移植术后第14天血清β-HCG对辅助生育妊娠结局的预测

目的评估体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子注射(IVF-ET/ICSI)新鲜周期移植与冷冻周期移植(FET)术后第14天血清β-HCG对妊娠结局的预测价值。方法回顾性分析2012年1月至2014年12月IVF-ET/ICSI新鲜周期移植术(n=1 894)以及FET(n=1 164)后第14天血清β-HCG水平。按照妊娠结局分为生化妊娠、早期自然流产、异位妊娠、单胎分娩、双胎分娩。分别比较鲜胚移植周期与FET周期,β-HCG对异常妊娠与正常妊娠预测敏感度和特异度,根据ROC曲线法计算不同妊娠结局间切割值。结果 (1)新鲜周期移植与FET正常妊娠组血清β-HCG均高于妊娠早期流产组、异位妊娠组、生化妊娠组,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)FET后孕妇血清β-HCG水平均高于新鲜周期,除异位妊娠组外,差异均有统计学意义(P<0.01);(3)新鲜周期移植后单次β-HCG>272.77U/L时,正常妊娠的可能性为85.66%,β-HCG>615.30U/L,妊娠结局较好,但有多胎妊娠的可能,FET后单次血β-HCG>515.31U/L,提示正常妊娠的可能性为74.86%,单胎双胎切割值为1 077.55U/L,冷冻周期正常妊娠及单双胎切割值均明显高于新鲜周期。结论移植术后第14天血清β-HCG水平可作为IVF-ET/ICSI以及FET周期早期妊娠结局预测的良好指标。

微刺激全胚胎冷冻方案在常规IVF-ET治疗失败无优质胚胎患者中的应用

目的探讨微刺激全胚胎冷冻方案在常规IVF-ET治疗因胚胎质量差助孕失败患者中的应用价值。方法收集在本中心行常规促排卵后IVF/ICSI-ET助孕治疗、因无优质胚胎放弃或移植失败后改用微刺激方案助孕的106例患者为研究对象,回顾性分析常规促排卵的124个周期和改行微刺激方案后的156个周期的临床资料。比较不同促排卵方案的各项参数及妊娠结局。结果微刺激组的Gn天数[(7.24±2.41)vs.(10.59±1.81)d]、Gn总量[(656.97±347.17)vs.(2 409.54±726.01)U]、HCG注射日E_2水平[(451.46±350.85)vs.(1 275.93±674.46)pmol/L],以及成熟卵母细胞数[(2.53±2.15)vs.(8.98±5.29)个]等均显著低于常规方案组(P均<0.05),但微刺激组的每卵胚胎形成率(39.13%)显著高于常规方案组(12.81%)(P<0.05)。常规方案组未获得临床妊娠;微刺激组共70个周期进行冻融胚胎移植,临床妊娠22例,移植周期临床妊娠率为31.43%(22/70),累计继续妊娠率为18.87%(20/106)。且微刺激方案中不同年龄组的胚胎种植率、移植周期妊娠率随着年龄增加显著下降(P<0.05)。结论微刺激全胚胎冷冻方案应用于常规IVF-ET治疗失败无优质胚胎的患者可获得较好的妊娠结局,有一定的临床应用价值。

重症子宫内膜异位症IVF/ICSI周期超长方案中添加短效GnRH-a对临床结局的影响

目的探讨在子宫内膜异位症IVF/ICSI周期超长方案中添加短效GnRH-a对临床结局的影响。方法 44例Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜异位症患者中,26例使用超长方案,18例在超长方案中加用短效GnRH-a。结果两组Gn使用量及时间,取卵数,受精率,卵裂率,临床妊娠率,胚胎种植率,冻胚周期率及临床流产率均无显著差异。对照组的继续妊娠率显著高于添加组且有统计学差异(P<0.05)。结论在子宫内膜异位症超长方案中添加短效GnRH-a并不能减少Gn用量,获卵数目无明显增加,受精率、卵裂率无明显变化;对临床结局无显著影响。

长效GnRH-a降调促排方案HCG次日孕酮水平对IVF临床结局的影响

目的探讨IVF周期长效GnRH-a降调促排卵方案中HCG次日孕酮(P)水平对临床妊娠结果及促排卵结果的影响。方法回顾性分析本中心2014~2015年行长效GnRH-a降调促排卵方案并行HCG日P及次日P检测的941个周期的临床资料,以HCG次日P分布的不同百分位截断值,分为3组:Ⅰ组(P≤14.17nmol/L),Ⅱ组(14.17nmol/L<P<46.16nmol/L),Ⅲ组(P≥46.16nmol/L),比较3组的促排卵结局。再进一步将鲜胚移植的634个周期按照上述P截断值分为3组,A组(79个周期),B组(532个周期),C组(23个周期),比较3组的临床结局。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组患者的Gn用量、HCG日E2、HCG日P、获成熟卵数、可用胚胎数比较均有显著性差异(P<0.001),IVF正常受精率3组间无显著性差异(P>0.05)。A、B、C 3组的Gn用量、Gn天数、HCG日E2、HCG日P、成熟卵数、可用胚胎数与Ⅰ~Ⅲ组的结果相似,C组的Gn用量最少,HCG日E2、P最高,成熟卵数、可用胚胎数最多(P<0.05)。3组间IVF正常受精率、种植率、临床妊娠率、活产率、流产率比较均无显著性差异(P>0.05),但种植率及临床妊娠率C组较A组、B组有下降趋势。结论 HCG次日P水平的高低并不影响IVF临床妊娠率,但是HCG次日高P可能会使种植率及临床妊娠率有下降趋势,因此,HCG次日P明显升高时也需要慎重选择是否行鲜胚移植。

DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成

目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制。文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子。方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因c DNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按Ad Max系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装。按NE-PERTMNuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离。KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-Lac Z),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测。采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度。采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长c DNA序列,并分别亚克隆至p CS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和p FLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中。采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中。收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验。通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/Dna J家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平。结果 Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞m GC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达。免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中。腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源FlagDNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌二醇的合成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)减少,KGN细胞中雌二醇的合成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(7 903.0±409.5)pg/m L,P<0.01],而细胞核中高表达Flag-DNAJB11后则刺激KGN细胞中雌二醇的生成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)刺激雌二醇的生成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(14 217.0±1218.0)pg/m L,P<0.01]。免疫共沉淀实验表明当Myc-tagged FOXL2与Flag-tagged DNAJB11分别共转染HEK293细胞,FOXL2与DNAJB11可以相互免疫共沉淀对方,荧光素酶报告基因实验进一步表明细胞核中表达的DNAJB11显著增强FOXL2介导的Cyp19A1启动子活性和Cyp19A1蛋白表达。结论 DNAJB11是转录因子FOXL2新的结合分子并调控FOXL2蛋白的稳定性与转录活性。

年龄与移植胚胎数量对囊胚冻融周期临床妊娠结局的影响

目的探讨分析不同年龄阶段患者玻璃化冻融胚胎移植第5或6日行单囊胚与双囊胚移植的临床结局。方法回顾性分析2012年1月至2015年1月行囊胚玻璃化冻融移植周期678例,依据女方年龄分为21-29岁、30-34岁、35-37岁以及≥38岁,依据移植胚胎数量分为单囊胚移植和双囊胚移植,分析年龄与移植胚胎数量对临床妊娠结局的影响。结果 21-29岁、30-34岁、35-37岁3个年龄段冻融单囊胚与双囊胚移植临床妊娠率分别为:61.04%vs 78.64%,64.00%vs 75.36%和46.30%vs 79.20%,差异显著,有统计学意义(P<0.05);21-29岁、30-34岁、35-37岁3个年龄段冻融单囊胚与双囊胚移植多胎妊娠率分别为2.13%vs 47.53%,5.60%vs 49.04%以及4.00%vs 47.37%,差异极其显著(P<0.01);≥38岁两组临床妊娠率比较无统计学差异;≥38岁两组多胎妊娠率4.00%vs 28.57%,差异显著,有统计学意义(P<0.05);冻融单囊胚移植组(290例)未出现异位妊娠,双囊胚移植组(388例)异位妊娠率为1.34%;各年龄阶段单囊胚与双囊胚移植分娩率比较均无统计学差异。结论对预后良好的患者可尝试进行选择性单囊胚冷冻,降低囊胚复苏周期的多胎率和异位妊娠率,增加患者的累积妊娠率;≥38岁的高龄患者也可尝试使用选择性优质单囊胚移植方案在降低多胎和异位妊娠发生的同时增加患者的累计妊娠率。

玻璃化冻融与新鲜周期卵裂期胚胎移植临床妊娠与新生儿结局分析

目的探讨分析玻璃化冻融周期与新鲜周期卵裂期胚胎移植临床妊娠与新生儿结局。方法对1078例玻璃化冻融周期及同期的1136例新鲜卵裂期胚胎移植周期进行回顾性分析,比较两组的临床妊娠及新生儿结局。结果两组的胚胎着床率、临床妊娠率、多胎妊娠率、异位妊娠率、早期和晚期自然流产率及抱婴回家率比较均无统计学差异;单胎分娩新生儿,出生体重及出生缺陷两组比较无统计学差异,两组早产率(玻璃化冻融周期组11.33%vs新鲜卵裂期胚胎移植周期组6.09%),差异显著,有统计学意义(P<0.05);双胎分娩新生儿,出生体重、孕周及出生缺陷比较均无统计学差异(P>0.05)。结论玻璃化冻融组在临床结局与新鲜胚胎移植组相似;玻璃化冻融组的单胎分娩新生儿早产率较新鲜胚胎移植组高,但在双胎分娩新生儿体重方面有更好的结局。还需加强对玻璃化冷冻技术的深入研究,并迫切的需要大样本的母婴结局分析及对子代的长期随访。

Nur77在不同发育阶段小鼠睾丸的表达及其功能

目的 观察核受体Nur77在不同发育阶段小鼠睾丸的表达,并探讨其对睾酮合成的作用.方法 用1周龄的ICR雄性小鼠作为幼年期组（相当于人类幼年期,n=6）,4周龄的ICR雄性小鼠作为性发育前组（相当于人类青春期前,n=6）,12周龄的ICR雄性小鼠作为性成熟期组（相当于人类青壮年,n=6）,12月龄的ICR雄性小鼠作为老年组（相当于人类中老年,n=6）.Real time PCR和Western Blot分别检测小鼠睾丸中Nur77 mRNA和蛋白水平表达.体外培养小鼠睾丸间质细胞系MLC-1,Nur77干涉腺病毒（Ad-siNur77）及空载腺病毒（Ad-CMV）转染MLTC-l.放射免疫法检测MLTC-1细胞培养液上清的睾酮含量,Real time PCR和Western Blot检测StAR及HSD3B的表达.结果 Nur77的mRNA水平在青春期前表达量最高,蛋白水平则在性成熟期小鼠睾丸中最高;Nur77干涉后MLTC-1细胞的睾酮合成含量较未干涉组明显降低;Nur77干涉后MLTC-1细胞的StAR和HSD3B的表达较未干涉组明显降低.结论 Nur77在小鼠睾丸组织的表达随年龄变化而变化,这种变化对于维持小鼠体内的睾酮水平可能有重要意义.