多孔壳聚糖/明胶复合材料载入治疗基因成分的实验

目的:探讨多孔壳聚糖/明胶复合生物材料载入治疗基因的可行性。方法:实验于2003-09/2005-04在南京大学国家重点生物医药技术实验室完成。实验材料:壳聚糖(Mr约160000,脱乙酰化程度85%,Sigma公司),明胶B(取自牛皮肤,Sigma公司),能够在真核体系表达的质粒DNA(编码有转化生长因子β1,pCMV-TGF-β1)。1mg支架材料DNA控制在2μg,通过二次冻干的方式制备含有pCMV-TGF-β1的多孔壳聚糖/明胶三维架材料,观测多孔支架材料携带基因成分的微观形态、体外释放特性以及材料对质粒DNA的保护作用。结果:壳聚糖与明胶材料具有良好的成孔特性,孔隙较均一,材料表面光整;材料在浸泡磷酸盐缓冲液后,1～3d内快速释放,DNA迅速达到释放浓度峰值,并能够维持3周的释放时间;材料对基因成分有保护作用。结论:多孔壳聚糖/明胶三维支架材料能够携带质粒DNA。通过二次快速冻干方式制备基因活化材料可以保护基因成分不被破坏,并可保持一定浓度的持续释放时间,为基因活化材料进一步在体内运用提供了依据。

半夏厚朴汤醇提物对大鼠慢性抑郁模型的影响

目的 :研究半夏厚朴汤醇提物对大鼠慢性抑郁模型 (CMS)的影响 ,探索其抗抑郁机制。方法 :以 1%蔗糖水摄入量作为指标 ,慢性给予各种低强度复合刺激 ,造成大鼠慢性抑郁模型。按试剂盒酶法测定血脂 ;采用乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定脾细胞内自然杀伤细胞活性 ;采用邻苯三酚自氧化法测定红细胞内超氧化物岐化酶活性 ;按试剂盒显色法测定血清和组织中一氧化氮合酶活性 ;采用硫代巴比妥酸法测定心脏中丙二醛含量。结果 :在大鼠CMS模型中半夏厚朴汤醇提物可增加动物蔗糖摄入量 ;增加其脾脏自然杀伤细胞活性 ;升高血清中高密度脂蛋白 (HDL C)水平 (P <0 .0 5 ) ,降低甘油三酯水平 (P <0 .0 0 1) ;降低血红细胞内超氧化物岐化酶活性及血清和肝组织中一氧化氮合酶活性 ;同时抑制组织中脂质过氧化程度 ,降低心肌组织中丙二醛含量。结论 :半夏厚朴汤醇提物通过多途径而达到抗抑郁作用。

复方人参注射液粉末X-射线衍射指纹图谱研究

目的 :建立复方人参注射液的粉末X 射线衍射指纹图谱。方法 :采用粉末X 射线衍射衍射法测定药材、中间体和注射液的衍射图谱 ,对所得到的图谱进行特征峰指认和对比分析 ,获得各自的标准指纹图谱。结果 :10个批次的药材、中间体和注射液均有非常好的重现性 ,相似度达 85 %以上。结论 :粉末X 射线衍射方法可用于复方人参注射液的质量控制。

热休克对急性运动大鼠骨骼肌中MDA及SOD的影响

目的 :探讨热休克对急性运动后大鼠骨骼肌中脂质过氧化物 (MDA)和抗氧化酶 (SOD)的影响。方法 :SD大鼠分为高温安静组、高温运动组、室温安静组、室温运动组。高温安静组和高温运动组大鼠经热休克处理后室温恢复 2 4小时 ,进行一次性急性运动 ,运动后 16小时取样进行各项检测并与室温安静组和室温运动组进行比较。结果发现 ,高温安静组HSP72高于室温安静组 ,高温运动组骨骼肌中MDA明显低于室温运动组 (P <0 0 5 ) ,而SOD略高于室温运动组 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 )。结果提示 ,热休克可明显减少骨骼肌中脂质过氧化物 (MDA)含量 。

Mn-SOD模拟物及其在神经退行性疾病中的药用前景

本文通过分析神经退行性疾病与线粒体机能障碍、自由基损伤的关系，主要讨论了Ｍｎ－ＳＯＤ模拟物作为自由基清除剂对活性氧化合物的清除机理、药用优势，并总结了近年来有关Ｍｎ－ＳＯＤ模拟物在神经退行性疾病防治方面的研究近况及潜在应用前景。

新型偶氮化合物的合成及其光学性质

以咔唑和苯酚为原料,经重氮和偶合反应合成了一种新型偶氮化合物——N-对(4-羟基苯偶氮基)苯基-3,6-二(叔丁基)咔唑(4),其结构经1HNMR和13CNMR表征。4的UV和固体荧光光谱研究结果表明,4具有较好的光学活性。

