驱动蛋白家族成员15(KIF15)对肝细胞癌增殖能力的影响及其作用机制

目的探究驱动蛋白家族成员15(KIF15)对肝细胞癌(HCC)增殖能力的影响及其作用机制。方法通过分析TCGA和GEPIA数据集确定KIF15在HCC中的表达情况以及对肿瘤分期、生存的影响。采用qRT-PCR和Western Blot检测体外培养的人源HCC细胞系(HepG2、Hep3B、MHCC-97H和LM3)与人正常肝细胞系L02细胞的KIF15表达水平,并选择Hep3B和HepG2进行后续研究。通过对Hep3B慢病毒转染sh-NC/sh-KIF15和对HepG2慢病毒转染LV-vector/LV-KIF15进行CCK-8、平板克隆和EdU染色实验评估细胞的活力和增殖能力。GSEA分析KIF15与HCC相关的作用信号通路并通过Western Blot进行检测。计量资料两组间比较采用成组t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果TCGA和GEPIA数据集分析结果显示KIF15在HCC患者癌组织中的表达明显高于正常组织,并且KIF15与HCC分期成正比,KIF15高表达的HCC患者的生存更差。与sh-NC-Hep3B相比,sh3-Hep3B的KIF15 mRNA水平和蛋白水平均下降(P值均<0.05);与sh-NC-Hep3B相比,sh3-Hep3B的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率均显著降低(P值均<0.05)。与vectorHepG2相比,LV-KIF15-HepG2的KIF15 mRNA水平和蛋白水平均升高(P值均<0.05);与vector-HepG2相比,LV-KIF15-HepG2的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率均提高(P值均<0.05)。皮下瘤实验结果显示:与sh-NC-Hep3B相比,sh3-Hep3B的瘤体积和瘤重量降低;Ki67的组化评分降低,而TUNEL的组化评分提高(P值均<0.05)。GSEA分析显示在HCC中PI3K/AKT/mTOR通路与KIF15呈正相关(NES=1.59,P<0.001),Western Blot检测发现LY294002能够抑制LV-KIF15-HepG2中上调的PI3K/AKT/mTOR通路,与LV-KIF15-HepG2相比,LY294002+LV-KIF15-HepG2的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率降低(P值均<0.05)。结论KIF15通过上调PI3K/AKT/mTOR信号通路增强HCC的活力和增殖能力。

抗TL1A单克隆抗体通过影响巨噬细胞极化减轻结节病肉芽肿形成的机制研究

目的 探讨抗TL1A单克隆抗体是否可通过影响结节病中巨噬细胞的极化水平,减轻结节病肉芽肿的形成。方法 采用随机分组法将32只C57BL/6小鼠分成空白对照组、结节病组、结节病+TL1A Ab治疗组和结节病+地塞米松治疗组(n=8)。通过肺组织病理学染色(HE染色)观察各组小鼠肺部肉芽肿的形成;通过流式细胞术检测各组小鼠脾脏单个核细胞(PBMC)中M1/M2型巨噬细胞的水平。提取各组小鼠股骨和胫骨内的原代骨髓源性巨噬细胞(BMDM),培养并分别诱导各组BMDM向M1或M2型巨噬细胞方向分化,使用流式细胞术与qPCR分别测定各组小鼠BMDM中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的细胞数目和相关因子的mRNA表达情况。结果 与结节病组相比,结节病+TL1A Ab组小鼠肺组织中肉芽肿的数目明显减少(P<0.001)。相较于空白对照组,结节病组PBMC中M1型巨噬细胞水平增高(P<0.001),给予TL1A Ab后可逆转这一现象(P<0.001);结节病+TL1A Ab组PBMC中M2型巨噬细胞的水平高于结节病组(P<0.001)。各组小鼠BMDM经诱导分化后,结节病+TL1A Ab组M1型巨噬细胞极化水平较结节病组下降(P<0.001);而TL1A Ab组M2型巨噬细胞极化水平高于结节病组(P<0.001)。结论 抗TL1A单克隆抗体通过调控结节病中巨噬细胞的极化水平而抑制结节病中的肉芽肿性炎。

表观遗传干预重振Klotho抗肾脏纤维化

肾脏纤维化是慢性肾脏病的特征性病理改变,临床缺乏有效治疗措施。肾脏特异抗衰老蛋白Klotho具有显著的抗肾脏纤维化作用,但在肾脏纤维化发生发展中受异常表观遗传修饰影响而持续下调,是防治肾脏纤维化的关键潜在靶点。笔者针对靶向干预Klotho缺失抗肾脏纤维化进行了一系列研究,首先确定了转化生长因子β(TGFβ)是导致肾脏纤维化Klotho下调的主要致病因子:TGF-β通过抑制miR-152和miR-30诱导DNA甲基化酶1/3a异常高表达,继而导致Klotho启动子超甲基化和Klotho沉默。接着发现中草药成分大黄酸和去乙酰化酶3(HDAC3)抑制剂能够分别通过抑制异常表达的DNA甲基化酶1/3a,缓解Klotho启动子超甲基化,及促进PPARγ240/265赖氨酸位点乙酰化修饰强化对Klotho的正向调控作用,进而恢复Klotho蛋白水平,并有效缓解肾脏纤维化及相关的慢性肾脏病和骨质病理损害。最终研究揭示了肾脏纤维化Klotho下调的表观遗传特征和有效干预策略,为重振Klotho治疗肾脏纤维化及相关疾病提供了新的设计思路。

肠道菌群与1型糖尿病一级预防的研究进展

T1DM是T细胞介导的胰岛β细胞特异性自身免疫疾病。借助胰岛自身抗体检测和遗传风险评估,可识别T1DM一级预防重要窗口期。肠道作为人体和环境交流的主要界面,是管控的重要关口。肠菌失调可引起肠黏膜屏障功能受损,诱发胰岛自身免疫反应。识别肠致病菌或检测肠菌效应分子表达,可筛查T1DM高危人群。本文综述肠道菌群与T1DM一级预防的研究进展。