表皮细胞抑素的体外生物活性

目的观测表皮细胞抑素对人皮肤角质形成细胞系(HaCaT细胞)和鸡胚表皮细胞的抑制作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)观察表皮细胞抑素对HaCaT和鸡胚表皮细胞增殖的抑制作用。结果HaCaT和鸡胚表皮细胞(1×105/ml)培养24h后,分别加入0·25mg/ml、0·125mg/ml、0·0625mg/ml的表皮细胞抑素100μl,48、72h后显示表皮细胞抑素显著的抑制了这两种细胞的生长,并呈量效关系。结论表皮细胞抑素能显著的抑制HaCaT细胞和鸡胚表皮细胞的生长,并呈量效关系。

淫羊藿提取物抗抑郁作用研究

目的研究淫羊藿提取物的抗抑郁作用。方法采用行为绝望模型悬尾试验(TST)和强迫游泳试验(FST)研究淫羊藿提取物对小鼠行为、脑内单胺氧化酶A(M AO-A)、单胺氧化酶B(M AO-B)活性与肝脏中M AO-A和M AO-B活性及丙二醛(M DA)水平的影响;采用利血平拮抗模型探讨淫羊藿提取物可能存在的抗抑郁作用途径。结果淫羊藿提取物(25、50、100、200 m g/kg)能显著缩短TST和FST小鼠悬尾和游泳不动时间,显著抑制TST小鼠脑和肝组织M AO-A和M AO-B活性,逆转肝组织M DA水平的升高。淫羊藿提取物对利血平所致小鼠体温的下降无明显改善作用。结论淫羊藿提取物具有一定抗抑郁作用。

熊果酸的抗肿瘤作用

目的研究熊果酸的抗肿瘤活性。方法体外用MTT比色法测定熊果酸对肿瘤细胞HepG2和S180的增殖抑制作用,再用DNA凝胶电泳法测定熊果酸对HepG2细胞凋亡的诱导作用;体内采用小鼠实体瘤模型,观察熊果酸对HepG2和S180实体瘤的抑制作用。结果熊果酸对HepG2和S180的增殖有良好的抑制作用,48h内对细胞半数生长的抑制剂量(IC50)分别为12.5μg/ml和13.9μg/ml。同时熊果酸能够诱导HepG2发生凋亡。20.0μg/ml熊果酸对HepG2和S180实体瘤抑制率分别达到52.98%和44.41%。结论熊果酸通过抑制增殖和诱导凋亡对肿瘤细胞株HepG2和S180表现出良好的抗肿瘤活性。

内质网应激介导成骨细胞凋亡在骨溶解骨组织中的作用及机制

背景:磨损微粒能够在体外诱导成骨细胞凋亡,但是发生骨溶解的骨组织中是否也存在成骨细胞的凋亡以及骨组织中的成骨细胞凋亡信号通过何种途径进行传导目前尚不清楚。目的:分析内质网应激反应在骨溶解骨组织中成骨细胞凋亡和骨溶解发生发展中的作用。方法:制备磨损微粒诱导骨溶解动物模型。实验分为4组:空白对照组只接受PBS的刺激;磨损微粒组只接受纳米合金粉末悬液的刺激;内质网应激阳性对照组接受纳米合金粉末+毒胡萝卜素的刺激;内质网应激抑制组接受纳米合金粉末悬液及造模后当时、造模后1,2,3和5 d分别腹腔注射4-苯基丁酸。通过甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色和碱性磷酸酶染色观察骨溶解的病理变化;分析骨溶解颅骨组织中成骨细胞分化成熟情况;Western Blot方法检测骨溶解颅骨组织内内质网应激反应标志蛋白的表达变化;TUNEL和Caspase-3免疫组织化学方法检测骨溶解颅骨组织内成骨细胞的凋亡情况。结果与结论:磨损微粒能够在体外诱导小鼠颅骨骨溶解的发生、加重炎症细胞的浸润以及抑制成骨细胞分化成熟,同时磨损微粒还可以上调成骨细胞内质网应激反应标志蛋白以及促进骨溶解骨组织中成骨细胞的凋亡。经内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)的治疗后,骨溶解症状明显缓解,骨侵蚀和炎症浸润显著降低,成骨细胞的分化成熟得到改善,凋亡的成骨细胞急剧减少,内质网应激标志蛋白的表达逐渐减弱。表明内质网应激反应参与骨溶解的形成并在骨溶解的发生发展中发挥重要作用。提示内质网应激可作为一种新的治疗靶点,为临床逆转或治疗骨溶解和无菌性松动提供新的思路和方法。

