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T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化 被引量:5
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作者 彭贵洪 马忠 +2 位作者 薛宇鸣 陈于红 朱德煦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期362-367,共6页
化学合成的人尿激酶原cDNA克隆在表达质粒pET11d中,在T7启动子的作用下,经01mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的15%,表达产物以无活性的包... 化学合成的人尿激酶原cDNA克隆在表达质粒pET11d中,在T7启动子的作用下,经01mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的15%,表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性,Zn2+选择性沉淀,抗体亲和柱层析,及Benzamidine亲和吸附,所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带,其比活约110000IU/mg。 展开更多
关键词 人尿激酶原 高效表达 分离 纯化 T7启动子
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含有FXa切割位点的抗菌肽X在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 袁榴娣 窦非 +4 位作者 梁玉璞 谢维 王芳 张双全 戴祝英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期411-414,共4页
PCR method was used to introduce the code sequence of Factor Xa cleavage site to the 5′ end of cecropin CMIV mutant gene X,then the gene was cloned into the expression vector pGEX KG,and was highly expressed in E.col... PCR method was used to introduce the code sequence of Factor Xa cleavage site to the 5′ end of cecropin CMIV mutant gene X,then the gene was cloned into the expression vector pGEX KG,and was highly expressed in E.coli BL21 by IPTG induction.The fusion protein was purified by affinity chromatography and was cleaved by Factor Xa.Cecropin X with antibacterial activity was obtained after purified by ion exchange chromatography. 展开更多
关键词 抗菌肽X 融合表达 凝血因子FXa 抗菌活性
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两种尿激酶原变体(Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His,Lys^(300)→His和Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His)的构建及性质研究
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作者 史蔚 朱慧 +2 位作者 薛宇鸣 唐堂 马忠 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第2期208-212,共5页
利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamid... 利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamidine Sepharose吸附除去双链尿激酶 ,得到的蛋白均为银染一条带 .用人工合成的发色底物S2 4 4 4测量muk1、muk2的动力学性质 ,muk1的内在酶活性比野生型 pro UK降低 8倍 ,muk2的内在酶活性比野生型 pro UK降低 2 .5倍 ;它们经纤溶酶 (plasmin)激活后的双链活性与 pro UK相比分别为muk1提高 50 % ,muk2和pro UK相当 .在实验基础上讨论了 pro UK高内源性催化活性的机制及其结构基础 . 展开更多
关键词 尿激酶原 定点突变 内在酶活性 血栓 药物疗物
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纤维蛋白高亲和性尿激酶变体的研究 被引量:1
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作者 马忠 余瑞荣 +1 位作者 华子春 朱德煦 《中国科学(C辑)》 CSCD 1996年第5期392-397,共6页
150~156位氨基酸缺失的变体尿激酶原scu-PA(dscu-PA)和未突变的尿激酶原(rscu-PA)均在E.coli中获得表达.经体外变复性,抗体亲和层析,2种表达产物均被纯化至银染1条带.经plasmin活化,从dscu-PA得到的变体双链尿激酶dtcu-PA,从rscu-PA得... 150~156位氨基酸缺失的变体尿激酶原scu-PA(dscu-PA)和未突变的尿激酶原(rscu-PA)均在E.coli中获得表达.经体外变复性,抗体亲和层析,2种表达产物均被纯化至银染1条带.经plasmin活化,从dscu-PA得到的变体双链尿激酶dtcu-PA,从rscu-PA得到的重组双链尿激酶rtcu-PA和天然双链尿激酶ntcu-PA对合成底物S2444具有相似的酶学性质,说明缺失突变未影响尿激酶的催化活性中心.对纤维蛋白 fibrin-clot和^(125)I-fibrin-sepharose诱导的纤溶, dtcu-PA明显优于 rtcu-PA,甚至还优于rscu-PA.dtcu-PA对血浆中纤维蛋白原的含量几乎无影响.结果表明dtcu-PA具有较高的fibrin选择性,同时也证明双链尿激酶能够通过改造而获得较高的fibrin选择性. 展开更多
关键词 尿激酶 双链尿激酶 纤维蛋白亲和性 药物化学
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抗活化血小板单克隆抗体与尿激酶杂合分子的纤溶作用 被引量:3
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作者 杜鸰 余瑞荣 +3 位作者 华子春 朱德煦 吴国新 阮长耿 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1993年第1期32-37,共6页
用双功能团试剂将尿激酶(UK)B链和抗人活化血小板α-颗粒膜蛋白GMP-140单克隆抗体(SZ-51)的Fab片段共价偶联。偶联的杂合分子UK-SZ-51保留了原抗体的结合专一性,它在体外的溶栓效率较尿激酶提高约5倍,其溶栓作用对血浆中纤维蛋白原的含... 用双功能团试剂将尿激酶(UK)B链和抗人活化血小板α-颗粒膜蛋白GMP-140单克隆抗体(SZ-51)的Fab片段共价偶联。偶联的杂合分子UK-SZ-51保留了原抗体的结合专一性,它在体外的溶栓效率较尿激酶提高约5倍,其溶栓作用对血浆中纤维蛋白原的含量无影响。 展开更多
关键词 单克隆抗体 尿激酶 纤溶作用 抗体
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蛋白质变体活性预测模型及其在肿瘤坏死因子分子设计中的应用
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作者 唐卫东 奚涛 +3 位作者 王波 郭冬林 徐贤秀 朱德煦 《中国科学(C辑)》 CSCD 1996年第5期455-462,共8页
提出了一种预测蛋白质变体活性的简单模型.这种模型不涉及复杂的理论运算,而是试图通过分析蛋白质疏水核心和疏水表面区域的氨基酸定点突变后分子结构的变化,来预测变体的活性变化,以肿瘤坏死因子的两处亮氨酸残基(L29,L157)突变后的活... 提出了一种预测蛋白质变体活性的简单模型.这种模型不涉及复杂的理论运算,而是试图通过分析蛋白质疏水核心和疏水表面区域的氨基酸定点突变后分子结构的变化,来预测变体的活性变化,以肿瘤坏死因子的两处亮氨酸残基(L29,L157)突变后的活性变化为例,验证了该模型的可靠性.在此基础上,提出了提高肿瘤坏死因子活性的分子设计方案并进行了实验验证. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 预测模型 分子设计 蛋白质变体
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