmol·L^(-1),而阳性对照药顺铂的IC50为24.33μmol·L^(-1)。

海洋放线菌Streptomyces sp.WQ-2化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对海洋放线菌Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,并利用质谱、核磁共振谱及文献比对方法鉴定化合物的结构。结果表明:从Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物中分离得到5个化合物,分别被鉴定为D-阿洛醇(1)、胡萝卜苷(2)、5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid(3)、麦角甾醇(4)和lumichrome(5)。其中,化合物1、3和5首次从Streptomyces sp.发酵产物中分离获得。