BrdU作为脂肪干细胞标记示踪法的可行性

目的:研究BrdU标记猪脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的最佳剂量及时间,探讨其作为干细胞标记示踪方法的可行性.方法:自中华实验猪背部提取脂肪组织,采用贴壁法分离培养ADSCs,取第3代细胞以终浓度分别为10、15、20、25及30μmol/LBrdU进行标记;另一孔不含BrdU作为对照组,分别培养12、24、48、72及96h.免疫荧光法检测各组细胞BrdU标记率,找出BrdU的最佳标记方法,通过台盼蓝排斥试验、MTT及细胞凋亡检测,观察BrdU对ADSCs生长情况的影响.对第3代的ADSCs采用最佳标记方法后更换普通培养基继续培养,适时传代,连续检测第4、5、6、7、8代ADSCs的BrdU标记率.结果:原代培养的ADSCs的形态主要为长梭形,第3代ADSCs经BrdU标记后胞核呈红色荧光,随浓度的升高及时间的延长,BrdU阳性标记率逐渐升高,以终浓度20μmol/LBrdU标记48h后阳性率达90%以上,且连续传5代标记率仍达40%.MTT、台盼蓝排斥试验及细胞凋亡检测发现BrdU对ADSCs生长增殖基本无影响.结论:BrdU标记ADSCs的最佳剂量和时间为20μmol/L和48h,该方法标记率高,对细胞影响小,可用于动态研究ADSCs在移植体内生长、分化.

大鼠原位肝移植的手术技巧

目的 总结大鼠肝移植的手术技巧 ,提高大鼠肝移植模型的稳定性。方法 施行改良的两套管法大鼠肝移植 90例 ,分析手术技巧对大鼠肝移植术后并发症 ,术后 4 8h和术后 1周生存率的影响。结果 供体手术时间 2 5 min,套管准备时间10 m in,供肝与 4℃的乳酸林格式液中保存 6 h,受体手术时间 4 0 min;4 8小时存活率为 94 .4 % ,1周存活率 90 .3%。结论 对现有的大鼠肝移植模型进行有效的改良 。

肝肾联合移植治疗肝肾功能衰竭的体会(附6例报告)

目的总结肝肾联合移植的治疗体会。方法收集6例接受同种异体一期肝肾联合移植术患者的临床资料,其中1例为簇式肝肾联合移植,余5例采用经典式肝肾联合移植。对其手术时间、无肝期、术中出血量、术中使用体外静脉转流或连续性静脉-静脉血液滤过的情况及效果,以及预后进行分析。结果 6例均顺利完成手术。手术时间12～18h,中位数15h。无肝期70～240min,中位数130min。术中出血量5300～18000ml,中位数9525ml。术中采用体外静脉转流1例,使用连续性静脉-静脉血液滤过4例,无转流及滤过1例。行簇式肝肾联合移植的1例患者术后29h出现腹腔出血,经再次手术止血,后发生移植肾无功能并继发腹腔感染,术后10d死亡。1例经典肝肾联合移植患者术后出现移植肝无功能并继发弥散性血管内凝血,术后7d死亡,1例患者因移植物功能障碍术后82个月死亡。其余3例患者术后生存良好,分别存活了1个月、64个月和73个月。结论严格掌握肝肾联合移植的适应证。肝肾联合移植术式以经典式肝肾联合移植为宜。术中应用连续性静脉-静脉血液滤过或体外静脉转流有助于血流动力学稳定。

侧群细胞与肝癌干细胞

肝癌是严重威胁人类生命和健康的一种疾病.其病因和发病机制尚不完全清楚,治疗缺少有效靶点.对肝癌恶性生长、转移及复发机制的研究正在逐渐深入.近年来的研究认为,肿瘤中存在一小群具有自我更新和分化潜能的细胞,即肿瘤干细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源.肝癌中应同样存在这样的一群细胞.侧群(sidepopulation,SP)细胞是肿瘤细胞中一小部分,具备干细胞的多种特性且易于分离.肝癌组织中SP细胞的鉴定和分离有可能找到肝癌干细胞,有助于肝癌的转移和复发机制的研究,并为肝癌治疗提供有效治疗靶点.

基于计算机视觉技术的大鼠肝内血管三维重建

目的:制作大鼠门静脉灌注标本,获取每一层面血管铸型数据,计算机辅助重建门静脉数字模型。方法:选用丙烯颜料为主要成分的填充剂,注入大鼠活体门静脉系统内(20例),得到大鼠门静脉灌注标本。包埋后冰冻切片,每一切面进行拍照,获取血管的层片图像数据。导入软件中进行图像分割与三维重建。结果:该方法能成功地制作出大鼠肝脏血管铸型标本,填充剂可灌注到直径50～100μm的终末小血管。图层间距50μm,每一标本可获取约200～300张层片,并通过三维重建可视化显示。结论:此方法是计算机重建大鼠肝血管树数字模型的一种可行方法。

siRNA干扰ABCG2影响肝癌细胞的耐药及侵袭能力

目的探讨ABCG2在肝癌细胞的耐药及转移侵袭过程中的作用。方法 MTT方法检测siRNA干扰前后三种肝癌细胞MHCC97-L、MHCC97-H、SMMC-7721对多柔比星的药物敏感性;划痕与Transwell实验证实这几种肝癌细胞在siRNA干扰前后的转移、侵袭能力;western-blot、PCR实验证实siRNA转染效率。结果 SMMC-7721、MHCC97-L、MHCC97-H细胞内ABCG2水平呈逐渐上升趋势,对多柔比星的耐受程度也同样逐步上升,同时侵袭能力逐渐增强;siRNA干扰后,MHCC97-L、MHCC97-H两株细胞中ABCG2水平明显降低,对多柔比星敏感性明显增强,侵袭能力明显下降。结论 ABCG2不仅在肝癌细胞的耐药过程中起到重要作用,同时还影响肝癌细胞的转移侵袭能力,靶向干扰ABCG2水平增加了化疗药物敏感性并降低肝癌细胞的转移侵袭能力。

