β-TrCP1在非霍奇金淋巴瘤细胞黏附耐药中的作用

目的:探讨β转导重复包含蛋白(β-transducin repeat containing protein 1,β-TrCP1)对非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma, NHL)细胞黏附耐药性的影响。方法:采用Western Blot法检测NHL细胞黏附到骨髓基质细胞后β-TrCP1的表达水平,钙黄绿素检测法检测β-TrCP1 对NHL 细胞黏附率的影响,CCK8、TUNEL 检测干扰β-TrCP1 后对NHL 细胞耐药性的影响。结果:β-TrCP1 蛋白在NHL 细胞黏附到骨髓基质细胞后表达升高,且干扰β-TrCP1 的表达能明显下调NHL 细胞的黏附率。将NHL 细胞黏附到骨髓基质细胞并加入米托蒽醌后,干扰β-TrCP1 的表达能明显抑制NHL 细胞活性并增加凋亡细胞数量。结论:干扰β-TrCP1 能抑制NHL 细胞黏附介导的耐药。

心肌特异性Creg基因条件敲除小鼠的建立及表型分析

目的:建立心肌特异性Creg基因敲除小鼠并初步分析其表型。方法:利用订购的Creg两端插入lox P位点(Cregflox/flox)的小鼠与肌型肌酸激酶特异性启动子驱动的Cre重组酶转基因(Ckmm-cre)小鼠交配,获得Cregflox/+/Ckmm-cre小鼠。再利用Cregflox/+/Ckmm-cre小鼠互相交配,获得基因型为Cregflox/flox/Ckmm-cre的心肌特异性Creg基因条件敲除(Creg conditional knockout,Creg c KO)小鼠。用PCR法进行基因型鉴定。用定量PCR及Western Blot检测心肌组织中Creg表达水平。HE染色观察敲除小鼠与同窝野生型对照小鼠心脏大小及形态。检测两组小鼠心电图。用小动物超声评价两组小鼠左心室收缩功能。结果:1经基因型鉴定,成功获得Creg c KO小鼠。2与野生型对照相比,Creg c KO小鼠心脏中CREG在转录及翻译水平表达降低90%以上。3与野生型对照相比,Cre c KO小鼠的心脏大小、形态、心电图及左心室射血分数均无显著差别。结论:成功建立心肌特异性CREG基因条件敲除小鼠,为进一步研究Creg在心脏疾病中的作用和机制提供了有力的工具。

高通量筛选ENU诱变产生的遗传疾病小鼠模型

由于小鼠和人类基因组的高度同源,修饰和改造小鼠基因组已经成为建立人类疾病模型和研究基因功能的最重要的手段.通过C57BL/6J雄性小鼠的ENU化学诱变和子代的表型筛选的方法,对G_1代3172只小鼠的形态学、行为学、神经功能、学习记忆、听力、视觉生理、骨代谢、血糖和心功能等一系列生理生化指标进行了高通量检测,筛选出595只与人类疾病相关的显性基因突变个体,其中毛色转换、眼疾和听力缺陷发生频率较高,而代谢性异常的显性突变率较低,提示血糖和心电等重要代谢功能的遗传调控稳定性高于外周神经系统功能.小鼠单侧性眼疾存在明显的雌雄不均一性和左右不对称性.骨密度异常与小鼠性别也有一定相关性.在对104只G_1代突变小鼠和野生型小鼠交配的可遗传性检测中,已有14只的异常表型被确认可以遗传,其中行为学异常小鼠的可遗传性较低,提示行为学异常可能和多基因突变相关.这些突变小鼠品系的建立,为疾病表型的发生和病理过程的细胞生物学及分子生物学机制研究、突变基因的染色体定位和克隆奠定了良好的基础.