肝细胞生长抑制因子的分离纯化及其性质分析

目的从小牛肝脏中分离纯化具有抑制肝癌细胞活性的多肽类物质,并分析其性质。方法将小牛肝脏细胞的提取液经超滤、透析、加热、乙腈沉淀、离子交换层析等步骤分离、纯化得到几种蛋白并在体外用HepG2细胞检测其抗肿瘤活性。结果获得了2种对肝癌细胞有显著抑制效应的蛋白,其分子量分别为10.9KD和11.9KD。结论发现两种对热很稳定的非精氨酸酶类新的肝源性细胞生长抑制因子,有望发展成为新的治疗肝癌的药物。

猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用

目的观察猪脑提取物对痴呆大鼠学习记忆的影响,并探讨其作用机制。方法海马CA1区微量注射喹啉酸造成Alzheimer病(AD)大鼠。将大鼠随机分成假损伤组、对照组、猪脑提取物组、猪脑提取物预防给药组及阳性药脑活素组。肌肉注射给药,连续给药30d。采用Y-迷宫和被动回避性跳台法测定大鼠的学习记忆水平;分光光度法测定大脑皮质MDA的含量,及海马的NO的含量和NOS的活性。结果与对照组大鼠相比,给予猪脑提取物第10,20,30天后,大鼠迷宫、跳台的错误次数明显减少;给药30d后,大鼠大脑皮质MDA,海马NO含量和NOS活性明显降低。结论猪脑提取物可提高痴呆大鼠学习记忆能力,其作用机制与其降低大鼠脑内的MDA、NO、NOS有关。

猪脑类神经肽抑制因子的分离纯化和抗小鼠癫痫作用

本实验室以猪脑为原料,利用超滤,凝胶过滤层析和反相高效液相色谱等分离纯化方法,分离出一种小分子类神经肽抑制因子(Neuropeptide-like inhibitor,NPI),并进行生物活性和理化性质的初步研究。以MTT比色法检测NPI对噬铬细胞瘤(pheochromocytoma)PC12细胞生长的影响;建立戊四氮致小鼠急性癫痫模型,检测NPI体内活性;通过液相色谱法鉴定NPI相对分子量和氨基酸组成。结果表明NPI对PC12细胞生长具有抑制作用,并呈量效关系。动物模型实验显示小鼠初次惊厥时间明显延长(P<0.01),惊厥程度及死亡率明显下降(P<0.05),表明NPI具有体内抗惊厥活性。

神经细胞抑制肽的体内外活性研究

目的对本实验室自制的神经细胞抑制肽(NeuronInhibitoryPeptide,NIP)进行体内外活性研究。方法MTT比色法检测自制的NIP原样及经SephadexG10凝胶过滤层析后得到的5个组分,对噬铬细胞瘤株(Pheochromocytoma)PC12细胞生长的影响,确定出2个活性峰。建立戊四氮(PTZ)致小鼠急性癫痫动物模型,检测原样及2个活性峰的体内抗惊厥活性。结果体外细胞活性实验显示,原样及峰1和峰4对PC12细胞具有抑制作用,且该抑制作用呈量效关系。动物模型实验表明,与对照组比较,给予NIP后,小鼠初次惊厥时间明显延长(P<001),惊厥程度及死亡率明显下降(P<005)。结论本实验室自制的神经细胞抑制肽在体内外均有显著的抑制神经细胞的活性。