测定血红蛋白的一种电化学分析方法

血红蛋白可以在微裸银电极上得到电流响应。蛋白质溶液中加入适量的十二烷基硫酸钠，血红蛋白峰电流明显增大，峰形对称，可直接用于血红蛋白的分析测定。实验发现，在５．０×１０－７～５．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度范围，血红蛋白氧化峰电流与其浓度呈正比，用于人体血样中血红蛋白的测定与光度法结果一致。

中华芦荟多糖的提取·精制和含量测定研究

[目的]优化中华芦荟多糖的提取工艺,比较几种精制方法,并建立多糖含量的测定方法。[方法]以多糖得率和含量为评价指标,采用正交试验法对多糖提取工艺进行研究,并比较透析法、AB-8型大孔树脂吸附法和活性炭吸附法3种多糖精制方法;采用芦荟多糖标准品测得芦荟多糖对葡萄糖的换算因子后,用苯酚-硫酸法测定多糖含量。[结果]中华芦荟多糖的最佳提取工艺为料液比1∶10g/ml,提取2次,提取时间3 h;不同精制方法得到的多糖含量:透析法>AB-8型大孔树脂吸附法>活性炭吸附法,多糖收率:活性炭吸附法>透析法>AB-8型大孔树脂吸附法;苯酚-硫酸法测定芦荟多糖对葡萄糖的换算因子为1.32,平均回收率为98.4%,相对标准偏差为2.36%。[结论]优选工艺经济、简单、稳定、可行,透析法精制芦荟多糖简单快速、成本低、多糖含量高,苯酚-硫酸法简便、准确、重现性好。

长期游泳运动对非酒精性脂肪肝大鼠血清氨基酸谱的影响及分析

本文旨在探讨长期游泳运动对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清中氨基酸谱的影响.30只大鼠随机分为高脂组、高脂运动组和正常组.高脂组和高脂运动组采用高脂饲料喂养.高脂运动组喂养4周后,进行20周的游泳运动.24周后,对3组大鼠取肝脏作病理分析,取血测定血清中ALT、AST、GLU、Chol、TG、HDL、LDL、CP,并采用HPLC测定血清中氨基酸谱,3组进行对照分析.结果显示,高脂运动组较高脂组肝脏的脂肪变性明显好转,血清中ALT、AST、GLU、Chol、TG、LDL、CP均趋向于正常.高脂运动组血清中天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、精氨酸较高脂组显著下降,有统计学意义(P<0.001).高脂运动组血清中谷氨酸、天冬酰胺、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸较高脂组降低,有显著性差异(P<0.05).高脂运动组较高脂组支链氨基酸(BCAA)略有上升,芳香族氨基酸(AAA)明显下降,Fischer值(支/芳)明显上升(P<0.05).研究发现,长期耐力运动通过消耗多余的脂肪使非酒精性脂肪肝肝功能明显好转,血清中氨基酸谱的变化提示长期耐力运动在一定程度上能够纠正蛋白质代谢的紊乱.

去氢表雄酮对抗NMDA神经毒性与抑制细胞内Ca^(2+)升高有关(英文)

去氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)是一种神经甾体物质,虽然已经发现对中枢神经系统有保护作用,但其分子机制尚未阐明.从胚胎小鼠(E15～16)大脑皮层分离神经元,离体培养10d,用MTT法检测DHEA对抗NMDA神经毒性的作用.用荧光染料Fluo＿3处理后,激光共聚焦显微镜分析胞内Ca2+浓度的变化,研究了DHEA神经保护作用与胞内Ca2+浓度的相关性.结果发现:(1)NMDA的剂量、时间依赖方式降低神经元的活性,(2)DHEA预处理可以明显改善NMDA诱导的形态学变化,且剂量依赖性预防NMDA的毒性,(3)1mmoL/LNMDA诱导细胞内游离Ca2+荧光浓度的迅速升高,而DHEA可以阻断这种变化.以上数据表明,DHEA可以保护神经元,对抗NMDA的神经毒性作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+升高有关.

运动与丝裂原活化蛋白激酶信号系统的研究动态

丝裂原活化蛋白激酶信号系统(mitogenactivatedproteinkinase,MAPKs)在细胞的信号传导中起着很重要的作用,其中以ERK1/2、JNK/SAPK、p38研究得最为深入。运动能够激活骨骼肌中MAPKs信号传导系统。不同运动方式、不同类型的肌肉可以影响到MAPKs的激活,而且激活后MAPKs具有不同的时相性。MAPKs对运动后骨骼肌的适应性变化具有重要作用。

Alzheimer’s疾病相关蛋白质相互作用网络构建及其相互作用预测

依据无标度网络的相关理论,提出一种预测蛋白质-蛋白质相互作用的算法,并预测潜在的作用位点。收集了所有与阿尔兹海默疾病(Alzheimer’s disease)相关疾病的人类蛋白,并找出与之能发生相互作用的蛋白质,绘制一个有关人类AD相关蛋白质相互作用网络。分析和计算了该网络的一些详细属性,并对网络进行生物信息学分析,找出网络中的蛋白质调控路径,该路径可能涉及到Apoptosis-antagonizing transcription factor(AATF)蛋白对于阿尔兹海默疾病的抑制作用。几个潜在与AATF蛋白作用的位点被自己开发的程序预测出,将它们的潜在作用位点做了比对,最后得到一个高度收敛的序列模体,其正则表达式为I-x(0,1)-E-x(2)-[AENT]-x-[EK].

