体外标记内皮祖细胞小鼠缺血性脑梗死模型局部移植后向病灶侧迁移的MRI实验研究

目的探讨多聚左旋赖氨酸(PLL)与超顺磁性氧化铁纳米微粒(Feridex)的复合物(SPIO-PLL)体外标记骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的可行性,观察标记细胞脑内移植至小鼠缺血性脑梗死模型后的迁移情况。方法体视显微镜下线栓小鼠右侧大脑中动脉制备缺血性脑梗死模型30只,随机分成缺血对照组(6只)、生理盐水移植组(6只)、磁性标记EPCs移植组(12只)和未标记EPCs移植组(6只),采用立体定向方法进行脑内移植。对移植后小鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,MR在体观察EPCs的迁移情况,普鲁氏蓝检测EPCs的分布。结果移植后1周神经系统行为学评分显示移植组动物改善不明显,磁性标记EPCs脑内移植后1周MR T2WI、GRE-T2*WI显示移植区低信号改变并沿胼胝体向病灶侧迁移,普鲁氏蓝染色示部分移植的标记细胞沿胼胝体向损伤侧迁移。结论移植EPCs短期内不能有效地促进缺血性小鼠神经行为功能的恢复,SPIO-PLL标记能够在体评价细胞移植后的脑内迁移。

小鼠缺血性脑梗死模型的制作及7TMR成像的实验研究

目的线栓法制作小鼠缺血性脑梗死模型,小动物专用高场MR(7T)观察其不同时间段成像特点。方法线栓法制作小鼠脑梗死模型30只,术前及术后不同时间应用MR进行扫描,以出现神经症状及弥散加权像(DWI)高信号判断为模型成功,并将MR影像与病理切片对照分析。结果模型成功率为90%(27/30,1只术中死亡,2只未见明显病灶);DWI于术后40min即可见高信号区,范围随时间延长而扩大,6h后T2加权像(T2WI)出现高信号改变,T1WI相应区域脑组织肿胀,表现为稍低信号;12h内T2WI高信号区域面积较DWI高信号区域面积小(P<0.05);病理TCC染色证实病变区为梗死区,该区域细胞溶解。结论线栓法制作小鼠缺血性脑梗死模型稳定可行,7T MR扫描反映脑组织改变具有高度的敏感性及特异性,与病理具有良好的一致性,为脑梗死范围的评价、后期治疗评价提供实验基础。

肝门部胆管癌非手术治疗的研究进展及现状

肝门部胆管癌虽然发生率低,但预后较差,易复发,外科手术是目前唯一的治愈手段。虽然部分患者可以早期发现,手术根治,但多数患者被确诊时已属晚期,失去根治性手术治疗机会,非手术治疗可以缓解患者临床症状,降低并发症,甚至可以为手术治疗进行前期准备。非手术治疗包括非手术胆汁引流、放疗、化疗、新辅助放化疗、光动力学治疗等。本文就肝门部胆管癌非手术治疗的研究进展及现状进行综述。

兔VX2肝癌模型接种方法的改进及螺旋CT观察

目的:改进经典的兔VX2肝癌模型瘤组织接种法,比较改良的瘤组织接种法与经典方法的差异。方法:将30只新西兰白兔随机分为2组,分别采用经典的瘤组织块接种法(A组)及改良的瘤组织注射接种法(B组)。于接种后第8、15、22、29d进行螺旋CT扫描,观察CT表现、计算肿瘤大小,最后予病理确认。结果:A组和B组的接种时间分别为(9.47±2.85)min和(5.85±1.62)min,差异有统计学意义(P=0.003);2组的成功率分别为53.3%和86.7%,差异无统计学意义(P=0.109)。2组肿瘤生长情况的差异无统计学意义(P=0.667)。结论:改良的瘤组织块接种法操作简便,成瘤率高,优于经典的瘤组织块直接接种法。

结合激光微切割与cDNA芯片技术筛选胃癌进展过程中差异表达的基因

目的:结合激光微切割(LMD)和基因芯片技术筛选胃癌淋巴结转移相关基因,从中进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。方法:采用LMD技术,从17例胃癌患者手术标本中获取高纯度的正常胃黏膜细胞及原发灶和相应淋巴结转移灶中的肿瘤细胞。用基因芯片比较其中2例原发灶与淋巴结转移灶中肿瘤细胞基因表达谱的差异,半定量RT-PCR方法验证芯片结果;并在另15份标本中,进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。结果:发现49个基因的表达在胃癌原发灶肿瘤细胞中比淋巴结转移灶明显上调,37个基因的表达明显下调,mRNA水平的验证结果与芯片结果相符。同时,筛选出4个在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因,其中3个基因(OPCML,RNASE1和YES1)的表达规律与肿瘤抑制基因相似,即正常黏膜中表达最高,肿瘤原发灶次之,淋巴结转移灶表达最低;而另一个基因(AKC1)的表达规律则与癌基因相似。结论:采用LMD和基因芯片技术,成功筛选出胃癌进展过程中的差异表达基因,为进一步研究胃癌发生和转移的机制奠定了良好的基础。