pcDNA3.1(+)-ABCG2真核表达载体的构建与鉴定

目的构建人的ABCG2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中表达。方法以人的癌细胞为材料提取RNA,经反转录得到cDNA,利用PCR方法,根据人ABCG2基因62526032(NM_004827.2)序列信息设计引物,扩增ABCG2基因的CDS序列,将其克隆到pcDNA3.1+表达载体中。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中。采用Western blot法检测外源基因ABCG2的表达。结果PCR扩增片段大小与理论片段大小相符,酶切大小与理论大小相符,阳性的克隆测序鉴定正确,表明人ABCG2基因克隆及真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2构建成功。在蛋白水平,转染72h后的细胞中外源基因ABCG2表达均明显增加。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中进行了表达。

老年牙周病与糖尿病的相关性分析

目的:探讨老年人糖尿病患者牙周疾病的发生情况,以及牙周病与糖尿病之间的相互关系。方法:选择我院就诊的140名同时伴有糖尿病的老年牙周病患者,将其随机分成A、B、C3组,A组86例为实验组,同时进行牙周病与糖尿病的系统治疗。B、C组为对照组,其中B组28例只进行牙周病的治疗,C组26例只进行糖尿病的治疗。结果:牙周治疗效果A组明显高于B组(P<0.05),糖尿病的治疗效果A组高于C组(P>0.05)。结论:老年牙周病和糖尿病之间存在相关性,糖尿病治疗与牙周病治疗之间相互影响。

内皮祖细胞：肿瘤靶向治疗的潜在载体

目前恶性肿瘤已成为世界上发病率和死亡率最高的疾病之一,且发病率仍处于上升趋势.对于恶性肿瘤,特别是晚期肿瘤尚缺乏较为有效的治疗手段.长期以来,外科手术、化疗和放疗一直是肿瘤治疗的主要方式.随着放射技术和相关生物学的发展,放疗逐渐成为肿瘤治疗的基本方法之一,约有60%的患者在病程的不同时期需要接受放射治疗.

内皮祖细胞参与肿瘤血管发生的问题与展望

血管新生对肿瘤至关重要，肿瘤生长、侵袭及转移均伴随着血管新生。研究证实，肿瘤可以通过募集骨髓源性内皮祖细胞（EPCs），分化为血管内皮，产生新生血管，促进肿瘤生长。随着本实验室和其他研究小组的不断研究，我们对EPCs参与血管发生的机制的了解逐步深入。越来越多的动物实验证实，EPCs在肿瘤的发生、发展和转移过程中扮演重要角色。

腹腔镜胆总管探查取石并一期缝合治疗胆总管结石的疗效研究

目的 探讨腹腔镜胆总管探查取石并一期缝合治疗胆总管结石的临床疗效和安全性.方法 回顾性分析2010年10月-2016年12月无锡市锡山人民医院215例胆总管结石患者行腹腔镜胆总管探查术的临床资料,依据手术方式不同分为两组:腹腔镜胆总管探查取石+胆总管一期缝合术(一期缝合组,n=122)和腹腔镜胆总管探查取石+T管引流术(T管引流组,n=93).观察比较两组患者手术时间、术中出血量、术后镇痛、术后1周肝功能情况、胃肠道功能恢复时间、住院时间、住院费用及相关并发症发生情况,两组患者术后门诊、电话随访6个月.计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,组间比较采用t检验,计数资料以例数表示,组间比较使用x2检验.结果 术后住院时间:一期缝合组和T管引流组分别为(8.5±1.9)d和(12.5±2.4)d,两组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);住院费用:一期缝合组和T管引流组分别为(1 200±300)元和(1 400±500)元,两组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);术后镇痛:一期缝合组和T管引流组分别为11例和32例,两组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).两组患者手术时间、术中失血量、胃肠道恢复时间、术后1周肝功能、术后胆漏等差异无统计学意义(P＞0.05);术后随访6个月,两组均无远期并发症的发生.结论 在良好的操作技术和严格把握手术指征的情况下,腹腔镜胆总管探查取石并一期缝合安全可行,具有微创外科、加速康复外科的优势.

精准肝右静脉回流区扩大右后叶切除术在功能性残余肝体积比处于临界状态肝癌中的应用

回顾性分析徐州医科大学附属宿迁医院术前拟行规则性右半肝切除的5例原发性肝癌患者的临床资料,术前评估功能性残余肝体积比(SRLVR)处于临界状态,均在术中改行精准肝右静脉回流区的扩大右后叶切除术。术后无出血、胆瘘等并发症发生,无肝功能衰竭,无死亡。术后1周增强CT扫描测算较半肝切除多保留肝脏体积(212.4±19.1)ml。笔者认为在SRLVR临界的肝癌患者中实施精准肝右静脉回流区的扩大右后叶切除术可以在保证肿瘤根治性和手术精准化的同时又可以确保安全性,对于不能够耐受门静脉栓塞或者联合肝脏分割和门静脉结扎的分阶段肝切除术的患者不失为一种治疗选择。