三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备与优化

目的研制N-乙酰化酶2（NAT2）基因分型芯片，以快速、准确检测患者的NAT2单核苷酸基因多态性。方法设计并合成中国人中常见的NAT2酶基因5个突变位点的探针对和包含5个突变位点的两对引物；样本经PCR扩增后，采用丙烯酰胺点样液制备芯片，并与TEMED反应固化芯片；分别用探针与芯片杂交，采用博奥晶芯LUXSCAN10K微阵列芯片扫描仪分析结果。结果优化了PCR扩增条件，使两组PCR在相同条件下扩增；优化了芯片制备及杂交条件，双链DNA采用碱变性，清除非特异键合采用电泳方法；建立了NAT2酶基因分型标准：信号强度Cy3：Cy5≥5为野生型，Cy3：Cy5为0．6～1．5时为杂合子，Cy3：Cy5≤0．2为突变型；对20例标本的基因分型结果采用直接测序法进行验证，结果均一致。结论三维凝胶NAT2基因点突变分型芯片法是一种特异性强、高通量的NAT2基因分型方法，适用于临床快速基因分型，指导相关药物合理使用。