DNA免疫制备肝特异新基因FF456抗体及其应用

目的 :制备FF4 5 6抗体 ,并研究FF4 5 6在正常肝组织和肝癌组织中的表达情况和分布。 方法 :将FF4 5 6全长基因克隆于pCDNA3.1(- )真核表达质粒 ,直接免疫 6～ 8周龄雌性BALB/c小鼠 ,并对DNA的免疫条件进行优化。同时通过原核表达体系表达一段含FF4 5 6特异序列的肽段。利用该肽段作为抗原 ,检测DNA免疫得到的FF4 5 6抗血清的滴度及特异性 ,最后利用FF4 5 6抗血清对正常肝组织和肝癌组织进行免疫荧光染色。 结果 :west ernblotting及ELISA结果表明 ,DNA免疫得到的FF4 5 6抗血清特异性良好 ,最大抗血清滴度为 5 0 0 0 0左右。 结论 :FF4 5 6在正常肝组织中广泛表达 ,在肝癌组织中的表达量明显下调。

巨噬细胞替代激活及调控

巨噬细胞作为机体天然免疫系统的重要组成部分,在生物体内发挥多种免疫功能,包括吞噬细菌、病毒等微生物,递呈并处理抗原和参与免疫应答。这些免疫功能的发挥依赖于巨噬细胞的激活。巨噬细胞的激活有多种形式,包括经典激活与替代激活。研究表明,替代激活的巨噬细胞参与了组织修复、血管新生、肿瘤发展侵袭与转移、炎症干预等多种生理病理过程。本文将根据近年来的研究进展,就巨噬细胞替代激活的亚型、分子特征、相关信号转导通路及重要调控分子作一综述。

龟板提取物靶向BMP4通路抑制PC12细胞凋亡

目的探讨龟板提取物(Testudinis Carapax et Plastrum extracts,TCPE)对血清饥饿诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法采用血清饥饿3 d的方法建立PC12细胞凋亡模型,并将细胞分为对照组,模型组,TCPE低、高剂量(3、30μg/mL)组。在施加处理因素3 d后,用MTT比色分析测定细胞吸光度值,Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blotting检测Caspase-3、BMPs信号通路的表达水平,并检测BMPs信号通路阻断后TCPE的抗凋亡作用。用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析。结果 MTT与流式细胞术结果显示,TCPE能提高PC12细胞活性,降低PC12细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,TCPE组与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05、0.01)。Western blotting结果显示,TCPE能降低Caspase-3表达,增加BMP4、BMPR-IA、p-Smad1/5/8的表达,TCPE组与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05、0.01)。TCPE对BMP2、BMP7、BMPR-II的表达没有影响,BMPR-IB没有被检测出。BMP4中和抗体减弱了TCPE的抗凋亡活性。结论 TCPE具有抑制血清饥饿诱导PC12细胞凋亡的作用,且这种作用呈剂量依赖性,其作用机制可能与激活BMP4信号通路表达有关。

重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶动力学分析

目的对重组的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)进行酶动力学特征分析。方法用阿糖胞苷-2’,5’-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析纯化重组SjTGR蛋白。利用紫外分光光度计(UV-2550,SHIMADZU),在25℃条件下分别以5-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)、胰岛素、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、β-羟乙基二硫化物(HED)为底物,测定SjTGR的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氧还蛋白(Grx)活性及其米氏常数。以金诺芬为抑制剂,测定其对SjTGR活性的抑制作用及抑制常数。结果 SjTGR是一种具有TrxR,GR,Grx活性的多功能酶,酶活性分别为8.11、2.19和12.10μmol·min-1mg-1。不同的酶底物得到的Km值分别为(21.42±0.44)μmol·L-1(NADPH)、(3.24±0.40)μmol·L-1(Trx)(、145.05±6.31)μmol·L-1(DTNB)(、49.55±6.31)μmol·L-1(GSSG)、(2 792±231)μmol·L-1(HED)(、1 698±54)μmol·L-1(GSH)。金诺芬对SjTGR活性有明显的抑制作用,5 nmol·L-1重组SjTGR的TrxR、GR、Grx半数抑制浓度(IC50)值分别为6.89、0.47和8.12 nmol·L-1,TrxR、GR的抑制常数(Ki)分别为为0.762和0.034 nmol·L-1。金诺芬对SjTGR的TrxR活性抑制作用为竞争抑制,而对SjTGR的GR活性的抑制作用为非竞争抑制作用。结论 SjTGR具有TrxR、GR、Grx三种酶活性,能被金诺芬所抑制,是开发抗日本血吸虫新药的分子靶标。