人穿孔素羧基端肽段的表达纯化与活性鉴定

穿孔素 ,即成孔蛋白 (poreformingprotein ,PFP) ,其溶细胞作用与免疫调节和自身免疫病以及其它多种疾病过程中的免疫性病理损伤相关 .为得到足够量的PFP建立与之相关的免疫学研究手段用于基础和临床研究 ,在已克隆人PFPcDNA的基础上 ,用基因工程方法表达了人PFPC端 12 4个氨基酸肽段 (hPFP C) ,并通过谷胱甘肽琼脂糖亲和层析获得纯化的GST/hPFP C融合蛋白 ,经凝血酶酶切和再次亲和层析去除GST部分 ,得到了纯化的hPFP C蛋白 .纯化的hPFP C蛋白与兔红细胞共育 ,呈现钙依赖的溶血活性 .

氧化低密度和极低密度脂蛋白对鼠腹腔巨噬细胞的增殖作用

巨噬细胞源性泡沫细胞增殖在动脉粥样硬化 (As)的形成过程中起重要作用 .用形态学、细胞计数、MTT掺入法和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷 ( 3H TdR)掺入实验观察比较了氧化修饰脂蛋白 (Ox LDL ,Ox VLDL)和相应的天然型脂蛋白对培养的鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响 .结果发现 ,Ox LDL和Ox VLDL均能显著刺激巨噬细胞内DNA合成增加促进细胞增殖 (与天然脂蛋白相比 ,P <0 .0 0 1) ,其中Ox VLDL的作用最为明显 (与Ox LDL相比P <0 .0 5) ;低浓度的氧化型脂蛋白 (蛋白浓度 0～ 5mg/L)促巨噬细胞呈剂量依赖性增殖 ,浓度为 5mg/L时 ,达到最高峰 ,随着浓度的进一步增加 ,促增殖作用逐渐减弱 ;而天然LDL及VLDL不能促进巨噬细胞增殖 .上述结果表明 ,与Ox LDL相似 ,Ox VLDL促进巨噬细胞增殖可能是其致As的机制之一 .

Id3启动子/荧光素酶基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的活性表达

用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增小鼠Ida（mId3）基因5’端含启动子序列的不同长度的DNA片段（mId3-pf）亚克隆至荧光索酶（Luc）报道基因载体PGV-B2，构建由mid3基因启动子片段控制的Luc报道基因重组载体mid3-pf／PGV—B2．用电穿孔术将mId3-pf／PGV-B2导人培养的WEHI-231细胞，用抗小鼠IgM抗体刺激转染后的WEHI-231细胞，24h后测定胞内Luc活性．结果表明，4种Luc报道基因重组载体转染细胞均表现较高的mId3启动子活性，与空载体转染细胞相比，启动子活性分别升高25-60倍．抗IgM抗体刺激细胞后，Id3启动子活性较未刺激细胞均呈明显增高趋势，增高幅度可达2倍左右．表明抗IgM抗体诱导WEHI231细胞Id3的上调表达与Id3转录活性的升高有关．

生理浓度抗氧化剂对高密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

观察、比较了生理浓度VitC、VitE和白蛋白对体外Cu2+氧化高密度脂蛋白(HDL)的抑制能力.在体外Cu2+氧化HDL的反应体系中,同时加入生理浓度的VitC、VitE或白蛋白,通过检测硫代巴比妥酸值(TBARS)和氧化延滞时间的变化,分析3种抗氧化剂对HDL氧化的抑制作用.结果发现,3种抗氧化剂均明显降低HDL的脂质过氧化程度,延长氧化延滞时间,其中以白蛋白作用最为显著.结果提示白蛋白是比VitC和VitE更强的HDL抗氧化剂.

重组人钙调素的表达及其McAb的制备与精子CaM定位

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ，并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，用常规细胞融合技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ），得到３株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞．间接ＥＬＩＳＡ和斑点免疫结果证实，三种单克隆抗体均与自制的ｒｈＣａＭ和ＣａＭ标准品起特异反应．用免疫组化法对精子中ＣａＭ定位，发现ＣａＭ主要分布于精子头颈部，不育组ＣａＭ＋精子率（（４５．０±７．５）％）显著低于生育组（（６８．５±１０．５）％）．

早孕妇女蜕膜中淋巴细胞抗原的分析

检测早孕蜕膜中淋巴细胞抗原的表达。以几种抗淋巴细胞表面标志的单克隆抗体，采用花环标记、碱磷酶抗碱磷酶（ＡＰＡＡＰ）法，对２３例早孕蜕膜组织中的淋巴细胞进行测定。早孕蜕膜淋巴细胞中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ１６＋及Ｂ细胞百分率（ｘ±ｓ）分别为２９．５２±６．８０％、２３．６０±４．８０％、２０．９１±４．０６％、１．０７±１．００％、７．８１±２．５６％，ＣＤ４／ＣＤ８为１．２±０．２，ＣＤ３－淋巴细胞呈大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）形态。早孕蜕膜中存在较多ＣＤ３－、ＣＤ１６－形态呈ＬＧＬ的ＮＫ细胞，ＣＤ４＋细胞与ＣＤ８＋细胞的比值较正常外周血明显降低。