VX2兔微小肝癌CT动态增强扫描最佳扫描时间窗的探讨

目的探讨多层螺旋CT增强扫描最佳的扫描时间窗及其对微小肝癌的诊断价值。方法对9只VX2兔肝微小肝癌(micro-hepatocellular carcinoma,MHCC),用多层螺旋CT进行同层动态扫描,观察肿瘤的CT增强特征,绘制肿瘤及邻近正常肝组织的时间-密度曲线,分析肿瘤强化峰值时间及肿瘤最佳显示时间区间。结果 9只肿瘤强化均始于动脉早期,其中3只肿瘤只在动脉早期显示;肿瘤强化峰值时间为注射对比剂后15～20s,肿瘤最佳显示区间为注射对比剂后8～25s。结论鉴于肝癌肝动脉血供的特点,动脉早期扫描可以提高MHCC的定性诊断率。

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的:研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果:鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论:鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记内皮祖细胞靶向肝癌的MR实验研究

目的采用小动物专用高场MR（7．0T）观察超顺磁性氧化铁纳米粒子（SPIO）标记的骨髓内皮祖细胞（EPCs）归巢至肿瘤局部的情况。方法抽取荷瘤鼠腹腔积液，直接注射法种植于15只裸鼠肝脏，制作小鼠移植性H22HCC模型；取C57BIM6小鼠骨髓分离培养EPCs，用25μg/ml纳米铁复合物（SPIO-PLL）对第三代EPCs进行标记；利用MTT比色实验、流式细胞分析检测磁性标记对细胞生长、凋亡的影响。模型制作第3天将标记细胞经尾静脉移植至模型鼠（n=15）及对照组（n=6）体内，移植后第1、3、7天应用MR观察肿瘤信号改变情况。行铁蓝染色、CD31免疫组织化学检查，并将MR所见与病理切片行对照分析。采用两样本t检验分析数据。结果模型制作3d后。15只裸鼠肝脏均可见肿瘤病灶；MTT比色实验、流式细胞分析示25μg／mlSPIO—PLL标记细胞后，其生长曲线（t=0．281，P〉0．05）、凋亡与未标记细胞间差异未见统计学意义[早期凋亡率：（12．31±1．43）％与（11．57±1．24）％，晚期凋亡率：（0．55±0．07）％与（0．49±0．05）％；t=0．967和1．060，均P〉0．05]；模型组小鼠细胞移植后第3天，MR成像可见信号改变（4／5），低信号呈斑片、条带状，主要位于肿瘤病灶边缘；第7天信号改变程度减低。病理证实标记细胞归巢至肿瘤周围或肿瘤局部。对照组小鼠MR成像未见明显低信号改变。结论EPCs可归巢至肿瘤局部或周围，高场MR可对其进行动态观察。

生物人工肝研究现状及进展

肝功能衰竭病情凶险，进展迅速，预后较差，各种药物治疗效果不佳，肝移植是治疗肝衰竭病人惟一有效的手段。但是，由于供体器官缺乏、费用高昂、需长期使用免疫抑制剂等原因，病人往往在等待供体过程中由于病情进展而迅速死亡，生物人工肝（bioartificial liver，BAL）可为病人提供短暂的肝功能支持，从而成为人们研究的焦点。本文从细胞来源、细胞培养方式及生物反应器三方面综述BAL目前的研究现状及近年来的进展。

猪骨髓间充质干细胞与肝细胞共培养的比较蛋白质组学研究

目的 比较猪骨髓间充质干细胞（MSCS）与原代肝细胞构建共培养体系前后肝细胞内蛋白质表达谱的差异.方法 体外建立肝细胞与MSCS最适共培养体系.流式细胞仪分选共培养肝细胞）,并设立肝细胞、MSCS单纯培养组作为对照.采用双向凝胶电泳分离后,将差异蛋白点进行胶内原位切割、酶解后,获得肽质指纹谱.并通过Western blot技术进一步验证.结果 经质谱鉴定出34个蛋白点,Western blot检测证实囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）、白细胞介素（IL）-6、人高迁移率族蛋白（HMG）-1变化水平与蛋白质组结果基本一致.结论 这些功能蛋白的差异表达可能与MSCS和原代肝细胞体外共培养下肝细胞特异性功能改善、细胞生存时间延长、免疫调节存在必然联系.